陳雪婷，徐文杰，李潔環(huán)，馮健英

（廣東省第二中醫(yī)院/廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，廣東廣州510095）

功能性消化不良是由胃、十二指腸功能紊亂引起的一系列功能性胃病，以食欲不振、腹部脹痛、大便異常等為主要表現(xiàn)，臨床上主要使用促胃腸動(dòng)力藥如甲氧氯普胺、多潘立酮、莫沙必利等進(jìn)行治療，由于目前功能性消化不良的病因與發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，以上藥物治愈后易反復(fù)發(fā)作。參芍養(yǎng)胃方是由黨參、白芍、茯苓等18味藥材組成，具有益氣健脾、消食滯、和氣血的功效。該處方來源于廣東省第二中醫(yī)院的臨床驗(yàn)方，主治脾胃虛弱證，癥見疲勞乏力、食欲不振、胃脘腹部飽脹不適、大便不成形或便秘、舌淡、脈弱，尤其適用于老年虛弱人群。初步的臨床數(shù)據(jù)顯示，該方有效率達(dá)92.56%，具有良好的治療效果及群眾口碑?？紤]功效及沿用臨床長(zhǎng)期的服用方式，本研究擬將其制備為煎膏劑，煎膏劑以滋補(bǔ)作用為主，同時(shí)兼有緩和的治療作用，藥性滋潤(rùn)，多用于慢性疾病的治療，更是具有藥物濃度大、體積小、易保存、服用方便等優(yōu)勢(shì)，通過對(duì)制備工藝參數(shù)的優(yōu)化，并對(duì)該方的藥理作用進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，為將參芍養(yǎng)胃膏開發(fā)為醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑及中藥6類新藥奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀，Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱；Mettler-Toledo XS205DU電子分析天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易有限公司）；JJ3000動(dòng)物電子秤（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

黨參、白芍、茯苓等飲片均購(gòu)自廣東省康美藥業(yè)有限公司，經(jīng)廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院李智勇主任中藥師鑒定，均符合《中國(guó)藥典》2020年版一部藥材項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201741）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；參芍養(yǎng)胃膏為廣東省第二中醫(yī)院制劑室自制（每毫升煎膏相當(dāng)于5.75 g飲片，1日1次，1次20 mL）；枸櫞酸莫沙必利分散片（成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，5 mg/片，1次1片，1日3次，批號(hào)9H009）；乙腈為色譜純?cè)噭耍疄槌兯?，其他試劑均為分析純?/p>

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002。

2 制備工藝

2.1 提取工藝

采用正交試驗(yàn)法，以君藥芍藥苷的質(zhì)量濃度和固形物質(zhì)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間、加水量進(jìn)行優(yōu)選。因素水平設(shè)計(jì)見表1。

2.1.1 正交試驗(yàn)樣品溶液的制備

按處方比列，稱取黨參、茯苓、白術(shù)等17味飲片9份，每份230 g，按表2正交試驗(yàn)安排的方法提取，濾過，減壓濃縮并定容至250 mL。

2.1.2 芍藥苷質(zhì)量濃度的測(cè)定方法[1]

2.1.2.1 色譜條件 色譜柱：Kcromacil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈?0.04%磷酸溶液（體積比14∶86）；柱溫：25℃；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。

2.1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736?201741）10.49 mg，至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1 mL含419.6μg的芍藥苷對(duì)照品溶液。

2.1.2.3 供試品溶液的制備 按處方比列，稱取黨參、白芍、雞內(nèi)金等17味飲片230 g，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，濾過，合并濾液，濃縮并定容250 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.1.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方比例，稱取除白芍外的飲片，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，濾過，合并濾液，濃縮并定容至250 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.1.2.5 專屬性考察 分別吸取對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果顯示，陰性對(duì)照?qǐng)D譜與對(duì)照品、供試品圖譜中芍藥苷相應(yīng)的保留時(shí)間無其他峰干擾，表明專屬性良好。

圖1 芍藥苷質(zhì)量濃度測(cè)定的HPLC圖譜Figure 1 HPLC chromatograms of paeoniflorin

2.1.3 固形物質(zhì)量的測(cè)定

精密吸取各樣品濃縮液25 mL至已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，照干燥失重測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2020年版四部0831）測(cè)定，計(jì)算固形物質(zhì)量。

2.1.4 結(jié)果分析

由直觀分析可知，影響提取效果的因素順序?yàn)榧逯蟠螖?shù)＞煎煮時(shí)間＞加水倍量，得出的最佳工藝組合為A3B3C3，因煎煮次數(shù)水平之間差異不顯著，考慮到節(jié)能降耗問題，最終優(yōu)選的工藝為A2B3C1，即提取2次，加水量為6倍，每次提取1 h，結(jié)果見表2、表3。

2.1.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例，稱取飲片3份，每份230 g，按照優(yōu)化工藝提取，測(cè)定芍藥苷總質(zhì)量分?jǐn)?shù)和固形物質(zhì)量，綜合評(píng)分值分別為90.12、93.26、93.59，表明正交試驗(yàn)優(yōu)選的工藝條件合理、穩(wěn)定可行。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Orthogonal design and results

表3 方差分析結(jié)果表Table 3 Analysis of variance results

2.2 濃縮工藝

采用減壓濃縮（置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，壓力約為-0.08 mPa），平行3次試驗(yàn)，結(jié)果表明濃縮液減壓濃縮至相對(duì)密度約為1.15（60℃）時(shí)，稠膏流動(dòng)性減弱，已較難從收集器中傾倒出，此時(shí)芍藥苷的平均保留率為90.34%；因此，本試驗(yàn)以濃縮至相對(duì)密度約為1.15～1.16為終點(diǎn)。

