顧 琦，魏旭超，劉 露，梁 瑩，李 健，董 潔，蔡徐藝，顧 薇,，陳 軍,

1.南京中醫(yī)藥大學藥學院，江蘇 南京 210023

2.江蘇省中醫(yī)外用藥開發(fā)與應(yīng)用工程研究中心，江蘇 南京 210023

3.江蘇省中藥炮制重點實驗室，江蘇 南京 210023

4.南京中醫(yī)藥大學 江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023

大部分作用于皮膚屏障的中藥揮發(fā)油均來自于辛味中藥[1]，符合“辛開腠理”藥性。課題組前期對已報道的34 種有促滲作用的辛味中藥揮發(fā)油進行數(shù)據(jù)挖掘[2]，通過實驗對21 種辛味中藥揮發(fā)油的透皮促滲效果進行比較[3]，并考察了“四氣”對揮發(fā)油透皮促滲效果的影響[1,4]，發(fā)現(xiàn)辛味中藥揮發(fā)油透皮促滲能力排序為熱性＞溫性＞寒涼，與清代外治大家吳尚先“膏藥熱者易效”的觀點一致[5]。揮發(fā)油成分是芳香中藥中不可或缺的功效物質(zhì)，中藥揮發(fā)油作為透皮促滲劑備受重視[6-7]。目前僅遵循化學促滲劑的研究路徑，以自身的透皮促滲作用進行復(fù)方配伍[8]忽略了中藥揮發(fā)油自身的藥理作用，這種“重輔輕藥”的研究模式并不適用于中藥揮發(fā)油的外用研究。目前的外用中藥揮發(fā)油以辛溫中藥揮發(fā)油品種最多，單一品種以辛涼的薄荷油應(yīng)用最多，而辛熱中藥揮發(fā)油應(yīng)用近乎空白。基于此，本研究根據(jù)“膏藥熱者易效”的指導(dǎo)思想，對高良姜、吳茱萸、胡椒、干姜、肉桂5 種辛熱中藥揮發(fā)油進行成分分析與挖掘，并通過網(wǎng)絡(luò)藥理學與分子對接研究，探尋辛熱中藥揮發(fā)油外用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用靶點，闡釋其藥性顯“熱”的分子機制，為辛熱中藥揮發(fā)油的開發(fā)與利用提供新的思路。

1 材料

1.1 藥材

高良姜、干姜、防風、花椒、八角茴香、小茴香、胡椒、蓽澄茄、吳茱萸、荊芥、肉桂、丁香、木香、藁本（批號分別為171208、180117、171224、171122、171217、171209、170920、171227、170620、180127、171218、170711、180112、171119）均購自蘇州市天靈中藥飲片有限公司；乳香（批號16010500）購自北京仟草中藥飲片有限公司。以上飲片經(jīng)南京中醫(yī)藥大學藥學院劉圣金副教授分別鑒定為姜科植物高良姜Alpinia officinarumHance 的干燥根莖、姜科植物姜Zingiber officinaleRosc.的干燥根莖、傘形科植物防風Saposhnikovia divaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根、蕓香科植物花椒Zanthoxylum bungeanumMaxim.的干燥成熟果皮、木蘭科植物八角茴香Illicium verumHook.f.的干燥成熟果實、傘形科植物茴香Foeniculum vulgareMill.的干燥成熟果實、胡椒科植物胡椒Piper nigrumL.的干燥成熟果實、樟科植物山雞椒Litsea cubeba(Lour.)Pers.的干燥成熟果實、蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.) Benth.的干燥近成熟果實、唇形科植物荊芥Schizonepeta tenuifoliaBriq.的干燥地上部分、樟科植物肉桂Cinnamomum cassiaPresl 的干燥樹皮、桃金娘科植物丁香Eugenia caryophyllataThunb.的干燥花蕾、菊科植物木香Aucklandia lappaDecne.的干燥根、傘形科植物藁本Ligusticum sinenseOliv.的干燥根、橄欖科植物乳香樹Boswellia carteriiBirdw.樹皮滲出的樹脂，均符合《中國藥典》2015年版標準。

