姜濤，劉子禎，姚藝新

(康美藥業(yè)股份有限公司，廣東普寧 515300)

蓮子心為睡蓮科植物蓮NelumbonuciferaGaertn.成熟種子中的干燥幼葉及胚根，具有清心安神、止咳化痰、止血抗炎等功效。研究表明，蓮子心主要含有蓮心堿(liensinine)等生物堿類成分[1]。蓮心堿具有抗心律失常、抗癌、抗抑郁等活性[2-8]?！吨腥A人民共和國藥典》2015年版(以下簡稱《藥典》)規(guī)定蓮心堿是蓮子心含量測定的唯一指標成分，并規(guī)定蓮心堿含量不得少于0.20%。因此，蓮心堿的含量是影響蓮子心藥材質量的關鍵因素之一。2018—2019年，蓮子心因含量不合格已被國內食品藥品監(jiān)督管理局公告10次。

因此，研究蓮子心中蓮心堿含量不合格的原因有重要意義。

筆者通過調研蓮子心產地江西、湖南、湖北、福建、四川，與農戶咨詢溝通，現(xiàn)場采樣等方式共收集蓮子心樣品54批，并按《藥典》方法進行含量測定，從產地、蓮成熟度、蓮子飽滿度及栽培品種4個方面分析市售蓮子心中蓮心堿含量不合格原因，以期為市場尋找含量合格的蓮子心原料藥材提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1260 Infiniy高效液相色譜系統(tǒng)，配置四元泵G1311C、自動進樣器G1329B、DAD檢測器、色譜工作站(安捷倫科技有限公司)，F(xiàn)W80型高速萬能粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)，KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，XPE26型微量天平(量程0～22 g，含量：0.001 mg)XS205DU型雙量程電子天平(量程1為0～81 g，感量：0.01 mg；量程2為0～220 g，感量：0.1 mg)購自梅特勒-托利多國際貿易有限公司，Sartorius arium?Pro DI超純水系統(tǒng)(德國賽多利斯公司)，DZKW-S-6型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)，Agilent Eclipse Plus C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。

1.2試劑與樣品 蓮心堿高氯酸鹽對照品(批號：111696-201703，感量：96.3%)購自中國食品藥品檢定研究院，乙腈(批號：380301，色譜純)、甲醇(批號：380302，色譜純)均購自克魯德化工股份有限公司，純水來自超純水系統(tǒng)。十二烷基磺酸鈉(天津市大茂化學試劑廠，批號：20170308)、冰醋酸(天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20171120)、鹽酸(西隴科學股份有限公司，批號：1809011)均為分析純。

蓮子心樣品來自江西、湖南、福建、湖北、四川5省，共54批。其中樣品S1—S4、S5—S7、S8—S10分別來自福建省武夷山市、福建省三明市建寧縣、福建省南平市建陽區(qū)，樣品S11—S13、S14—S16、S17—S20分別來自湖北省荊州市、湖北省洪湖市、湖北省宜城市，樣品S21—S23、S24—S26、S27—S28、S29—S33分別來自湖南省益陽市、湖南省衡陽市、湖南省邵東市，湖南省湘潭市，樣品S34—S37、S38、S39—S41、S42—S44分別來自江西省撫州市廣昌縣、江西省廣昌縣白蓮研究所、江西省贛州市石城縣、江西省九江市潯陽區(qū)，樣品S45—S48、S49—S51、S52—S54分別來自四川省成都市溫江區(qū)、四川省遂寧市射洪縣、四川省巴中市平昌縣。以上樣品均為產地鮮蓮子經取心、曬干而成，經康美藥業(yè)股份有限公司質量管理中心劉茂貴主任藥師鑒定為為睡蓮科植物蓮NelumbonuciferaGaertn.種子的干燥幼葉及胚根莖。