2.3 成型工藝[2-6]

為了增強(qiáng)滋補(bǔ)調(diào)理的功效及改善口感，本制劑選擇麥芽糖作為賦形劑。按處方比例稱取飲片4份，照前述優(yōu)選的提取方法提取，濾過，濾液分別置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.16（60℃）的稠膏，稱取處方量阿膠及麥芽糖（20、30、40、50 g）加入稠膏中，分別加熱使溶化，混勻，常壓濃縮至玻璃棒趁熱取樣挑起，出現(xiàn)“掛旗現(xiàn)象”，調(diào)整體積至200 mL，測(cè)定相對(duì)密度1，放冷，照《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0601“相對(duì)密度測(cè)定法”測(cè)定相對(duì)密度2，并觀察煎膏性狀、品嘗口感，結(jié)果見表4。

表4 賦形劑用量考察結(jié)果Table 4 Results of excipient dosage

可見，當(dāng)麥芽糖的加入量為制成量的20%時(shí)，煎膏呈黑褐色稠厚的半流體，流動(dòng)性及甜度均適中，故確定麥芽糖的用量為制成量的20%，同時(shí)常壓濃縮至相對(duì)密度約為1.35（60℃）時(shí)，煎膏外觀及相對(duì)密度均較為適宜，故確定收膏至相對(duì)密度1.33～1.37（60℃）。

3 參芍養(yǎng)胃膏對(duì)功能性消化不良大鼠胃腸動(dòng)力的影響[7-11]

3.1 動(dòng)物分組及給藥方法

20只SPF級(jí)大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為4組，每組5只，分別為空白組、模型組、莫沙必利組、參芍養(yǎng)胃膏組，除空白組外，采用夾尾刺激+不規(guī)則喂養(yǎng)復(fù)合法復(fù)制功能性消化不良大鼠模型。造模4周后開始給藥，莫沙必利組1.35 mg/kg，參芍養(yǎng)胃膏組10.35 g/kg，每次2 mL，空白組、模型組給予同體積生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥14 d。

3.2 胃殘留率及腸推進(jìn)率的測(cè)定

末次給藥后，禁食不禁水24 h后，每只大鼠灌胃給予半固體營(yíng)養(yǎng)糊2 mL，30 min后處死動(dòng)物，打開腹腔，結(jié)扎賁門和幽門，取胃，用濾紙拭干后稱全重，沿胃大灣剪開胃體，洗去內(nèi)容物后濾紙拭干稱胃凈重，計(jì)算胃殘留率（%）=（胃全重-胃凈重）/半固體營(yíng)養(yǎng)糊質(zhì)量；剪取幽門至回盲部腸管，測(cè)定小腸全長(zhǎng)及墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)長(zhǎng)度，小腸推進(jìn)率（100%）=墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度/小腸全長(zhǎng)。

3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3.4 結(jié)果

從表5可見，與空白組比較，模型組大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明造模成功；與模型組比較，莫沙必利組、參芍養(yǎng)胃膏組大鼠胃排空率及小腸推進(jìn)率均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與空白組比較，參芍養(yǎng)胃膏組小腸推進(jìn)率差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 討論

功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）是臨床常見的功能性胃腸疾病，目前發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，可能與胃腸動(dòng)力障礙、內(nèi)臟高敏感性、胃腸道內(nèi)環(huán)境及社會(huì)心理因素均有關(guān)[12]。參芍養(yǎng)胃膏由18味中藥組成，黨參甘溫扶脾養(yǎng)胃、補(bǔ)中益氣，白芍酸甘以養(yǎng)營(yíng)陰、緩急止痛共為君藥，全方兼顧健脾、消食、和胃、補(bǔ)血、改善睡眠質(zhì)量等諸多方面功效，煎膏劑作為溫補(bǔ)的良好劑型，病人順應(yīng)性高，多年的臨床應(yīng)用說明該方療效明確。

芍藥苷是君藥白芍的主要有效成分，現(xiàn)代藥理研究也顯示，芍藥苷具有抗腫瘤、抗氧化、抗抑郁、免疫調(diào)節(jié)及補(bǔ)血等多方面的功效[13]，故本試驗(yàn)選取芍藥苷含量作為優(yōu)選制備工藝的考察指標(biāo)，全方采用水提取，正交試驗(yàn)優(yōu)選結(jié)果為提取2次，加水量為6倍，每次提取1 h，再通過控制常壓、減壓濃縮的相對(duì)密度，保證參芍養(yǎng)胃膏的成品質(zhì)量。通過觀察參芍養(yǎng)胃膏對(duì)功能性消化不良大鼠胃腸動(dòng)力的影響，初步證實(shí)該方對(duì)胃排空率及小腸推進(jìn)率有一定的升高作用，但由于功能性消化不良的病因復(fù)雜，單一的動(dòng)物模型具有一定的局限性，后續(xù)將嘗試更多的動(dòng)物模型對(duì)參芍養(yǎng)胃膏的藥理作用進(jìn)行更全面的研究。

表5 大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率結(jié)果Table 5 Results of gastric emptying rate and intestinal propul?sion rate in rats（±s，n=5）

表5 大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率結(jié)果Table 5 Results of gastric emptying rate and intestinal propul?sion rate in rats（±s，n=5）

與模型組比較：*P＜0.05；與空白組比較：＃P＜0.05。

組別空白組模型組莫沙必利組參芍養(yǎng)胃膏組胃排空率/%48.70±8.47 27.89±3.47＃75.95±3.78*＃61.42±6.85*＃小腸推進(jìn)率/%56.49±4.25 36.70±1.51＃46.78±4.41*＃55.57±3.14*