1.2 藥品與試劑

無水硫酸鈉（批號170328041V）購自南京化學試劑有限公司；醋酸乙酯（批號20171102）購自永華化學科技有限公司。

1.3 儀器

PTHW 型調(diào)溫電熱套（南通市通州申通電熱器廠）；TGL-16B 型高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；BAS-124S 型分析天平、BT-52S 型分析天平（德國賽多利斯股份有限公司）；WAY-2S 型阿貝折光儀（上海精密科學儀器有限公司）；7890A-5975C 型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）；DHG9123A型恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；HH-4 型恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

1.4 數(shù)據(jù)庫與軟件

Swiss Target Prediction 網(wǎng)站（http://new.swisstargetprediction.ch）、中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP，http://lsp.nwu.edu.cntcmspsearch.php）、TIGER 數(shù)據(jù)庫（http://bioinfo.wilmer.jhu.edu/tiger）、Uniprot 數(shù)據(jù)庫（http://www.uniprot.org）、京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路數(shù)據(jù)庫（http://www.genome.jp/kegg）、STRING 數(shù)據(jù)庫（http://string-db.org）、DAVID 數(shù)據(jù)庫（https://david.ncifcrf.gov/home.jsp）、PubChem 數(shù)據(jù)庫（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）、Cytoscape 3.7.0 軟件。

2 方法

2.1 辛熱、辛溫中藥揮發(fā)油的制備

稱取適量中藥飲片，粉碎后加入圓底燒瓶中，加入10～15 倍體積的蒸餾水，連接揮發(fā)油提取器、冷凝管，自冷凝管上端加蒸餾水至溢出揮發(fā)油提取器支口，浸泡0.5～1.0 h，加熱保持微沸至揮發(fā)油體積無明顯變化，停止加熱。室溫冷卻，用棕色玻璃瓶接收揮發(fā)油，加入適量無水硫酸鈉脫水，于4℃避光密封保存?zhèn)溆肹1]。

2.2 基于氣相色譜-質(zhì)譜（gas chromatographymass spectrometry，GC-MS）聯(lián)用技術(shù)的中藥揮發(fā)油成分分析

2.2.1 供試品的制備 精密稱定中藥揮發(fā)油0.10 g于10 mL 量瓶中，用醋酸乙酯定容。12 000 r/min離心10 min，取上清液進樣分析。

2.2.2 GC-MS 條件 HP-5ms 色譜柱（5%苯甲基聚硅氧烷石英毛細管柱，30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣為氦氣；體積流量為1 mL/min；EI 離子源；電離能量為70 eV；離子源溫度為230 ℃；進樣口溫度為250 ℃；進樣體積為1 μL；分流進樣，分流比50∶1（木香油與肉桂油的分流比為40∶1）[1]。

2.3 辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類成分與靶點網(wǎng)絡(luò)及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)互作（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

選取5 種辛熱中藥揮發(fā)油（高良姜油、肉桂油、胡椒油、吳茱萸油、干姜油）中倍半萜類成分，基于TCMSP 和Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫進行潛在活性成分及靶點篩選，用Uniprot 數(shù)據(jù)庫進行基因名校正。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)辛熱中藥揮發(fā)油外用給藥時，倍半萜類成分相較于其他成分更傾向于滯留在皮內(nèi)[9]，因此本研究同時用TIGER 數(shù)據(jù)庫篩選在皮膚中表達的蛋白，最后運用Cytoscape 軟件構(gòu)建“藥材-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)。采用STRING 數(shù)據(jù)庫對潛在關(guān)鍵靶點建立PPI 網(wǎng)絡(luò)。

2.4 統(tǒng)計學分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0 軟件分析，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較用t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 辛熱與辛溫中藥揮發(fā)油的差異成分測定