2 方法與結果

2.1蓮子心產地調研 通過與蓮子心產地蓮農交流及觀察荷塘蓮種植情況，了解蓮的種植及蓮子心采收、加工、產量、運輸、儲藏等情況。

2.2蓮子心含量測定 按《藥典》蓮子心項下蓮心堿含量測定方法進行測定[9]。

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.015 mol·L-1十二烷基磺酸鈉溶液(取十二烷基磺酸鈉0.41 g，加水100 mL使溶解)-冰醋酸(56：43：1)為流動相；檢測波長282 nm。理論板數按蓮心堿峰計算應不低于5 000。對照品溶液的制備：取蓮心堿高氯酸鹽對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含25 μg的溶液，即得(蓮心堿質量=蓮心堿高氯酸鹽質量/1.358 7)。供試品溶液的制備：取本品粉末[過四號篩，篩孔內徑(250±9.9) μm]約0.5 g，精密稱定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25 mL，稱定質量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質量，用2%鹽酸甲醇溶液補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置10 mL量瓶，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。蓮子心按干燥品計算，含蓮心堿(C37H42N2O6)不得少于0.20%。

2.3數據分析 采用SPSS23.0版統(tǒng)計軟件對數據進行處理。

2.4產地調研結果 栽培品種：據產地調研發(fā)現(xiàn)，蓮子心主產區(qū)為江西、湖南、湖北、福建和四川，其中江西省產量最大。江西省主要種植“建選17號”蓮和“太空蓮36號”，其中“建選17號”蓮是以紅花建蓮、寸三蓮65、太空蓮2號為親本，經雜交選育所得，“太空蓮36號”是福建“西門蓮”種子通過太空輻射誘變后再經地面選育所得。由于受太空輻射和雜交影響，“建選17號”和“太空蓮36號”蓮子心產量較高，分別畝產蓮子心約3，2 kg，而傳統(tǒng)蓮畝產蓮子心僅1 kg。因此，目前市場上大部分蓮子心來自栽培的太空蓮。

采收加工：根據產地蓮農所述，蓮蓬在七月份、八月份開始成熟，在七月中旬開始采摘上市，八月底蓮蓬開始變老，九月以后蓮蓬會從鮮嫩的綠色開始變黑，完全成熟。隨著蓮蓬的成熟，其中的蓮子由綠色變?yōu)辄S綠色、棕褐色、灰褐色，最后變?yōu)樽虾稚徸佑捕纫仓饾u增大。蓮子中的蓮子心的取心過程為：用刀割下蓮蓬，手工剝出帶殼蓮子，用全自動剝蓮機劃破蓮子殼，手工剝出白色蓮子，再用不銹鋼絲手工捅出蓮子心。

干燥方式：根據蓮農經驗，鮮蓮子心必須趁鮮在一天內進行干燥，否則蓮子心顏色會變深。蓮子心的干燥方式為太陽曬干或柴火爐烘干。

儲存方式：蓮子心在產地干燥后直接裝入聚丙烯塑料編織袋，扎口后置陰涼干燥處。為防止霉變蟲蛀，需進行不定期晾曬。

2.5不同產地蓮子心中蓮心堿含量 蓮子心供試品與蓮心堿高氯酸鹽對照品的HPLC色譜圖見圖1。來自五省的蓮子心樣品中蓮心堿含量測定結果見表1。湖北產10批樣品含量均合格，湖南產部分樣品含量合格，其余3省樣品蓮心堿含量均不合格。

2.6影響蓮子心蓮心堿含量的因素分析

2.6.1產地對蓮子心蓮心堿含量的影響 采用SPSS軟件的Kruskal-Wallis H檢驗法分析5個省份蓮子心中蓮心堿含量數據，設置95%置信區(qū)間，結果見圖2，得到P值為3.1×10-5，小于 0.05，說明不同省份蓮子心蓮心堿含量差異有統(tǒng)計學意義。進一步根據不同產地的成對比較分析(表2)，發(fā)現(xiàn)湖北省與其他4省蓮子心蓮心堿含量差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

從氣候看，江西、福建、湖南、湖北、四川雖均處于北緯25°～35°，氣候類型均為亞熱帶季風氣候，無明顯差別；從海拔角度看，五省明顯不同：四川、湖南、湖北基本屬于第二階梯(海拔1～2 km)，江西、福建屬于第三階梯(海拔500 m以下)。因此各地海拔與土壤環(huán)境可能是影響蓮子心蓮心堿含量的因素之一。

