郭希萍，紀(jì)新花，王會英

（安陽市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 安陽 455000）

布魯氏菌病是由布魯氏菌感染引起的人或多種動物共患的急性或慢性傳染病，臨床上主要表現(xiàn)為妊娠家畜流產(chǎn)、關(guān)節(jié)腫大等癥狀。疫苗接種是目前控制重點疫區(qū)布病流行的一種方法,但是接種活疫苗以后，布病感染的疫情被掩蓋了，而不是消失了，因為疫苗接種動物與自然患病動物無法甄別，法定檢疫措施嚴(yán)重受阻。

筆者應(yīng)用熒光微球抗體檢測試紙條進行了羊布魯氏菌S2 疫苗免疫與自然感染鑒別試驗，隨機對應(yīng)用試管凝集試驗結(jié)果進行復(fù)核，結(jié)合樣品相應(yīng)的免疫背景，經(jīng)分析，效率高，準(zhǔn)確率高，建議將該方法推廣應(yīng)用于羊布魯氏菌免疫或感染的篩查、輔助診斷等。

1 試驗原理

熒光標(biāo)記物采用的是鑭系元素及其螯合物經(jīng)特殊包裹加工而成的熒光微球，熒光強度遠(yuǎn)高于普通熒光標(biāo)記物，大大提高了檢測的靈敏度。鑭系元素及其螯合物的激發(fā)波長和發(fā)射波長間有一個較大的Stokes位移，減少了由激發(fā)光引起的特異雜散光對檢測的干擾，提高熒光檢測穩(wěn)定性；同時熒光壽命長，消除了環(huán)境中熒光物質(zhì)對待測物的干擾，而且熒光激發(fā)波長較寬，發(fā)射波長較窄，具有本底低、分辨率高、特異性強的優(yōu)勢。

2 試驗步驟

樣品選擇：選擇試管凝集試驗結(jié)果陰性羊血清10份，陽性羊血清20份（結(jié)合樣品采集登記表選擇免疫S2疫苗羊血清10 份，自然感染羊血清10 份），分成陰性對照組、S2疫苗免疫組、自然感染組，每組10份羊血清。

樣本稀釋：用吸管取9 滴樣本稀釋液，再吸取1 滴羊血清在1.5 ml離心管中做10倍稀釋并混勻。

撕開檢測試紙鋁箔包裝袋，取出檢測試紙，放于平整、潔凈的臺面上。

用配套吸管吸取已稀釋好的樣本，垂直而緩慢地滴加2 ～3滴（約80 ul）到加樣孔內(nèi)。

室溫下放置15 min，讀數(shù)前先將產(chǎn)品配套ID 卡插入便攜式熒光免疫分析儀，之后將反應(yīng)到時間的檢測試紙加樣孔朝里插入便攜式熒光免疫分析儀，點擊“快速檢測”進行讀數(shù)。

3 結(jié)果判定

陰性：當(dāng)LPS檢測值＜0.1時，判為陰性。

陽性：當(dāng)LPS檢測值≥0.1且NH檢測值＜0.1時，判為疫苗免疫陽性；當(dāng)LPS和NH檢測值均≥0.1時，判為布魯氏菌感染。

試驗結(jié)果如表1所示。

表1 各組檢測結(jié)果統(tǒng)計表

4 結(jié)果分析

從試驗結(jié)果來看，試管凝集試驗陰性的血清（抗體滴度＜1:25），LPS 檢測值、NH 檢測值均＜0.1；S2 疫苗免疫組LPS 檢測值≥0.1 且NH 檢測值＜0.1；自然感染組LPS 和NH 檢測值均≥0.1，表明應(yīng)用熒光微球抗體檢測試紙條較準(zhǔn)確地鑒別出疫苗接種動物與自然患病動物。

S2 疫苗具有良好的免疫保護效果和優(yōu)越的安全性，它不僅能對豬、牛和羊產(chǎn)生良好的免疫保護效果，并且口服免疫也不會引起懷孕母畜流產(chǎn)，應(yīng)用范圍較廣。根據(jù)有關(guān)動物試驗，布病疫苗株可在動物體內(nèi)完全被免疫系統(tǒng)清除，而強毒株或自然感染毒株會在動物體內(nèi)長期存在。研究顯示，S2 疫苗株在小鼠體內(nèi)完全清除時間為6周。LPS檢測值、NH檢測值數(shù)值大小與免疫時間長短、抗體滴度大小之間的關(guān)系有待進一步研究。

5 結(jié)論

熒光微球抗體檢測試紙條是在熒光染料標(biāo)記技術(shù)上發(fā)展起來的，作為一種免疫學(xué)檢測方法，熒光微球的發(fā)光強度可以隨激發(fā)光的強度增強而增強，所以熒光微球標(biāo)記有望提高免疫層析技術(shù)的檢測限；而在微球殼結(jié)構(gòu)的作用下，熒光微球具有相對穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，粒度均一、單分散性好、穩(wěn)定性好、發(fā)光效率高、重復(fù)性好，有較好的生物相容性；且形成微球后染料熒光淬滅大大減少，發(fā)射強而穩(wěn)定，且不受外界環(huán)境介質(zhì)變化的影響，具有檢測靈敏度高、操作簡便、穩(wěn)定性好的優(yōu)點。綜上所述，熒光微球抗體檢測試紙條在布魯氏菌病檢測中有廣闊的應(yīng)用前景。□