選擇透皮促滲性能較優(yōu)的辛熱類藥材高良姜、干姜、肉桂、吳茱萸、胡椒，辛溫類藥材防風、花椒、八角茴香、小茴香、蓽澄茄、荊芥、丁香、木香、藁本、乳香，分別提取得到辛熱中藥揮發(fā)油（高良姜油、干姜油、肉桂油、吳茱萸油、胡椒油）和辛溫中藥揮發(fā)油（防風油、花椒油、八角茴香油、小茴香油、蓽澄茄油、荊芥油、丁香油、木香油、藁本油、乳香油）。GC-MS 成分分析[3]如圖1中所示，辛熱、辛溫中藥揮發(fā)油中主要含倍半萜類、單萜類、芳香族類化合物，其中高良姜油、干姜油、吳茱萸油、胡椒油主要由倍半萜類、單萜類化合物組成，肉桂油主要由倍半萜類、芳香族類化合物組成，防風油、花椒油、蓽澄茄油、荊芥油主要由單萜類化合物組成，八角茴香油、小茴香油、丁香油、藁本油主要由芳香族類化合物組成，乳香油、木香油含有較多脂肪族及脂肪酸類化合物。

圖1 辛溫、辛熱中藥揮發(fā)油成分分布Fig.1 Component distribution in “warm” and “hot” pungent CMM

辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類成分質(zhì)量分數(shù)高于辛溫中藥揮發(fā)油，其中辛熱中藥揮發(fā)油中質(zhì)量分數(shù)大于1%的倍半萜類成分有14 個，如表1所示，分別為β-石竹烯、α-muurolene、吉馬烯、β-欖香烯、δ-欖香烯、β-芹子烯、α-胡椒烯、δ-杜松烯、γ-muurolene、α-香檸檬烯、姜烯、β-倍半水芹烯、β-甜沒藥烯、α-法呢烯。如表2所示，β-石竹烯為5種辛熱中藥揮發(fā)油的共性倍半萜類成分，且其質(zhì)量分數(shù)最高。

表1 5 種辛熱中藥揮發(fā)油中質(zhì)量分數(shù)大于1%的倍半萜類化合物Table 1 Sesquiterpenoids with mass fraction greater than 1% of essential oils of five “hot” pungent CMM

表2 辛熱中藥揮發(fā)油中的共性倍半萜類化合物信息Table 2 Information of common sesquiterpees in essential oils of “hot” pungent CMM

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)倍半萜類成分可能是決定辛熱中藥揮發(fā)油透皮促滲能力的關(guān)鍵成分[1]，溫性的生姜炮制成熱性的干姜后，揮發(fā)油中倍半萜類成分質(zhì)量分數(shù)增加且透皮促滲能力增強[10]。研究發(fā)現(xiàn)，唇形科中藥物質(zhì)成分與藥性間存在相關(guān)性，其中側(cè)柏酮、水芹烯、γ-蓽澄茄烯、3-蒈烯、紫蘇醛、蒔蘿油腦與熱性的關(guān)聯(lián)最為密切，其中多個成分為倍半萜類成分[11]。

綜上，倍半萜類成分可能是辛熱中藥揮發(fā)油區(qū)別于辛溫中藥揮發(fā)油的關(guān)鍵物質(zhì)基礎(chǔ)，從透皮促滲作用和藥理活性兩方面產(chǎn)生“熱者易效”的作用。因此，基于辛熱中藥（高良姜、干姜、肉桂、吳茱萸、胡椒）揮發(fā)油中的倍半萜類成分開展后續(xù)實驗。

3.2 辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類成分與靶點網(wǎng)絡(luò)的分析

“藥材-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)如圖2所示，辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類成分的潛在作用靶點包括前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（prostaglandin G/H synthase 2，PTGS2）、核受體共激活蛋白2（nuclear receptor coactivator 2，NCOA2）、PTGS1、類視黃酸X 受體α（retinoic acid X receptor α，RXRA）、毒蕈堿型乙酰膽堿受體3（cholinergic receptor muscarinic3，CHRM3）、γ-氨基丁酸受體α6（gamma-aminobutyric acid receptor α6，GABRA6）、單胺氧化酶 B（monoamine oxidase B，MAOB）、過氧化物酶體增殖劑激活受體α（peroxisome proliferator-activated receptor alpha，PPARA ）、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、γ-氨基丁酸受體α5（gamma-aminobutyric acid receptor α5，GABRA5）。

