崔文浩 葉勇金 鄭明海 鄭江程*
(1衢州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院,浙江衢州324000;2衢州市柯城區(qū)珍客來家庭農(nóng)場(chǎng),浙江衢州324000;3 開化縣農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,浙江衢州324000)
羊肚菌(Morchella)隸屬子囊菌門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科、羊肚菌屬[1],是子囊菌中一類著名的食藥用真菌。目前各地栽培羊肚菌菌種來源不一,生產(chǎn)中常出現(xiàn)產(chǎn)量不穩(wěn)定等問題。蔡英麗等[2]、李玉[3]研究發(fā)現(xiàn),不同羊肚菌栽培菌株的種性存在差異。為此,筆者對(duì)收集的5 個(gè)羊肚菌菌株進(jìn)行不同母種培養(yǎng)基配方、栽培種培養(yǎng)基配方、出菇試驗(yàn),篩選出綜合形狀優(yōu)良的羊肚菌菌株及其適宜母種與栽培種的培養(yǎng)基,為衢州地區(qū)羊肚菌品種選育和菌種制作提供一定的理論參考。
Y-Q1、Y-Q2、Y-Q3、Y-Q4、Y-Q5為筆者采集、組織分離并保存的菌株,其中Y-Q1、Y-Q3、Y-Q4為四川省、浙江省衢州、武漢地區(qū)栽培的六妹系列菌株(M.sextelata),Y-Q2為重慶當(dāng)?shù)仄髽I(yè)自主選育菌株,Y-Q5為武漢栽培的梯棱系列菌株(M.importuna)。
1.2.1 母種培養(yǎng)基配方試驗(yàn)
設(shè)4 個(gè)母種培養(yǎng)基配方,配方1:馬鈴薯200 g,葡萄糖 20 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,K2HPO41 g,瓊脂20 g,加水定容至1 000 mL;配方2:土壤200 g,葡萄糖20 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,K2HPO41 g,瓊脂20 g,加水定容至1 000 mL;配方3:馬鈴薯200 g,麩皮10 g,葡萄糖 20 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,K2HPO41 g,瓊脂20 g,加水定容至1 000 mL;配方4:麥粒200 g,葡萄糖 20 g,蛋白胨 2 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,K2HPO41 g,瓊脂20 g,加水定容至1 000 mL。配方中的馬鈴薯、麩皮和麥粒加水煮20 min 后取浸提液;土壤烘干磨碎過篩(2 mm),放入錐形瓶?jī)?nèi)加水振蕩10 min 后取浸提液[4]。培養(yǎng)基滅菌后在無菌環(huán)境下倒入平皿內(nèi),冷卻凝固后接入活化的菌絲塊(用已滅菌的接種針挑?。?。每個(gè)配方3個(gè)重復(fù)。
1.2.2 栽培種培養(yǎng)基配方試驗(yàn)
設(shè)4 個(gè)栽培種培養(yǎng)基配方,配方①:木屑30%,礱糠30%,麥粒30%,土10%;配方②:木屑60%,麥粒30%,土10%;配方③:木屑30%,礱糠30%,麥粒30%,土5%,生物炭5%;配方④:木屑30%,豆皮30%,麥粒30%,土10%。配方中的小麥需提前用石灰水浸泡2 d。
采用14 cm×30 cm×0.004 cm 規(guī)格的聚丙烯袋手工裝料,要求邊裝料邊抖動(dòng)袋使料裝得均勻,最后輕壓料面。每袋裝料量550~650 g。培養(yǎng)料袋121 ℃滅菌120 min,待冷卻后在無菌條件下接種(配方1 活化菌種)。用打孔器(直徑6 mm)截取活化菌絲塊,之后用接種針挑去3塊接種于料袋內(nèi),然后將料袋擺放在23 ℃、黑暗條件下培養(yǎng)菌絲。每個(gè)配方設(shè)15個(gè)重復(fù)。