1.蓮心堿。

表1 蓮子心樣品中蓮心堿含量測定結果

續(xù)表1 蓮子心樣品中蓮心堿含量測定結果

2.6.2蓮子成熟度對蓮心堿含量的影響 蓮子坐果期內，隨其成熟度增加，果皮顏色會由綠色變?yōu)辄S綠色、棕褐色、灰褐色，最后變?yōu)樽虾稚?。采集同一株蓮的蓮蓬，剝取其蓮子，按成熟度可分為未成?黃綠色)、稍成熟(棕褐色)、成熟(灰褐色)和過度成熟(紫褐色)4類，分別測定蓮子心中蓮心堿含量。結果見表3，來自不同產地蓮子心的蓮心堿含量隨蓮子成熟度增加呈先增高后降低趨勢，蓮子成熟時蓮心堿含量最高。

圖2 5個省份蓮子心蓮心堿含量Kruskal-wallis檢驗結果

表2 產地成對比較

表3 不同成熟度蓮子中蓮子心的蓮心堿含量

2.6.3蓮子飽滿度對蓮心堿含量的影響 產地采收的同批蓮子樣品中，部分蓮子較飽滿，呈近球形，另一部分蓮子不飽滿，呈橢球形。將來自同一池塘且顏色相同的蓮子按質量和直徑劃分為2個等級：一等蓮子飽滿，近球形，測得千粒質量2 945 g，直徑(1.78±0.12) cm，蓮心堿含量0.36%，為《藥典》含量規(guī)定限度的1.8倍；二等蓮子不飽滿，橢球形，測得千粒質量2 580 g，直徑(1.44±0.07) cm，蓮心堿含量0.07%，屬不合格品(含量低于《藥典》規(guī)定)。一等蓮子的蓮心堿含量遠高于二等蓮子蓮心堿含量，說明蓮子飽滿度會影響蓮子心蓮心堿含量。其原因在于，飽滿度高的蓮子植物營養(yǎng)較充分，次級代謝產物蓮心堿積累越多。

3 討論

蓮子心主產于江西、湖南、湖北、福建、四川，根據54批樣品檢測結果可知，蓮子心中蓮心堿含量合格率約26.0%，其中湖北地區(qū)10批均合格，湖南地區(qū)合格率約31.0%，其他地區(qū)均不合格。湖北地區(qū)10批蓮子心均合格，其蓮心堿含量均值雖達到0.28%，但僅比《藥典》規(guī)定限度多0.4倍。

大部分蓮子心含量不合格，其原因可能有3個方面。產地因素：不同海拔和土壤等會對植物的次級代謝產物積累有影響[10-11]。采收期因素：由于優(yōu)先上市售價高，蓮農為追求經濟效益，在蓮子尚為黃綠色時即開始大量采收，此時蓮子中蓮子心蓮心堿積累時間不足，蓮子飽滿比例小，易導致含量不合格。品種因素：我國從1994年開始培育太空輻射誘變蓮，以期提高蓮的生育期、抗性、結實率，但太空培育僅以蓮子產量為指標，忽視了蓮子心中蓮心堿的含量[12-15]。有研究報道，太空輻射會導致部分基因變異及蓮品種退化[16]，品種退化會影響蓮子心次級代謝產物的積累。因此，目前蓮子心含量不合格率過高可能是由產地、采收期、品種等因素綜合導致。

此外，許多中藥材種植戶追求“個頭越大越好”、“產量越高越好”，在根和根莖類中藥材種植過程中濫用膨大劑(多效唑、烯效唑、矮壯素、縮節(jié)胺、氯化膽堿、丁酰肼等)，導致如云南文山州三七，河南武陟大封鎮(zhèn)地黃、牛膝和山藥，甘肅岷縣黨參等藥材雖然個頭變大、產量提高，但質量卻越來越差[17]。因此，為促進中藥產業(yè)業(yè)健康發(fā)展，在中藥材種植過程中應加強管控，同時規(guī)范藥材的道地產區(qū)，規(guī)范采收、加工、運輸與存儲等環(huán)節(jié)，加大對太空輻射、膨大劑等人為因素對中藥質量影響的研究，保證中藥質量。