3.3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析

如圖3和表3所示，辛熱中藥揮發(fā)油外用潛在靶點主要聚焦在產(chǎn)熱（靶點包括NCOA2）、脂代謝（靶點包括PPARA、RXRA、NCOA2）及抗炎（靶點包括PTGS1、PTGS2、IL-6），提示產(chǎn)熱、減脂、抗炎為辛熱中藥揮發(fā)油倍半萜類成分的主要藥理作用，其對應(yīng)的化合物（β-石竹烯、α-muurolene、吉馬烯、β-欖香烯、δ-欖香烯、β-芹子烯、α-胡椒烯等）為潛在的關(guān)鍵作用成分。研究發(fā)現(xiàn)，倍半萜類成分具有顯著的藥理活性，如β-甜沒藥烯具有抗腫瘤活性[12]，β-石竹烯具有抗炎、抗癌、鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護、抗腫瘤、調(diào)血脂和防治肝損傷作用[13]，β-欖香烯、α-胡椒烯、姜烯等具有抗腫瘤、抗炎的作用[14-16]。

圖2 5 種辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類成分與靶點網(wǎng)絡(luò)圖Fig.2 Network of sesquiterpenoids and targets in essential oils of five “hot” pungent CMM

圖3 5 種辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類成分潛在關(guān)鍵靶點的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 PPI network of potential key target corresponding to sesquiterpenoids in essential oils of five “hot” pungent CMM

3.3.1 辛熱中藥揮發(fā)油作用于 NCOA2 靶點產(chǎn)熱 研究發(fā)現(xiàn)，NCOA2?/?小鼠適應(yīng)性生熱增強，能量消耗增加，胰島素敏感性顯著增加，對肥胖具有抵抗力；NCOA1?/?小鼠能量消耗減少，容易肥胖；NCOA2/NCOA1 在高脂飲食中可用來評價機體脂肪儲存和產(chǎn)熱狀況[17]。NCOA2?/?小鼠肝臟中能量代謝增加，脂肪酸降解和糖酵解途徑上調(diào)，脂肪酸、膽固醇和類固醇生物合成途徑下調(diào)[18]，表明抑制NCOA2 可導(dǎo)致細胞能量消耗增加，脂類合成下降。由此可見，辛熱中藥揮發(fā)油外用作用于NCOA2 可能為其藥性顯熱的分子機制。

以生姜炮制為干姜、藥性由微溫轉(zhuǎn)熱為例[9]，二者成分主要為倍半萜類與單萜類化合物，如表4所示，生姜炮制成干姜后倍半萜類化合物質(zhì)量分數(shù)上升，單萜類化合物質(zhì)量分數(shù)降低，與本研究中辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類化合物質(zhì)量分數(shù)高于辛溫中藥揮發(fā)油一致。如表5所示，干姜揮發(fā)油中與NCOA2 有對應(yīng)關(guān)系的各成分總質(zhì)量分數(shù)（68.03%）高于生姜揮發(fā)油中各成分總質(zhì)量分數(shù)（48.22%），其中倍半萜類化合物與NCOA2 的對應(yīng)率高于單萜類化合物，75.29%倍半萜類化合物與NCOA2 存在預(yù)測對應(yīng)關(guān)系，20.55%單萜類化合物與NCOA2 存在預(yù)測對應(yīng)關(guān)系，表明NCOA2 可能是生姜炮制后藥性由微溫轉(zhuǎn)變?yōu)闊岬姆肿訖C制，而其中的倍半萜類化合物是其藥性變熱的主要功效成分。

表3 5 種辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類化合物及其對應(yīng)靶點信息Table 3 Information of sesquiterpenoids and targets in essential oils of five “hot” pungent CMM

表4 生姜炮制前后揮發(fā)油中倍半萜和單萜成分的差異及與NCOA2 的對應(yīng)關(guān)系Table 4 Difference of sesquiterpenoids and monoterpenoids in essential oil of Zingiberis Rhizoma before and after processing and corresponding relationship with NCOA2