1.2.3 出菇試驗(yàn)
鋼架大棚內(nèi)共設(shè)15個(gè)栽培小區(qū),小區(qū)規(guī)格為畦寬1 m,畦間溝寬50 cm,畦面長(zhǎng)5 m(折算小區(qū)面積為5 m2)。每個(gè)菌株隨機(jī)播種3個(gè)小區(qū)。
栽培種培養(yǎng)基選擇配方③(木屑30%,礱糠30%,麥粒30%,土壤10%),按1.5 袋菌種用量均勻撒播在小區(qū)內(nèi),覆土14 d 內(nèi)擺放營(yíng)養(yǎng)包,按照常規(guī)方式進(jìn)行栽培管理。出菇前14 d 撤掉外源營(yíng)養(yǎng)袋,澆大水催菇。出菇期間保持空氣相對(duì)濕度80%~95%[5]。
菌絲塊接種萌發(fā)后,給平皿統(tǒng)一劃起始線,2 d后劃終止線,計(jì)算菌絲日均長(zhǎng)速,最后取3個(gè)重復(fù)的平均值;栽培種菌絲生長(zhǎng)至菌袋肩下3 cm 左右劃起始線,5 d 后再劃終止線,計(jì)算菌絲日均長(zhǎng)速,取15個(gè)重復(fù)的平均值。同時(shí)觀察記錄供試配方菌絲長(zhǎng)勢(shì)和顏色,菌核出現(xiàn)時(shí)間、菌核顏色和數(shù)量。
菌絲日均長(zhǎng)速(mm/d)=(終止線菌落長(zhǎng)度-起始線菌落長(zhǎng)度)/培養(yǎng)天數(shù)
羊肚菌采收標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[6],當(dāng)羊肚菌子囊果棱紋展開、蜂窩狀凹陷基本展開時(shí)采收。采收時(shí)用小刀齊土割下菌柄基部,統(tǒng)計(jì)各小區(qū)羊肚菌產(chǎn)量。每個(gè)小區(qū)選取20 個(gè)形態(tài)正常的羊肚菌樣品稱量單菇重。
對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)分析,用Duncan法比較差異顯著性。
5 株羊肚菌菌絲在供試配方培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng),但菌絲平均長(zhǎng)速及菌落特征有差異(表1、表2)。配方1 培養(yǎng)基上5 個(gè)羊肚菌菌株菌絲長(zhǎng)速最快,其中Y-Q4菌絲平均長(zhǎng)速為1.4 mm/d,快于其他4個(gè)菌株;Y-Q1 在配方2 培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最慢,Y-Q2、Y-Q4 在配方4 培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)速最慢,Y-Q5 在配方3 培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)最慢,均與配方1 差異顯著。Y-Q3 菌絲平均長(zhǎng)速在供試配方間無顯著差異。
由圖1,表2 可見,配方1 培養(yǎng)基上的羊肚菌菌絲密度為中等至濃密,顏色呈白色至淡黃色,供試羊肚菌菌株均產(chǎn)生白色絨毛狀的菌核;配方2 的羊肚菌菌絲稀疏,菌絲長(zhǎng)勢(shì)較差,但菌核形成最早,菌核呈白色顆粒狀,其中Y-Q5 的菌核在平皿中央聚集;配方3 與配方1 相比,羊肚菌菌絲更加濃密,菌絲顏色更黃,沒有產(chǎn)生菌核,只有Y-Q4 有少量菌絲扭結(jié);配方4 羊肚菌菌絲稀疏,菌絲顏色黃色為主。結(jié)合羊肚菌菌絲生長(zhǎng)情況可得,配方1 培養(yǎng)基較適合供試羊肚菌母種菌絲生長(zhǎng)。
