韓菊學(xué)

（河西學(xué)院人事處，甘肅張掖734000）

海鮮菇（Hypsizigus marmoreus）又名真姬菇、玉蕈、斑玉蕈，是我國(guó)食用菌工廠化生產(chǎn)的重要品種和最具發(fā)展?jié)摿Φ氖秤镁缕贩N之一[1]。海鮮菇栽培原料營(yíng)養(yǎng)成分、合理配比、后熟期是影響海鮮菇高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的重要因素。

近年來，海鮮菇原料棉籽殼價(jià)格上漲，因此篩選以玉米芯為主料培養(yǎng)料配方顯得尤為重要。為此筆者首先對(duì)引進(jìn)的兩個(gè)海鮮菇菌株進(jìn)行品種鑒定，并進(jìn)一步進(jìn)行適宜培養(yǎng)料配方篩選及最適后熟期試驗(yàn)，以期為當(dāng)?shù)毓S化栽培海鮮菇提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株由甘肅省應(yīng)用真菌工程實(shí)驗(yàn)室提供，引自張掖貫黨珍稀菇業(yè)有限公司，分別命名為海鮮菇1 號(hào)、海鮮菇2 號(hào)。原種、栽培種培養(yǎng)基：雜木屑78%，麩皮20%，白糖1%，碳酸鈣1%。

1.2 供試配方

共設(shè)4 個(gè)培養(yǎng)料配方。配方1：玉米芯78%；配方2：玉米芯48%，棉籽殼10%，木屑20%；配方3：玉米芯38%，棉籽殼20%，木屑20%；配方4：玉米芯28%，棉籽殼30%，木屑20%；對(duì)照配方（CK）：棉籽殼38%，木屑40%。以上配方均添加麩皮15%，玉米面5%，石灰1%，石膏1%，料含水量65%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 分子鑒定

將保存于4 ℃的海鮮菇母種在無菌條件下接在PDA培養(yǎng)基平板上，22 ℃避光培養(yǎng)直至長(zhǎng)滿平板，無菌操作刮取生長(zhǎng)旺盛的菌絲，用真菌試劑盒提取菌株的基因組DNA；之后進(jìn)行PCR擴(kuò)增及檢測(cè)[2]。

1.3.2 培養(yǎng)料配方篩選

選擇新鮮干燥、無霉變的培養(yǎng)料，木屑須淋水堆制發(fā)酵2個(gè)月。按照配方配料，準(zhǔn)確稱取各材料，加水?dāng)嚢杈鶆颍琾H 8.0。選用折徑17 cm×33 cm的低壓聚乙烯塑料袋，每袋裝料折干350 g左右。采用高壓滅菌，在0.15 MPa 保持2.5 h。滅菌結(jié)束溫度降至室溫時(shí)轉(zhuǎn)移到接種室接種，每一配方接種30袋，3次重復(fù)。接種后的料袋移至培養(yǎng)室，溫度22～25 ℃，空氣相對(duì)濕度為50%～65%，二氧化碳780～880 mg/m3，避光培養(yǎng)。養(yǎng)菌結(jié)束后繼續(xù)培養(yǎng)15 d 后移至出菇室，保持室內(nèi)空氣相對(duì)濕度85%～95%，溫度14～16 ℃ ，二 氧 化 碳 3 900～5 900 mg/m3，光 照 500～2 000 lx。采收時(shí)，觀察記錄子實(shí)體形態(tài)特征，測(cè)量計(jì)算平均菌柄長(zhǎng)、平均菌柄直徑、分支數(shù)（所有子實(shí)體個(gè)數(shù)/料袋數(shù)），并計(jì)算袋鮮菇產(chǎn)量和袋干菇產(chǎn)量，篩選出最適配方。

1.3.3 海鮮菇最佳后熟時(shí)間

以1.3.2 獲得的最優(yōu)配方為后熟期比較試驗(yàn)培養(yǎng)料配方。按1.3.2中的方法裝袋、滅菌、接種、培養(yǎng)菌絲。待菌絲營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)結(jié)束后，分別進(jìn)行0、10、20、30、40、50、60 d 的后熟培養(yǎng)，每個(gè)處理重復(fù) 30 袋。觀察菌絲色澤、長(zhǎng)勢(shì)和菌袋質(zhì)地，并測(cè)定培養(yǎng)料的含水量和菌袋質(zhì)量。菌袋質(zhì)量：隨機(jī)選取20 個(gè)菌袋，測(cè)其質(zhì)量，取其平均值。培養(yǎng)料含水量：隨機(jī)選取3個(gè)菌袋，每個(gè)菌袋單獨(dú)混勻，稱取5 g培養(yǎng)料，用AND MF-50水分測(cè)定儀，測(cè)其含水量，3個(gè)菌袋分別測(cè)3次重復(fù)，取平均值。