表5 生姜炮制前后揮發(fā)油中與NCOA2 有對應(yīng)關(guān)系的化合物Table 5 Compounds corresponding to NCOA2 in essential oils of Zingiberis Rhizoma before and after processing

3.3.2 辛熱中藥揮發(fā)油作用于 PPARA-RXRANCOA2信號軸影響脂質(zhì)代謝 PPAR可調(diào)控參與脂肪和糖代謝相關(guān)基因的表達，從而調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)和葡萄糖穩(wěn)態(tài)[19-20]。PPARA 在細胞核內(nèi)與RXR 形成異二聚體，與亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸等多不飽和脂肪酸結(jié)合后被激活，PPARA構(gòu)象改變，釋放輔抑制因子，并結(jié)合輔活化因子（包括NCOA2），從而激活下游基因[21-22]。PPARA 調(diào)控脂肪酸轉(zhuǎn)運、脂肪酸氧化、三酰甘油（triglycerides，TG）清除、脂蛋白生成和膽固醇穩(wěn)態(tài)，其活性受RXRA 和NCOA2 影響，在脂代謝中發(fā)揮著重要作用。脂肪主要存在于皮下組織，表皮中含有豐富的必須脂肪酸如亞油酸、花生四烯酸等，因此，辛熱中藥揮發(fā)油可能通過作用于 PPARA-RXRANCOA2 信號軸，改變脂肪酸分解代謝相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄速度，從而調(diào)控脂質(zhì)代謝。

3.3.3 辛熱中藥揮發(fā)油作用于PTGS2、PTGS1 和IL-6 靶點發(fā)揮抗炎作用 研究發(fā)現(xiàn)，辛熱中藥揮發(fā)油中的倍半萜類化合物具有較好的抗炎作用，PTGS1 和PTGS2 是非甾體抗炎藥的作用靶點[23]。花生四烯酸在PTGS 作用下，依次轉(zhuǎn)變?yōu)榍傲邢偎刂虚g代謝產(chǎn)物前列腺素G2和前列腺素H2，然后經(jīng)前列腺素合成酶生成各種有生物活性的前列腺素。IL-6 是巨噬細胞分泌的急性促炎細胞因子，可通過作用于JAK-STAT 信號通路發(fā)揮作用；血清中IL-6水平與脂肪量呈正相關(guān)，常被用作肥胖炎癥的標志物。研究表明，前列腺素可促進IL-6 的合成，選擇性PTGS2 阻斷劑可顯著降低IL-6 的表達。辛熱中藥揮發(fā)油可能通過作用于PTGS2、PTGS1 和IL-6靶點發(fā)揮抗炎作用。

4 討論

中藥“四氣”反映藥物對機體陰陽盛衰、寒熱變化的作用傾向，物質(zhì)成分是其藥性的基礎(chǔ)[10,24-25]，藥物本身蘊涵不同形式或不同量值的能量或熱量物質(zhì)，內(nèi)生致熱或相關(guān)物質(zhì)作用于機體后能產(chǎn)生一系列生理或病理反應(yīng)，這些反應(yīng)大多伴隨能量轉(zhuǎn)移和熱變化[26]。研究表明，萜類和揮發(fā)油類化合物是辛熱中藥中出現(xiàn)頻次最高的化合物，提示萜類和揮發(fā)油類化合物是中藥藥性顯熱的潛在物質(zhì)基礎(chǔ)[25]。本研究結(jié)果表明，辛熱中藥揮發(fā)油外用主要涉及產(chǎn)熱相關(guān)的NCOA2 靶點及脂代謝相關(guān)的PPARA、RXRA、NCOA2 靶點及抗炎相關(guān)的PTGS1、PTGS2、IL-6 靶點。本研究揭示了倍半萜類化合物是辛熱中藥揮發(fā)油區(qū)別于辛溫中藥揮發(fā)油的關(guān)鍵物質(zhì)基礎(chǔ)，同時透皮促滲能力更強[2-3]，外用可發(fā)揮“膏藥熱者易效”的作用，為辛熱中藥揮發(fā)油的藥性研究、藥理活性及分子機制提供理論依據(jù)。

