郭文成，劉斌，張麗娟，王艷艷，黃莉莉，李廷利

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江哈爾濱150040）

恐懼是人類的基本情感。正常范圍內(nèi)的恐懼情緒可以激發(fā)個(gè)體一系列的防御機(jī)制。當(dāng)恐懼情緒無(wú)法正常消退時(shí)，比如可能導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等多個(gè)系統(tǒng)的失調(diào)和紊亂，以致個(gè)體的機(jī)能出現(xiàn)障礙，誘發(fā)焦慮癥、抑郁癥等疾病[1]。

杏仁核基底外側(cè)核（BLA）是恐懼信息采集和輸入的重要區(qū)域。當(dāng)外界恐懼刺激發(fā)生后，恐懼信息首先由BLA輸入加工，再傳遞給杏仁中央核（Ce）激活各個(gè)腦區(qū)，形成恐懼情緒并表達(dá)出恐懼特征。BLA區(qū)域內(nèi)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化，與恐懼情緒的調(diào)節(jié)有關(guān)[2]。

朱砂安神丸是鎮(zhèn)痛安神的代表方劑，出自金元時(shí)期著名醫(yī)家李東垣所著的《內(nèi)外傷辨惑論》，由朱砂、黃連、地黃、當(dāng)歸、甘草組成。王瑩[3]、楊越[4]、陳建寧[5]等對(duì)朱砂安神丸促進(jìn)恐懼記憶消退和潛在機(jī)制進(jìn)行了研究,亦有朱砂安神丸抗驚厥、解熱、鎮(zhèn)痛和抗心律失常等作用的臨床或?qū)嶒?yàn)研究[6]。

本實(shí)驗(yàn)利用微透析聯(lián)合高效液相電化學(xué)以及c?Fos蛋白免疫組化，檢測(cè)在朱砂安神丸干預(yù)下條件性恐懼記憶的習(xí)得和消退階段，BLA區(qū)域內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化和c?Fos蛋白表達(dá)情況的影響，探討朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼大鼠拮抗作用及其作用機(jī)制。

1 材料與試劑

1.1 動(dòng)物

SD大鼠，雄性，體質(zhì)量（240±10）g，SPF級(jí)，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（黑）2018?007。實(shí)驗(yàn)時(shí)間為每天早8:00～11:00，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)在獨(dú)立、避光、通風(fēng)的實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室實(shí)行12 h明暗交替光照，溫度（24±2）℃，相對(duì)濕度保持在50%～60%，聲音在40分貝以下。

1.2 試劑

朱砂安神丸（蜜丸，每丸9 g，吉林省鑫輝藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：20170701）；5?羥色胺鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（純度：99.8%，批號(hào)：111656?200401）、酒石酸去甲腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)：94.3%，批號(hào)：KFZA?8UP）、鹽酸多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.8%，批號(hào)；F29H?EQSB）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；一抗試劑（兔抗c?Fos，北京博森生物）；兔二步法試劑盒（北京中杉金橋生物科技）；羊血清工作液（北京中杉金橋生物科技）；DAB顯色試劑盒（無(wú)錫傲銳東源生物科技）；進(jìn)口羊血清工作液（無(wú)錫傲銳東源生物科技）。

1.3 主要儀器

XR?XC404?2條件性恐懼實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)（上海欣軟）；SuperFcs條件性恐懼實(shí)驗(yàn)分析系統(tǒng)（上海欣軟）；S1130高效液相泵（德國(guó)Sykam）；AntecSDC電化學(xué)檢測(cè)器（荷蘭安泰克）；Clarity高效液相工作站(捷克DataApex)；DM400顯微鏡（德國(guó)萊卡）。

2 方法

2.1 朱砂安神丸混懸液的制備

朱砂安神丸成年人的最大服用劑量為9 g。按照體表面積折算法計(jì)算，可知大鼠的給藥劑量0.81 g/kg。配制方法：取朱砂安神丸9 g，并加入適量雙蒸水，充分研磨，定容于100 mL容量瓶中，得到朱砂安神丸混懸液。

靜心想來(lái)，的確如此。那些人或多或少都會(huì)有強(qiáng)硬的人際關(guān)系當(dāng)本錢，而他阿東的本錢就只這張文憑，這是他奮斗數(shù)年掙來(lái)的。盡管有了它，找起工作來(lái)依然不如人家，但對(duì)于阿東，到底聊勝于無(wú)啊。

