李昱，葛陽清

（湖南師范大學醫(yī)學院附屬岳陽醫(yī)院，岳陽市二醫(yī)院婦科，湖南 岳陽 414000）

宮頸癌是一種十分常見的女性惡性腫瘤，在全世界女性惡性腫瘤中位于第2 位，且近年來，宮頸的發(fā)病年齡呈年輕化趨勢，發(fā)病率和死亡率也有逐漸升高趨勢，嚴重威脅女性身體健康[1]。由正常的宮頸組織發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)瘤變至為宮頸癌的過程中，多基因、多因素起協(xié)同作用。為給診療宮頸癌提供臨床依據(jù)，本研究收集宮頸癌標本85份、正常宮頸組織標本30份，并采用免疫組化法分別對癌變標本、正常組織標本中的PTEN、KDR、Beclin1 表達水平進行檢測，分析與宮頸癌臨床病理的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 收集2013年6月至2015年6月本院住院手術(shù)或者門診活檢的病理標本共115份，其中宮頸癌標本85份、正常宮頸組織30 份。宮頸癌患者年齡23～73 歲，平均（43.18±7.93）歲；宮頸組織正常者年齡24～75 歲，平均（45.23±8.12）歲。宮頸癌中鱗癌63例，腺癌22例。臨床分期按照FIGO分期，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為17例、43例、19 例、6 例。30 例宮頸組織正常者經(jīng)病理檢查確診為子宮肌瘤。

1.2 檢測方法 兔抗人PTEN單抗、鼠抗人KDP單抗、兔抗人Beclin1 多抗，試劑采購于武漢金開瑞生物工程有限公司，于4 ℃冰箱保存，工作濃度為1∶75。使用免疫組化SP法，離體組織保存于10%福爾馬林，石蠟包埋，組織薄層切片，使用二甲苯進行脫蠟，再進行梯度乙醇脫水，免疫組化染色過程參照說明書，DAB顯色，使用蘇木精再次染色，使用中性樹膠封片，PBS 代替一抗當作陰性對照，生物公司提供的陽性切片作為陽性對照。

1.3 免疫組化結(jié)果判定 使用半定量積分法對表達情況進行判定，從染色強度、陽性細胞占比進行計分判定：①染色強度：未著色、淺著色、重度著色、深著色分別計為0 分、1 分、2分、3分；②陽性細胞百分比：隨機選取5個高倍鏡（400×）視野，在每個視野內(nèi)計數(shù)細胞100個，計算平均陽性百分比，陽性細胞占比＜5%、5%～24%、25%～49%、≥50%分別計為0 分、1分、2分、3分。依據(jù)以上兩項分數(shù)之和將PTEN、KDR、Beclin1的檢測結(jié)果劃分為4 級：陰性（-）為0 分，弱陽性（+）為1～2分，陽性（++）為3～4分，強陽性（+++）為5～6分。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用百分比（%）表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN、KDR、Beclin1的表達 PTEN在癌變組織、正常宮頸組織的陽性表達率分別為37.65%（32/85）、100%（30/30），KDR在癌變組織、正常宮頸組織的陽性表達率分別為68.24%（58/85）、10.00%（3/30），Beclin1 在癌變組織、正常宮頸組織的陽性表達率分別為29.41%（25/85）、73.33%（22/30）；PTEN、Beclin1在癌變組織的陽性表達率明顯低于正常宮頸組織（P＜0.05），KDR 癌變組織的陽性表達率明顯高于正常宮頸組織（P＜0.05）。

2.2 PTEN、KDR、Beclin1 在宮頸癌中的表達和臨床病理的關(guān)系 PTEN、KDR、Beclin1 的表達水平與癌變組織的分化程度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與年齡、臨床分期、組織學類型無關(guān)，見表1～3。

表1 PTEN的表達水平和臨床病理的關(guān)系Table 1 The expression of PTEN and its relationship with clinicopathology

表2 KDR的表達水平和臨床病理的關(guān)系Table 2 The expression of KDR and its relationship with clinicopathology

表3 Beclin1的表達水平和臨床病理的關(guān)系Table 3 The expression of Beclin1 and its relationship with clinicopathology