4.1 辛熱中藥揮發(fā)油作用于機體藥性顯熱的分子機制

《中國藥典》中高良姜、干姜、胡椒、吳茱萸、肉桂5 種辛熱中藥均具“散寒”功效，同時輔以“溫胃”“溫肺”“溫中”“溫經(jīng)”“回陽”“助陽”“補火”等描述。干姜對正常動物體溫無影響，但其揮發(fā)油能抑制啤酒酵母引起的大鼠體溫升高[27-28]?；诖x組學研究發(fā)現(xiàn)，干姜油對干酵母和內(nèi)毒素誘導(dǎo)的熱病證候模型均具有良好的解熱作用[29]。家兔iv 吳茱萸乙醇提取物可使其體溫上升[30]。然而辛熱揮發(fā)油作用于機體導(dǎo)致能量、熱量代謝變化的機制尚不明確，本研究中倍半萜類化合物與產(chǎn)熱關(guān)鍵靶點NCOA2 的高頻對應(yīng)關(guān)系為辛熱中藥揮發(fā)油作用于機體藥性顯熱的分子機制提供依據(jù)。

4.2 辛熱中藥揮發(fā)油影響脂質(zhì)代謝的分子機制

研究表明，多種辛熱中藥及其揮發(fā)油能夠調(diào)節(jié)脂代謝，具有調(diào)血脂、抗脂質(zhì)過氧化等藥理作用。肉桂可改善糖脂代謝[31]，肉桂揮發(fā)油能夠減少肝細胞脂肪沉積[32]，并能有效改善胰島素抵抗小鼠糖脂代謝，其作用與降低血清中瘦素、抵抗素水平并增加胰島素敏感性有關(guān)[33]。肉桂醇提物中的脂溶性部位能明顯降低糖尿病小鼠的血糖和血脂水平[34]。吳茱萸提取物和吳茱萸堿可明顯降低血清中游離脂肪酸、TG 水平，增強腎周脂肪降解作用，達到辣椒素樣減肥作用[35]。高良姜水提物通過抑制胰脂酶的活性來抑制小腸對脂肪的吸收，從而降低血清中TG、總膽固醇（total cholesterol，TC）和低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平[36]。高良姜總黃酮通過降低肥胖大鼠血清中瘦素、神經(jīng)肽Y 水平，從而影響膽固醇代謝，降低肥胖大鼠血清TC、TG 和LDL-C 水平[37]。高良姜乙醇提取物能夠通過抑制肝臟和脂肪組織CCAAT 增強子結(jié)合蛋白 α（CCAAT/enhancer binding protein α，C/EBPα）、脂肪酸合成酶、膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1 （ sterol regulatory element-binding protein-1，SREBP-1）和PPARA 蛋白表達，從而降低脂肪含量[38]。本研究結(jié)果顯示，PPARA-RXRA-NCOA2 信號軸可能為中藥揮發(fā)油影響細胞脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵通路。