2.2 套管和探針植入

大鼠在飼養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)7 d，并于植入手術(shù)前24 h開(kāi)始禁食。腹腔注射10%(φ)水合氯醛麻醉大鼠，充分暴露和清潔顱骨表面，使前囟點(diǎn)清晰可見(jiàn)。參考George Paxinos&Charles Watson大鼠腦立體定位圖譜，確定BLA的三維坐標(biāo)為Ap=+2.8 mm，RL=+4.7 mm，DV=-7.5 mm，使用腦立體定位儀進(jìn)行定位。用顱骨鉆刺穿此位置顱骨，將探針套管植入大鼠腦右側(cè)BLA區(qū)域，用玻璃離子水門汀固定。術(shù)后將大鼠單籠飼養(yǎng)并恢復(fù)3 d。

2.3 動(dòng)物分組及給藥

術(shù)后恢復(fù)3 d，將埋置探針的大鼠60只，隨機(jī)分為恐懼習(xí)得空白組、恐懼習(xí)得模型組、恐懼習(xí)得給藥組、恐懼消退空白組、恐懼消退模型組、恐懼消退給藥組，每組10只。早7:00各給藥組給予朱砂安神丸混懸液（0.09 g/mL，9 mL/kg），各空白組和模型組給予相同體積的雙蒸水，每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥后進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制、消退實(shí)驗(yàn)以及微透析取樣實(shí)驗(yàn)。

2.4 條件性恐懼動(dòng)物模型的復(fù)制及消退實(shí)驗(yàn)[7-8]

將大鼠置于刺激箱中2 min后給予模型組和給藥組5 s的聲音信號(hào)（2 000 Hz、75 dB），再同時(shí)給予5 s聲音信號(hào)和電刺激（0.75 mA），以上結(jié)束后1 min內(nèi)無(wú)處理，重復(fù)20次，停留2 min取出；各空白組只給予聲音信號(hào)。

條件性恐懼記憶的習(xí)得測(cè)試：模型復(fù)制次日，將各組大鼠置于刺激箱2 min。各組給予10 s聲音信號(hào)（2 000 Hz、75 dB），結(jié)束后1 min內(nèi)無(wú)處理，同時(shí)記錄大鼠僵直反應(yīng)時(shí)間。此過(guò)程重復(fù)5次。

條件性恐懼記憶的消退測(cè)試：習(xí)得測(cè)試后的第1、3、5、7 d，將大鼠置于刺激箱2 min。各組給予10 s聲音信號(hào)（2 000 Hz、75 dB），結(jié)束后1 min內(nèi)無(wú)處理，同時(shí)記錄大鼠僵直反應(yīng)時(shí)間。以上重復(fù)5次。

2.5 微透析樣品收集

取下大鼠頭頂?shù)募偬结槪踩隒MA探針，將透析管路系統(tǒng)依序連接。微量進(jìn)樣泵速度為0.8μL/min；保持整個(gè)管路暢通；低溫微量收集器溫度設(shè)置為4℃。將大鼠置入自由活動(dòng)裝置中，準(zhǔn)備收集腦透析液。前1個(gè)小時(shí)平衡整個(gè)系統(tǒng)，舍棄收集液。此后開(kāi)始收集腦透析液，時(shí)間為2 h。將收集好的透析液迅速轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱中，等待檢測(cè)。

2.6 HPLC?ECD測(cè)定大鼠腦透析液中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量[6,9]

2.6.1 色譜條件 色譜柱Sykam C18（3μm，2.1 m×100 m），流動(dòng)相中：Na2HPO4·H2O：13.8 g/L；辛烷磺酸鈉：160 mg/L；EDTA·H2O：10 mg/L；甲醇：100 mL/L；KCl：149.2 mg/L。使用H3PO4溶液調(diào)節(jié)pH至2.95～3.05范圍內(nèi)；以0.2μm濾膜抽濾4次；超聲1 h；存放于-4℃冰箱中待使用。流動(dòng)相流速0.2 mL/min。工作電極電壓：0.52 V。柱溫：40℃。工作電極：玻璃碳電極。參比電極：銀電極。進(jìn)樣量：20μL。分析時(shí)間：25 min。

