王代波，劉國(guó)華，李冰晶，趙景芳，徐 青，王濟(jì)紅

(貴州省生物研究所，貴州 貴陽(yáng) 550009)

多穗柯(LithocarpuspolystachyrusRehd.)[1]，又稱甜茶、甜葉子樹、甘茶等[2]，系殼斗科櫟屬常綠植物，主要以野生形式分布在我國(guó)南方低山密林中，印度、泰國(guó)也有分布。民間采摘多穗柯嫩葉制成甜茶，其香氣濃郁，色澤鮮艷，回味甘甜持久，風(fēng)味獨(dú)特[3]，多穗柯在我國(guó)用作茶飲料使用已經(jīng)有上千年歷史，長(zhǎng)期的應(yīng)用歷史表明多穗柯葉有清熱利濕的功能[4]，可治濕熱痢疾、皮膚瘙癢、癰疽惡瘡等。多穗柯還是一種具有多種保健功能的別樣茶，有研究表明，多穗柯的主要活性成分二氫查耳酮類具有降血糖、抗過敏、抗氧化、抑菌、改善記憶力等藥理作用[5-11]。根皮苷是多穗柯的主要甜味成分，有可能是多穗柯的主要活性成分，大量的研究表明根皮苷在治療糖尿病、肥胖、應(yīng)激性高血糖及抗氧化、膜通透性、抗衰老等方面具有廣泛的活性[12]，廣泛用在食品、飲料、食品添加劑、藥物和化妝品中。本文以不同時(shí)期的多穗柯葉為原料，采用超聲波輔助提取方法，比較四個(gè)季節(jié)根皮苷的含量變化及抗氧化活性，以期為多穗柯深度利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

多穗柯葉(采自貴州羅甸)、根皮苷對(duì)照品(純度>98%，批號(hào)：GT67195，酷爾化學(xué)科技有限公司)、水楊酸、濃鹽酸、雙氧水、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、鄰苯三酚、無(wú)水乙醇、維生素C、DPPH，以上試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

JEA502型中藥粉碎機(jī)(北京市泰和格潤(rùn)儀器有限公司)；FW135/FW200電子天平(上海譜春計(jì)量?jī)x器有限公司)；KQ-800DE超聲波儀器(昆山市超聲儀器公司)；SHIMADZU UV-1750紫外分光光度計(jì)；800電動(dòng)離心機(jī)(上海梅香儀器有限公司)；HH-S4電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

1.3.1 根皮苷測(cè)定

紫外分光光度計(jì)對(duì)根皮苷標(biāo)準(zhǔn)溶液于284 nm 處進(jìn)行掃描[13]，得出根皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=31.02X+0.0253，R2=0.9995，其中Y為根皮苷濃度(mg/mL)，X為吸光度值。取1 mL待測(cè)樣液，利用無(wú)水乙醇將其稀釋為100 mL，于284 nm 下測(cè)定其吸光度，根據(jù)吸光度可得出根皮苷濃度。

1.3.2 根皮苷提取工藝

將采自春、夏、秋、冬四個(gè)季節(jié)的多穗柯葉于60 ℃烘箱烘干，然后用粉碎機(jī)將多穗柯葉粉碎，過篩(2號(hào)篩，24目)得樣品，分別準(zhǔn)確稱取春、夏、秋、冬四個(gè)樣品各三組，每組樣品1.0 g置于100 mL錐形瓶中，加入40 mL體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇溶液，置于50 ℃水浴鍋冷凝回流提取60 min，過濾取定量提取液，稀釋、定容，過膜測(cè)定根皮苷吸光值，計(jì)算根皮苷得率。

1.3.3 根皮苷粗提物抗氧化實(shí)驗(yàn)

清除HO·能力測(cè)定方法[13]：在試管中依次加入10 mmol/L的FeSO42 mL、8.8 mmol/L H2O22 mL、1 mL樣品溶液，最后加入10 mmol/L水楊酸2 mL，在37 ℃反應(yīng)30 min。以蒸餾水作參比，在510 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，并同時(shí)做不加顯色劑的樣品空白，以VC作為陽(yáng)性對(duì)照，根據(jù)公式計(jì)算清除率。

清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100%

式中：A為加入樣品液的吸光度；A1為不加顯色劑H2O2溶液的吸光度；A0以蒸餾水代替樣品的吸光度。

清除DPPH·能力測(cè)定方法[14]：取2 mL不同條件下提取樣品溶液于10 mL棕色瓶中，再分別加入2 mL DPPH·溶液(0.1 mmol/L，該溶液避光保存溫度為4 ℃，現(xiàn)用現(xiàn)配)搖勻，在37 ℃下暗處放置30 min，分別在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，以VC作為陽(yáng)性對(duì)照，根據(jù)公式計(jì)算清除率：

清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100%

式中：A為加入樣品液與DPPH溶液的吸光度；A1為加入樣品液與乙醇的吸光度；A0為加入DPPH·溶液與乙醇溶液的吸光度。

清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100%

式中：A為樣品液的吸光值；A1為樣品本底的吸光值；A0為空白對(duì)照，雙蒸餾水代替樣品的吸光值。

2 結(jié)果與分析

2.1 根皮苷的含量變化

四個(gè)季節(jié)的多穗柯葉根皮苷的含量如圖1所示，隨著季節(jié)的推移，根皮苷含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在秋季多穗柯葉中根皮苷含量最高，每1 g多穗柯葉中根皮苷含量可達(dá)49.959 mg。

圖1 根皮苷含量變化圖

2.2 根皮苷粗提物抗氧化性實(shí)驗(yàn)

2.2.1 HO·清除效果

根皮苷對(duì)HO·清除效果如圖2所示，根皮苷對(duì)HO·的清除效果顯著并高于VC，且隨著季節(jié)的推移，根皮苷對(duì)HO·清除率呈現(xiàn)先下降后升高的趨勢(shì)，春季的多穗柯葉根皮苷清除HO·的效果最高可達(dá)40.13%，秋季效果最低，HO·清除率為32.61%。

圖2 根皮苷粗提物對(duì)HO·清除率

2.2.2 DPPH·清除效果

根皮苷對(duì)DPPH·清除效果如圖3，根皮苷對(duì)DPPH·的清除效果與VC幾乎持平，且春季、秋季、冬季的多穗柯葉根皮苷對(duì)DPPH·清除率也幾乎等同，夏季多穗柯葉根皮苷DPPH·的清除效果最低，清除率也高達(dá)80.62%。

圖3 根皮苷粗提物對(duì)DPPH·清除率

圖4 根皮苷粗提物對(duì)清除率

3 結(jié)論