4.3 辛熱中藥揮發(fā)油發(fā)揮抗炎作用的分子機制

研究表明，多種芳香精油均具有抗炎活性[39]。肉桂能抑制炎癥因子的釋放，調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)通路，具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用；肉桂醛和鄰-甲氧基肉桂醛是肉桂的主要抗炎活性成分，也是肉桂揮發(fā)油中質(zhì)量分數(shù)較高的成分[40]；肉桂醛可以緩解脂多糖誘導(dǎo)的全身炎癥反應(yīng)綜合征小鼠的癥狀[41]；反式肉桂醛為肉桂葉揮發(fā)油中的抗炎活性成分，倍半萜類化合物T-杜松醇和α-杜松醇為混合型揮發(fā)油中的抗炎活性成分[42]。干姜的醚提取物、水提取物、醇提取物均具有明顯的抗炎作用[43-44]；干姜及其揮發(fā)油可使幼年小鼠胸腺萎縮，使成年大鼠腎上腺中維生素C 水平顯著降低，與可的松作用類似，表明干姜醚提物可能通過促進腎上腺皮質(zhì)激素釋放發(fā)揮抗炎作用[45]；干姜的鎮(zhèn)痛、抗炎成分主要為脂溶性姜酚類化合物[44]和倍半萜成分姜烯[15]，其中6-姜酚可以抑制炎癥細胞內(nèi)磷酸二酯酶4（phosphodiesterase 4，PDE4）表達起到抗炎作用[46]。吳茱萸揮發(fā)油具抗炎、鎮(zhèn)痛的作用[47]，吳茱萸揮發(fā)油對小鼠耳腫脹模型的炎癥反應(yīng)[48]與醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)[49]均具有抑制作用；檸檬苦素具有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、神經(jīng)保護、護肝等藥理作用[50]。在二甲苯致小鼠耳腫脹實驗、醋酸提高小鼠腹腔毛細血管通透性實驗和角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實驗中，高良姜水提物表現(xiàn)出明顯的抗炎作用，高良姜醚提物活性較低[51]，高良姜揮發(fā)油具有較好的抗炎及鎮(zhèn)痛作用；高良姜氯仿提取物能抑制前列腺素合成酶和磷脂酶A2 活性，阻礙花生四烯酸代謝成前列腺素，發(fā)揮鎮(zhèn)痛、抗炎作用[52]。胡椒油對二甲苯所致的小鼠耳腫脹有顯著的抑制作用，能夠明顯延長熱板實驗痛閾值[53]。本研究結(jié)果顯示，辛熱中藥揮發(fā)油可能通過PTGS1、PTGS2 和IL-6 等炎癥靶點發(fā)揮抗炎作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，辛熱中藥揮發(fā)油中倍半萜類化合物對藥性的解釋與其對脂質(zhì)代謝、抗炎的影響密不可分，熱、脂、炎癥之間具有一定的聯(lián)系，如前列腺素E2是重要的炎性介質(zhì)，也是體內(nèi)重要的脂質(zhì)活性分子，可調(diào)節(jié)脂肪代謝，是目前研究最多的中樞性體溫正調(diào)節(jié)介質(zhì)之一。肖小河等[54]的中藥寒熱藥性“效應(yīng)-物質(zhì)-靶標”假說指出，藥性是中藥的特征組分作用于機體的共性靶標而產(chǎn)生生物效應(yīng)的高度概括，即中藥藥性的傳統(tǒng)功效包括生物效應(yīng)、物質(zhì)基礎(chǔ)和網(wǎng)絡(luò)靶標3 要素，共同構(gòu)成一個統(tǒng)一的有機整體。本研究中，β-石竹烯、α-muurolene、吉馬烯、β-欖香烯、δ-欖香烯、β-芹子烯、α-胡椒烯等倍半萜類化合物為辛熱中藥揮發(fā)油的特征組分，也是區(qū)別于辛溫中藥揮發(fā)油的關(guān)鍵物質(zhì)基礎(chǔ)，其對PPARA-RXRA-NCOA2 信號軸與PTGS2、PTGS1、IL-6 等炎性因子的潛在作用為辛熱中藥揮發(fā)油的共性靶標，從而產(chǎn)生產(chǎn)熱、減脂、抗炎作用。通過本研究，一方面可以闡明“熱”性藥性特征在外用途徑下的科學內(nèi)涵，闡釋辛熱中藥“散寒”的科學內(nèi)涵；另一方面能夠開發(fā)辛熱中藥揮發(fā)油減脂、抗炎的功效，闡釋辛熱中藥“止痛”的科學內(nèi)涵，從而為中藥揮發(fā)油資源的充分利用提供新的思路。中藥揮發(fā)油促透劑區(qū)別于一般的促透劑，是由于其本身具有不同的藥性及藥效，如果根據(jù)被促透藥物的功效及治療目的，再結(jié)合揮發(fā)油的作用進行合理篩選，則會在使用時起到促透及協(xié)同治療的雙重功效，達到“藥輔合一”的作用。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突