2.6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 精密稱取NE、DA、5?HT的標(biāo)準(zhǔn)品各1 mg，取0.1 mol/L的高氯酸1 mL，將3種標(biāo)準(zhǔn)品溶于高氯酸中配置成濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，混合均勻。按梯度稀釋濃度為50 pg/mL、25 pg/mL、12.5 pg/mL、6.25 pg/mL和3.125 pg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，放入-80℃冰箱中等待檢測(cè)。以各目標(biāo)物的色譜峰面積（Y）對(duì)其濃度（X，pg/mL）進(jìn)行線性回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)。

2.6.4 微透析探針的體外回收率 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前于一級(jí)水中浸泡探針1 h以活化探針。精密稱取5?HT、DA、NE各1 mg。以林格氏溶液作為溶劑配置成1 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品。將探針?lè)湃牖旌蠘?biāo)準(zhǔn)品中，連接微量進(jìn)樣泵，以林格氏溶液作為灌流液0.8μL/min進(jìn)行灌注，收集2個(gè)小時(shí)樣品，放入-80℃冰箱中。得到的樣品進(jìn)樣3次測(cè)出濃度取平均值，通過(guò)公式R體外=C樣品/C標(biāo)品計(jì)算出平均回收率，測(cè)得探針的體外回收率，以此折算腦內(nèi)的真實(shí)含量水平。見(jiàn)表1。

表1 體外回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Experimental results of in v it ro recovery rate

2.7 心臟灌流、取腦以及腦組織切片

將大鼠麻醉，四肢固定，在劍突下打開(kāi)腹腔，剪開(kāi)隔膜，暴露出心臟，于左心室插入注射針，同時(shí)剪開(kāi)右心耳，用250 mL生理鹽水、250 mL 4%(φ)多聚甲醛溶液置于點(diǎn)滴瓶中，依序進(jìn)行灌流。待大鼠肢體僵硬后收集腦組織，在4℃冰箱中放置一晚。第2日取出腦組織，依次置于5%蔗糖溶液4 h，10%蔗糖溶液4 h，20%蔗糖溶液中過(guò)夜，以進(jìn)行組織脫水。次日，用OCT包埋劑浸泡4 h后，使用液氮速凍，放入-80℃冰箱中等待切片。切片厚度5 nm，每間隔3張切片取1張待用。

2.8 朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼記憶消退過(guò)程大鼠的BLA神經(jīng)元c?Fos蛋白表達(dá)的影響[10]

2.8.1 c?Fos免疫組織化學(xué)染色 室溫下，切片用0.01 mol/L的PBS沖洗5 min，重復(fù)3次；以Triton?X100溶液于37℃水中孵育30 min；0.01 mol/L的PBS沖洗5 min，重復(fù)3次；H2O2孵育5 min；0.01 mol/L的PBS沖洗5 min，重復(fù)3次；封閉處理10%正常羊血清；1∶400稀釋兔抗c?Fos抗體在4℃下孵育48 h；滴加生物素山羊抗兔IgG，在37℃水浴孵育60 min；0.01 mol/L的PBS沖洗5 min，重復(fù)3次；DAB處理3～5 min；mager’s蘇木精溶液染色5 s，用75%、85%、90%、95%、100%（Ⅰ）、100%（Ⅱ）濃度的酒精及二甲苯（Ⅰ）和二甲苯（Ⅱ）按梯度脫水，每個(gè)濃度的酒精浸泡5 min二甲苯溶液浸泡10 min。取出后用中性樹(shù)脂進(jìn)行封片，在60℃的烘箱中放置5 d。

2.8.2 c?Fos蛋白的統(tǒng)計(jì)方法 使用光學(xué)顯微鏡觀察采集切片照片c?Fos蛋白免疫組化顯色反應(yīng)，根據(jù)腦立體定位圖譜準(zhǔn)確定位到BLA區(qū)域，陽(yáng)性神經(jīng)元蛋白質(zhì)表達(dá)的顏色和陰性神經(jīng)元蛋白質(zhì)顏色表達(dá)不同。神經(jīng)元細(xì)胞核陽(yáng)性染色后表現(xiàn)出棕黃色，陰性染色后表現(xiàn)出藍(lán)紫色。使用Imagepro?Plus6.0專業(yè)圖像軟件統(tǒng)計(jì)每只大鼠腦組織切片BLA區(qū)內(nèi)c?Fos陽(yáng)性神經(jīng)元的累積光密度（integrated optical density，IOD）。以BLA區(qū)域內(nèi)0.01 mm 2個(gè)單位內(nèi)的c?Fos陽(yáng)性神經(jīng)元的IOD值來(lái)表示c?Fos蛋白表達(dá)的強(qiáng)弱，IOD值越高說(shuō)明此區(qū)域內(nèi)的神經(jīng)元越為活躍，反之就是神經(jīng)元表達(dá)不活躍，以此來(lái)判斷BLA腦區(qū)內(nèi)神經(jīng)元的活動(dòng)狀態(tài)。

