解繼平 萬(wàn) 毅 張 岷

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性疾病[1]，在過(guò)去的幾十年里，包括中國(guó)在內(nèi)的許多國(guó)家均報(bào)道了甲狀腺癌發(fā)病率呈快速增長(zhǎng)的趨勢(shì)[2-4]，引起了社會(huì)的廣泛關(guān)注。但目前甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制還尚未明確。BRCA1和BRCA2是20世紀(jì)90年代發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制因子[5]，兩組基因都參與了基因損傷的修復(fù)[6]，其基因突變會(huì)增加攜帶者患癌的可能性[7-9]。研究發(fā)現(xiàn)，家族性甲狀腺癌組織中BRCA1 mRNA出現(xiàn)表達(dá)下降[10]，同時(shí)甲狀腺癌患者攜帶有BRCA2基因突變[11]，然而關(guān)于BRCA1和BRCA2在散發(fā)性甲狀腺癌組織中表達(dá)情況的報(bào)道還很少見(jiàn)，兩者的關(guān)系也不清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法檢測(cè)甲狀腺癌組織中BRCA1和BRCA2的表達(dá)，旨在探討它們與散發(fā)性甲狀腺癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2015年1月至2018年5月大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院臨床資料完整并均采取甲狀腺外科手術(shù)治療的散發(fā)性甲狀腺癌57例，選取正常甲狀腺組織39例作對(duì)照，患者手術(shù)前均未采取其他抗癌治療。根據(jù)WHO分類標(biāo)準(zhǔn)，將甲狀腺癌按組織學(xué)類型分為乳頭狀癌(39例)、濾泡狀癌(9例)、未分化癌(6例)和髓樣癌(3例)。全部患者標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片。

1.2 方法

使用免疫組化親生物過(guò)氧化物蛋白酶連接法(S-P法)，鼠抗人BRCA1(1∶50)和BRCA2(1∶100)抗體以及S-P試劑盒從福州邁新生物技術(shù)公司購(gòu)入。BRCA1和BRCA2均采用陽(yáng)性甲狀腺癌組織作對(duì)照，正常甲狀腺組織作陰性對(duì)照以及PBS液作空白對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲閱片。BRCA1和BRCA2染色的細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒且其著色強(qiáng)度高于背景非特異性染色，判定為陽(yáng)性。計(jì)算方法：將甲狀腺癌BRCA1和BRCA2陽(yáng)性細(xì)胞的百分比和染色強(qiáng)度根據(jù)評(píng)分后相乘，陽(yáng)性著色細(xì)胞數(shù)判別標(biāo)準(zhǔn)為每張切片上觀察5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。陽(yáng)性著色強(qiáng)度：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩者計(jì)分相乘即為陽(yáng)性等級(jí)：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，5～8為陽(yáng)性(++)，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Kendal's tau-b相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 BRCA1和BRCA2在正常甲狀腺組織和甲狀腺癌中的表達(dá)

正常甲狀腺組織中BRCA1有39例(100%)表達(dá)陽(yáng)性，79.5%呈++ ～ +++表達(dá)；甲狀腺癌中有38例(66.7%)表達(dá)陽(yáng)性，15.8%呈++ ～ +++表達(dá)，與正常甲狀腺組織比較，陽(yáng)性率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=16.208,P<0.05)。正常甲狀腺組織中BRCA2有37例(94.9%)表達(dá)陽(yáng)性，69.2%呈++ ～ +++表達(dá)；甲狀腺癌中有24例(42.1%)表達(dá)陽(yáng)性，12.3%呈++ ～ +++表達(dá)，與正常甲狀腺組織比較，陽(yáng)性率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.831,P<0.05)(表1)。

表1 BRCA1和BRCA2在正常甲狀腺組織和甲狀腺癌中的表達(dá)結(jié)果/例

2.2 BRCA1和BRCA2表達(dá)與甲狀腺病理指標(biāo)的關(guān)系

BRCA1和BRCA2表達(dá)與患者年齡有關(guān)，<50歲的甲狀腺癌患者BRCA1和BRCA2表達(dá)的陽(yáng)性率均大于≥50歲的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.476,P<0.05;χ2=9.977,P<0.05)；BRCA1和BRCA2表達(dá)與腫塊直徑有關(guān)，腫塊直徑<4 cm甲狀腺癌患者BRCA1和BRCA2表達(dá)的陽(yáng)性率均大于腫塊直徑≥4 cm患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.844,P<0.05;χ2=4.212,P<0.05)，BRCA1和BRCA2表達(dá)與患者性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雙側(cè)癌和組織學(xué)類型無(wú)關(guān)(P>0.05)(表2)。