表1 5株羊肚菌在不同母種培養(yǎng)基中的菌絲平均長(zhǎng)速(P<0.05)
表2 5株羊肚菌在供試母種培養(yǎng)基上的菌落特征
圖1 5株羊肚菌在供試母種培養(yǎng)基上的菌絲及菌核特征
表3 5株羊肚菌在不同栽培種培養(yǎng)基中的菌絲生長(zhǎng)速度(P<0.05)
由表3可知,Y-Q1、Y-Q2、Y-Q4、Y-Q5在供試栽培種培養(yǎng)基中菌絲平均長(zhǎng)速無顯著差異;Y-Q3在配方④培養(yǎng)基中的菌絲平均長(zhǎng)速快于其他3個(gè)配方,且差異顯著(P<0.05),可能是培養(yǎng)基中含有豆皮的緣故。由表4可知,供試栽培種培養(yǎng)基配方中,各羊肚菌菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)中等,顏色呈淡黃至黃色。菌核特征,Y-Q5 在配方①、配方②上無菌核形成;Y-Q4 在配方①、配方②中形成顆粒狀菌核,在配方④上為白色塊狀菌核;其他菌株形成的菌核均為黃色或淡黃色,絨毛狀。Y-Q1、Y-Q2、Y-Q3在供試栽培種培養(yǎng)基中菌絲長(zhǎng)勢(shì)、形態(tài)、菌核形態(tài)相似。
表4 5株羊肚菌在供試栽培種培養(yǎng)基上的菌落特征
菌株Y-Q2 雖在補(bǔ)水后產(chǎn)生大量原基,但原基迅速變黃枯萎,未能發(fā)育成子實(shí)體。其他4 個(gè)菌株均正常出菇,結(jié)果見表5。由表5可知,試驗(yàn)條件下,供試羊肚菌菌株單位平均產(chǎn)量和單菇質(zhì)量有顯著差異(P<0.05)。菌株Y-Q1 的單位平均產(chǎn)量最高,而菌株Y-Q4 的平均單菇重最高。菌株Y-Q5 的單位平均產(chǎn)量和單菇重都是最低的,且與其他菌株有顯著性差異。
表5 供試羊肚菌栽培結(jié)果
圖2 大棚栽培羊肚菌出菇狀態(tài)
5 個(gè)羊肚菌菌株在4 種母種培養(yǎng)基和4 種栽培種培養(yǎng)基中均能生長(zhǎng)。母種培養(yǎng)基配方1中供試的5 個(gè)羊肚菌菌株菌絲長(zhǎng)速、顏色、密度和菌核等性狀最優(yōu),可作為羊肚菌母種培養(yǎng)基的配方。配方④栽培種培養(yǎng)基適合Y-Q3 菌株生長(zhǎng)。綜合栽培試驗(yàn)結(jié)果,Y-Q1、Y-Q4 菌株綜合性狀最優(yōu),具有較好的推廣價(jià)值。
Y-Q5 菌株菌絲長(zhǎng)速、形態(tài),菌核量及子實(shí)體產(chǎn)量等最差,不具有推廣價(jià)值。Y-Q2 菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)良好,補(bǔ)水后產(chǎn)生大量原基,但后期均枯萎而死,可能與該菌株原基不耐高溫有關(guān)。Y-Q1 菌株在供試栽培種培養(yǎng)基中長(zhǎng)速最快,菌核量最多,小區(qū)單產(chǎn)最高;Y-Q4 菌株在供試母種培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)最快,且子實(shí)體單菇重最高。Y-Q1、YQ4 這兩個(gè)菌株均為六妹系列(M.sextelata),說明六妹系列羊肚菌菌株比較適宜衢州環(huán)境條件。
相比配方1 母種培養(yǎng)基,供試羊肚菌菌株在配方3、配方4培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)慢,菌核量少或無,是否與培養(yǎng)基中添加麩皮、麥粒導(dǎo)致氮素過量有關(guān);配方2菌核形成最早,菌核多呈白色顆粒狀,是否與培養(yǎng)基加入土壤浸出液有關(guān)。這些有待進(jìn)一步研究。