3 討論

PTEN是人類最早發(fā)現(xiàn)的既有脂質(zhì)磷酸酶活性又有蛋白磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN 廣泛表達于人體的正常組織，該基因的缺失、突變、低表達和惡性腫瘤的預(yù)后、發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Sharad Purohit 等[2]對宮頸癌的臨床病理和PTEN的關(guān)系進行研究，發(fā)現(xiàn)宮頸癌是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌變浸潤程度、組織分化程度和PTEN蛋白的表達關(guān)系密切，表明PTEN 在宮頸癌病變的進展中發(fā)揮一定的作用，判定腫瘤的進展情況及惡性程度的作用。李海平等[3]也進行類似的研究，結(jié)果顯示，不同臨床分期的宮頸癌和PTEN 的異常甲基化、失活有相關(guān)性。本研究中，免疫組化法檢測的PTEN陽性呈棕黃色顆粒狀，主要存在于細胞膜或者細胞漿；其在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的陽性表達率分別為37.65%（32/85）、100%（30/30），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在臨床病理中，組織分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移和PTEN的陽性表達有關(guān)（P＜0.05）。表明PTEN 蛋白表達水平的降低和發(fā)生宮頸癌密切相關(guān)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌的分化過程中發(fā)揮一定的作用。

KDR是血管內(nèi)皮細胞生長因子受體家族中的其中之一，血管內(nèi)皮細胞生長因子發(fā)揮其生物活性促進血管內(nèi)皮細胞的增殖主要通過與KDR的結(jié)合實現(xiàn)[4]。KDR的控制基因位點在人染色體4q31.2～q32，全長含有氨基酸1 356 個[5]，能誘導血管的生成、提高血管的通透性[6]。近年來，多項研究[7-9]顯示子宮內(nèi)膜癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的病程進展、預(yù)后和血管內(nèi)皮生長因子及其相應(yīng)受體密切相關(guān)。有報道[10-11]顯示在部分女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤、甲狀腺癌的細胞內(nèi)均能檢測出KDR的表達。在宮頸癌中也能檢測出KDR 的表達，但是其表達意義仍無一致結(jié)論[12]。本研究中，KDR在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的陽性表達率分別為68.24%（58/85）、10.00%（3/30），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在臨床病理中，組織分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移和KDR的陽性表達有關(guān)（P＜0.05）。表明PTEN蛋白表達水平的升高會增加淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、宮頸癌低分化的發(fā)生率。

Beclin1是一種正向調(diào)控自噬的基因，能調(diào)節(jié)細胞的自噬過程，作為一種抑癌基因在腫瘤的病情進展中發(fā)揮重要的作用[13]。Beclin1抑制腫瘤主要通過如下途徑：防止和癌相關(guān)的基因發(fā)生突變；對腫瘤細胞有誘導作用，使其發(fā)生自噬性凋亡；對腫瘤組織的血管生成有抑制作用[14]。David等[15]使用宮頸癌細胞在體外進行腸轉(zhuǎn)移培養(yǎng)，結(jié)果顯示Beclin1能抑制轉(zhuǎn)移細胞株Caski 細胞的轉(zhuǎn)移及入侵，這和Beclin1對細胞增殖的抑制作用相關(guān)。另有研究[16]顯示，子宮頸癌的病情進展和Beclin1 的表達水平降低有關(guān)。本研究中，Beclin1 在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的陽性表達率分別為29.41%（25/85）、73.33%（22/30），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在臨床病理中，組織分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移和Beclin1 的陽性表達有關(guān)（P＜0.05）。表明Beclin1 蛋白表達水平的降低使淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、宮頸癌出現(xiàn)低分化的的概率增大。

綜上所述，在宮頸癌組織中PTEN、Beclin1 的表達水平明顯低于正常宮頸組織（P＜0.05），而KDR 的表達水平則明顯高于正常宮頸組織（P＜0.05）。在低、中分化的癌細胞中，PTEN、Beclin1 的陽性表達率明顯低于高分化的癌細胞，而KDR 的陽性表達率則明顯高于高分化的癌細胞（P＜0.05），表明PTEN、Beclin1的低表達、KDR的高表達會對腫瘤的惡性程度升高有促進作用；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌細胞中PTEN、Beclin1的陽性表達率明顯低于沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌細胞，而KDR 的陽性表達率則明顯高于沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌細胞（P＜0.05），表明PTEN、Beclin1的低表達、KDR的高表達和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。