后熟期培養(yǎng)結(jié)束后轉(zhuǎn)移至出菇房，參照1.3.2進(jìn)行出菇管理。并記錄現(xiàn)蕾時(shí)間，采收統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 分子鑒定

2.1.1 DNA提取

對(duì)引進(jìn)的兩個(gè)菌株DNA 進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳后，UVP 凝膠成像下可觀察到兩個(gè)菌株的DNA條帶明亮完整，無拖尾現(xiàn)象。所獲得的產(chǎn)物片段在750 bp 左右，符合基于PCR 反映的后續(xù)分子生物學(xué)方面的試驗(yàn)研究。

2.1.2 ITS-PCR擴(kuò)增分析

將供試菌株的序列測(cè)定結(jié)果提交至GenBank（基因數(shù)據(jù)庫），在NCBI（美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心）網(wǎng)站上進(jìn)行BLAST（生物大分子序列比對(duì)搜索工具）比對(duì)，結(jié)果表明，供試菌株為海鮮菇，且為兩個(gè)不同品種。

2.2 供試配方對(duì)海鮮菇商品性狀及產(chǎn)量的影響

表1 供試配方對(duì)海鮮菇1號(hào)商品性狀及產(chǎn)量的影響

供試配方對(duì)海鮮菇菌柄、菌蓋影響不大。海鮮菇1號(hào)菌柄長(zhǎng)4.86～6.56 cm，菌蓋直徑1.25～1.76 cm；海鮮菇2 號(hào)菌柄長(zhǎng)4.93～6.49 cm，菌蓋直徑1.17～1.74 cm。供試配方對(duì)海鮮菇分支數(shù)和產(chǎn)量的影響較大：海鮮菇 1 號(hào)，配方 4 分支數(shù)最多，為 59 個(gè)/袋，比分支數(shù)最少的配方1 多32 個(gè)/袋；海鮮菇2 號(hào)，配方4分支數(shù)最多，為65個(gè)/袋，比分支數(shù)最少的配方1多32 個(gè)/袋。海鮮菇1 號(hào)，配方4 鮮菇袋產(chǎn)量最高為369.61 g，比產(chǎn)量最低的 CK 多 95.54 g；海鮮菇 2 號(hào)，配方4 鮮菇袋產(chǎn)量最高為331.68 g，比產(chǎn)量最低的CK多54.70 g，達(dá)到顯著差異水平。

表2 供試配方對(duì)海鮮菇2號(hào)商品性狀及產(chǎn)量的影響

綜合考慮，配方4（玉米芯28%，棉籽殼30%，木屑20%，麩皮15%，玉米面5%，石灰1%，石膏1%）為試驗(yàn)最佳配方。

2.3 后熟時(shí)間對(duì)海鮮菇生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.3.1 后熟時(shí)間對(duì)海鮮菇菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響

由表3 可知，未經(jīng)過后熟培養(yǎng)的菌絲，長(zhǎng)勢(shì)弱，色澤灰白，菌袋質(zhì)地不緊實(shí)；后熟培養(yǎng)10～20 d，海鮮菇1 號(hào)、2 號(hào)的菌絲長(zhǎng)勢(shì)、色澤和菌袋質(zhì)地均隨著后熟培養(yǎng)天數(shù)的增加而有所改觀。后熟培養(yǎng)20～40 d的菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好，兩菌株菌絲顏色潔白且菌袋質(zhì)地緊實(shí)；后熟培養(yǎng)超過40 d 菌絲長(zhǎng)勢(shì)明顯變?nèi)?，菌絲顏色較潔白，菌袋質(zhì)地緊實(shí)度有所下降。這可能是因?yàn)楹笫炫囵B(yǎng)0～20 d，海鮮菇菌絲正處于營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)向生殖生長(zhǎng)的過渡期，菌絲繼續(xù)分解培養(yǎng)料，使菌絲的活力進(jìn)一步增強(qiáng)；超過40 d 后，菌絲已完成后熟而趨于老化，加之培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)易失水，從而使菌絲活力下降。綜合考慮后熟時(shí)間為40 d 左右為宜，菌絲長(zhǎng)勢(shì)旺盛、顏色潔白、菌袋質(zhì)地緊實(shí)。