表2 BRCA1和BRCA2表達(dá)與甲狀腺病理指標(biāo)關(guān)系/例

2.3 甲狀腺癌中BRCA1與BRCA2表達(dá)的關(guān)系

在29例BRCA1“+”的甲狀腺癌病例中，有12例未檢測(cè)到BRCA2表達(dá)；在9例BRCA1“++”的甲狀腺癌病例中，有2例未檢測(cè)到BRCA2表達(dá)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后，BRCA1和BRCA2表達(dá)之間呈強(qiáng)相關(guān)關(guān)系(γ=0.660,P<0.05)(表3)。

表3 甲狀腺癌中BRCA1和BRCA2表達(dá)的關(guān)系/例

3 討論

BRCA1和BRCA2基因定位于人類染色體17q21，可編碼分子量為220 kD的BRCA1和BRCA2蛋白，參與DNA損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞周期調(diào)控、中心體復(fù)制、DNA損傷修復(fù)、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等相關(guān)維持基因組穩(wěn)定性的多條細(xì)胞信號(hào)通路[12-13]。研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1會(huì)增加甲狀腺乳頭狀癌的易感性[14]，這提示BRCA1可能在甲狀腺癌發(fā)生上發(fā)揮了一定的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在正常細(xì)胞中BRCA1蛋白定位于細(xì)胞核內(nèi)。但由于細(xì)胞周期變化，BRCA1在甲狀腺癌中的定位在目前的研究中仍未達(dá)成一致，張岷等認(rèn)為甲狀腺癌只位于細(xì)胞核內(nèi)[15]，而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BRCA1除定位于細(xì)胞核內(nèi)，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)也表達(dá)，這可能是由于家族性甲狀腺癌和散發(fā)性甲狀腺癌組織中BRCA1分布不一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，BRCA1在甲狀腺癌中表達(dá)的陽(yáng)性率和染色程度均降低，并且BRCA1表達(dá)下降與患者年齡和腫塊直徑有關(guān)，但與患者性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雙側(cè)癌及組織學(xué)類型無(wú)關(guān)。綜上所述，BRCA1能否作為散發(fā)性甲狀腺癌獨(dú)立的診斷和預(yù)后判定指標(biāo)還需進(jìn)一步研究。

BRCA2是在BRCA1之后發(fā)現(xiàn)的第2個(gè)乳腺抑癌基因，參與染色體重組機(jī)制對(duì)雙鏈斷裂的修復(fù)作用[16]。本研究結(jié)果顯示，BRCA2在正常甲狀腺組織中定位于細(xì)胞核內(nèi)，在甲狀腺癌組織中定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。BRCA2在甲狀腺癌中的陽(yáng)性率和染色程度較正常甲狀腺組織均下降，說(shuō)明可能由于BRCA2突變喪失了其本身抑癌基因的能力，組織細(xì)胞呈現(xiàn)無(wú)限制無(wú)序性增生，引起甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展，從側(cè)面顯示BRCA2在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，但BRCA2能否作為散發(fā)性甲狀腺癌的診斷和預(yù)后判定指標(biāo)也需進(jìn)一步研究。

目前認(rèn)為BRCA1和BRCA2都是腫瘤抑制基因，編碼抑癌蛋白，起到抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，但更具體的作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。本研究顯示BRCA1和BRCA2的表達(dá)之間產(chǎn)生強(qiáng)相關(guān)關(guān)系，BRCA1和BRCA2在甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用存在相關(guān)性，它們可共同參與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展。因此推測(cè)，隨著對(duì)BRCA1和BRCA2更加深入的研究，在闡明散發(fā)性甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制、早期診斷和判斷預(yù)后以及藥物敏感性等方面具有一定的應(yīng)用價(jià)值。