2.9 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS 21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，3組之間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 方法專屬性考察

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 各目標(biāo)物的檢出限較低，在3.125～50 pg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3種單胺遞質(zhì)的線性回歸方程Table 2 Linear regression equations of three monoamine transmittersq

3.1.2 精密度及加標(biāo)回收率 結(jié)果見(jiàn)表3。

3.2 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼記憶的影響

見(jiàn)圖1和圖2。處于條件性恐懼模型習(xí)得期的大鼠：與空白對(duì)照組相比，模型組的僵直反應(yīng)時(shí)間均顯著延長(zhǎng)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，給藥組的僵直反應(yīng)時(shí)間略低于模型組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 日內(nèi)日間精密度及加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）Table 3 Experimental results of intra?day precision and sample recovery rate(n=5)

處于條件性恐懼模型消退期的大鼠：與空白對(duì)照組相比，模型組的僵直反應(yīng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)，兩者相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組相比，給藥組的僵直反應(yīng)時(shí)間均低于模型組。其中在第5天給藥組的僵直時(shí)間顯著低于模型組，兩者相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在第7天給藥組的僵直時(shí)間顯著低于模型組時(shí)間，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

圖1 條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得過(guò)程的僵直反應(yīng)時(shí)間Figure1 Freezing reaction time of fear memory acquisitionprocess in conditioned fear rats

圖2 條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退過(guò)程的僵直反應(yīng)時(shí)間Figure2 Freezing reaction time of fear memory regression inconditioned fear rats

圖3 朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼記憶習(xí)得過(guò)程大鼠BLA內(nèi)NE、DA、5?HT含量的影響Figure3 Effects of ZhushaAnshen pill on the contents of NE,DA and 5?HT in BLA of rats with conditioned fear memo?ry acquisition

圖4 朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼記憶消退過(guò)程大鼠BLA內(nèi)NE、DA、5?HT含量的影響Figure4 Effects of ZhushaAnshen pill on the contents of NE,DA and 5?HT in BLA of rats with conditioned fear memo?ry regression

3.3 朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼模型大鼠BLA腦區(qū)內(nèi)NE、DA及5?HT含量的影響

見(jiàn)圖3和圖4。處于條件性恐懼模型習(xí)得期的大鼠：與空白組相比，模型組BLA內(nèi)的NE、DA含量均顯著高于空白對(duì)照組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），5?HT含量顯著低于空白對(duì)照組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。，給藥組BLA內(nèi)的NE、DA含量與模型組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

處于條件性恐懼模型消退期的大鼠：與空白組相比，模型組的BLA內(nèi)的c?Fos蛋白表達(dá)數(shù)量，顯著高于空白組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組相比，給藥組BLA內(nèi)的c?Fos蛋白表達(dá)數(shù)量，顯著低于模型組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。

3.4 朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼記憶消退過(guò)程大鼠的BLA神經(jīng)元c?Fos蛋白表達(dá)的影響

處于條件性恐懼模型習(xí)得期的大鼠：與空白對(duì)照組相比，模型組的BLA內(nèi)的c?Fos蛋白表達(dá)數(shù)量，顯著高于空白對(duì)照組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。，給藥組的BLA內(nèi)的c?Fos蛋白表達(dá)數(shù)量與模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表4～表5和圖5～圖6。

處于條件性恐懼模型消退期的大鼠：與空白對(duì)照組相比，模型組的BLA內(nèi)的c?Fos蛋白表達(dá)數(shù)量，顯著高于空白對(duì)照組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組相比，給藥組的BLA內(nèi)的c?Fos蛋白表達(dá)數(shù)量，顯著低于模型組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表4 朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼記憶習(xí)得過(guò)程大鼠BLA神經(jīng)元c?Fos蛋白表達(dá)的影響Table 4 Effects of ZhushaAnshen pill on the expression of c?Fos protein in BLA of rats with conditioned fear memory acquisition(x±s,n=10)