表3 后熟時(shí)間對(duì)海鮮菇菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.3.2 后熟時(shí)間對(duì)海鮮菇菌袋質(zhì)量和含水量的影響

由表4可知，隨著后熟時(shí)間的增加，菌袋質(zhì)量逐漸降低，而含水量逐漸上升。后熟培養(yǎng)40 d 與30 d菌袋質(zhì)量相比，海鮮菇1 號(hào)失重為9.92 g，海鮮菇2號(hào)失重為8.89 g；菌袋含水量的變化，后熟時(shí)間為30 d 與40 d 的含水量變化最大，后熟40 d 比后熟30 d 菌袋含水量海鮮菇1 號(hào)上升了3.96%，海鮮菇2號(hào)上升了2.14%。菌絲代謝活動(dòng)旺盛，消耗培養(yǎng)料的養(yǎng)分，同時(shí)產(chǎn)生一定量的水分、二氧化碳和其他代謝產(chǎn)物，致使菌袋質(zhì)量減少而含水量上升。由此可見，30～40 d的后熟時(shí)間段內(nèi)菌絲生長(zhǎng)還處于旺盛時(shí)期，會(huì)繼續(xù)分解培養(yǎng)料積累養(yǎng)分，為出菇后子實(shí)體的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。這與菌絲色澤、長(zhǎng)勢(shì)與菌袋質(zhì)地的表現(xiàn)相一致。

圖2 海鮮菇1號(hào)在供試配方中生長(zhǎng)情況

圖3 海鮮菇2號(hào)在供試配方中生長(zhǎng)情況

表4 不同后熟時(shí)間對(duì)海鮮菇菌袋質(zhì)量和含水量的影響

2.3.3 后熟時(shí)間對(duì)海鮮菇現(xiàn)蕾時(shí)間及產(chǎn)量的影響

表5 后熟時(shí)間對(duì)海鮮菇現(xiàn)蕾時(shí)間及產(chǎn)量的影響

由表5 可知，后熟培養(yǎng)能明顯提高海鮮菇的袋產(chǎn)量，隨著后熟天數(shù)的增加，鮮菇產(chǎn)量先增加后減少。海鮮菇1 號(hào)，后熟30 d、40 d 的產(chǎn)量高，分別為236.47 g、278.94 g，海鮮菇 2 號(hào)，后熟 30 d、40 d 的產(chǎn)量高，分別為239.52 g、281.42 g。未后熟培養(yǎng)（0 d）的菇蕾現(xiàn)蕾最晚，平均為17 d，且產(chǎn)量最低，海鮮菇1 號(hào)產(chǎn)量?jī)H為 196.42 g，比后熟 40 d 少 82.52 g；海鮮菇 2 號(hào)含量?jī)H為 199.65 g，比后熟 40 d 的少 81.77 g，達(dá)到差異顯著水平；后熟培養(yǎng)50 d、60 d，雖然現(xiàn)蕾早，但產(chǎn)量無優(yōu)勢(shì)。工廠化栽培海鮮菇一般需要大型控溫、控濕設(shè)備，故過長(zhǎng)的后熟時(shí)間會(huì)增加生產(chǎn)成本。綜合考慮，最適后熟時(shí)間以40 d左右為宜。

3 小結(jié)

甘肅張掖的玉米芯資源豐富，取材方便，因此在棉籽殼價(jià)格不斷上漲的當(dāng)下，用玉米芯栽培海鮮菇不僅降低生產(chǎn)成本，還實(shí)現(xiàn)了玉米芯資源化利用。試驗(yàn)篩選出最佳玉米芯栽培海鮮菇培養(yǎng)料配方（玉米芯28%，棉籽殼30%，木屑20%，麩皮15%，玉米面5%，石灰1%，石膏1%）和最適后熟時(shí)間（40 d），對(duì)玉米芯工廠化栽培海鮮菇具有現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義。