表5 朱砂安神丸對(duì)條件性恐懼記憶消退大鼠BLA神經(jīng)元c?Fos蛋白表達(dá)的影響Table 5 Effects of ZhushaAnshen pill on the expression of c?Fos protein in BLA neurons of rats with conditioned fear memory regression(x±s，n=10)

圖5 條件性恐懼記憶消退大鼠BLA神經(jīng)元c?Fos蛋白表達(dá)情況（200×，標(biāo)尺100μm）Figure 5 Expression of c?Fos protein in BLA neurons of rats with conditioned fear memory regression(200×,bar 100μm)

圖6 條件性恐懼記憶消退大鼠BLA神經(jīng)元c?Fos蛋白表達(dá)情況（200×，標(biāo)尺100μm）Figure 6 Expression of c?Fos protein in BLAneurons of rats with conditioned fear memory regression(200×,bar 100μm)

4 討論

杏仁核參與恐懼記憶的形成和表達(dá)。杏仁核基底外側(cè)核（BLA）主要參與恐懼信息采集和輸入，在調(diào)節(jié)恐懼情緒中起到非常重要的作用[11]。所以本實(shí)驗(yàn)選取BLA作為藥物作用機(jī)制的研究核心，以巴普洛夫條件性恐懼反射為范式，探討朱砂安神丸在條件性恐懼記憶的作用和潛在機(jī)制。

從恐懼記憶的神經(jīng)生物學(xué)理論中可推測(cè)當(dāng)條件性恐懼發(fā)生時(shí)，恐懼信息首先由BLA輸入加工，再由BLA傳遞給Ce，由Ce激活各個(gè)腦區(qū)例如腦干、藍(lán)斑核、皮層、下丘腦等，使個(gè)體表現(xiàn)為血壓升高，心律加速，出汗等生理反應(yīng)，同時(shí)引起藍(lán)斑、黑質(zhì)、中縫核等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)釋放失常[1,12?13]。c?Fos基因在受到外界刺激后表達(dá)水平發(fā)生變化，其產(chǎn)物c?Fos蛋白可用作為神經(jīng)元興奮的標(biāo)志[14-15]。利用c?Fos蛋白免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)條件性恐懼大鼠BLA內(nèi)神經(jīng)元c?Fos蛋白的表達(dá)水平，藉此判斷該腦區(qū)神經(jīng)元興奮程度。在個(gè)體受到應(yīng)激或驚嚇?lè)磻?yīng)發(fā)生時(shí)，藍(lán)斑核(LC)中的中樞去甲腎上腺能神經(jīng)元釋放NE，會(huì)編碼增強(qiáng)恐懼性記憶，加強(qiáng)個(gè)體警覺(jué)性，準(zhǔn)備應(yīng)對(duì)刺激的反應(yīng)。NE可以激活環(huán)路中的氨基酸，促進(jìn)對(duì)恐懼記憶的恢復(fù)。有實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)腦內(nèi)多巴胺1（D1）和多巴胺2（D2）被拮抗劑拮抗時(shí)，能夠阻礙恐懼記憶的形成和表達(dá)，并減弱條件性恐懼行為學(xué)上的表現(xiàn)。而當(dāng)D1和D2受體被激動(dòng)時(shí)，則能促進(jìn)恐懼記憶的形成和建立[16]。有研究表明5?HT再攝取抑制劑（SSRI）類藥物，可緩解條件性恐懼患者出現(xiàn)的暴躁、焦慮等癥狀[17]。

結(jié)合各實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，朱砂安神丸拮抗條件性恐懼作用主要發(fā)揮在恐懼記憶消退階段。恐懼記憶消退給藥組僵直時(shí)間減少，可能原因是朱砂安神丸可以調(diào)節(jié)BLA腦區(qū)神經(jīng)元的功能，抑制恐懼信息向下游腦區(qū)投射；抑制LC內(nèi)中樞去甲腎上腺能神經(jīng)元釋放NE，拮抗恐懼記憶的恢復(fù)，抑制個(gè)體警覺(jué)性；使DA含量明顯下降，阻礙恐懼記憶的表達(dá)；調(diào)節(jié)5?HT系統(tǒng)，緩解焦慮等行為的出現(xiàn)。

綜上，朱砂安神丸能夠促進(jìn)恐懼記憶消退，其機(jī)制可能是與調(diào)節(jié)BLA區(qū)域單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量、影響神經(jīng)元功能有關(guān)。