崔文浩 葉勇金 鄭明海 鄭江程*

（1衢州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江衢州324000；2衢州市柯城區(qū)珍客來家庭農(nóng)場(chǎng)，浙江衢州324000；3 開化縣農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，浙江衢州324000）

羊肚菌（Morchella）隸屬子囊菌門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科、羊肚菌屬[1]，是子囊菌中一類著名的食藥用真菌。目前各地栽培羊肚菌菌種來源不一，生產(chǎn)中常出現(xiàn)產(chǎn)量不穩(wěn)定等問題。蔡英麗等[2]、李玉[3]研究發(fā)現(xiàn)，不同羊肚菌栽培菌株的種性存在差異。為此，筆者對(duì)收集的5 個(gè)羊肚菌菌株進(jìn)行不同母種培養(yǎng)基配方、栽培種培養(yǎng)基配方、出菇試驗(yàn)，篩選出綜合形狀優(yōu)良的羊肚菌菌株及其適宜母種與栽培種的培養(yǎng)基，為衢州地區(qū)羊肚菌品種選育和菌種制作提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試羊肚菌菌株

Y-Q1、Y-Q2、Y-Q3、Y-Q4、Y-Q5為筆者采集、組織分離并保存的菌株，其中Y-Q1、Y-Q3、Y-Q4為四川省、浙江省衢州、武漢地區(qū)栽培的六妹系列菌株（M.sextelata），Y-Q2為重慶當(dāng)?shù)仄髽I(yè)自主選育菌株，Y-Q5為武漢栽培的梯棱系列菌株（M.importuna）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 母種培養(yǎng)基配方試驗(yàn)

設(shè)4 個(gè)母種培養(yǎng)基配方，配方1：馬鈴薯200 g，葡萄糖 20 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL；配方2：土壤200 g，葡萄糖20 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL；配方3：馬鈴薯200 g，麩皮10 g，葡萄糖 20 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL；配方4：麥粒200 g，葡萄糖 20 g，蛋白胨 2 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL。配方中的馬鈴薯、麩皮和麥粒加水煮20 min 后取浸提液；土壤烘干磨碎過篩（2 mm），放入錐形瓶?jī)?nèi)加水振蕩10 min 后取浸提液[4]。培養(yǎng)基滅菌后在無菌環(huán)境下倒入平皿內(nèi)，冷卻凝固后接入活化的菌絲塊（用已滅菌的接種針挑?。?。每個(gè)配方3個(gè)重復(fù)。

1.2.2 栽培種培養(yǎng)基配方試驗(yàn)

設(shè)4 個(gè)栽培種培養(yǎng)基配方，配方①：木屑30%，礱糠30%，麥粒30%，土10%；配方②：木屑60%，麥粒30%，土10%；配方③：木屑30%，礱糠30%，麥粒30%，土5%，生物炭5%；配方④：木屑30%，豆皮30%，麥粒30%，土10%。配方中的小麥需提前用石灰水浸泡2 d。

采用14 cm×30 cm×0.004 cm 規(guī)格的聚丙烯袋手工裝料，要求邊裝料邊抖動(dòng)袋使料裝得均勻，最后輕壓料面。每袋裝料量550～650 g。培養(yǎng)料袋121 ℃滅菌120 min，待冷卻后在無菌條件下接種（配方1 活化菌種）。用打孔器（直徑6 mm）截取活化菌絲塊，之后用接種針挑去3塊接種于料袋內(nèi)，然后將料袋擺放在23 ℃、黑暗條件下培養(yǎng)菌絲。每個(gè)配方設(shè)15個(gè)重復(fù)。

1.2.3 出菇試驗(yàn)

鋼架大棚內(nèi)共設(shè)15個(gè)栽培小區(qū)，小區(qū)規(guī)格為畦寬1 m，畦間溝寬50 cm，畦面長(zhǎng)5 m（折算小區(qū)面積為5 m2）。每個(gè)菌株隨機(jī)播種3個(gè)小區(qū)。

栽培種培養(yǎng)基選擇配方③（木屑30%，礱糠30%，麥粒30%，土壤10%），按1.5 袋菌種用量均勻撒播在小區(qū)內(nèi)，覆土14 d 內(nèi)擺放營(yíng)養(yǎng)包，按照常規(guī)方式進(jìn)行栽培管理。出菇前14 d 撤掉外源營(yíng)養(yǎng)袋，澆大水催菇。出菇期間保持空氣相對(duì)濕度80%～95%[5]。

1.3 考察項(xiàng)目及方法

菌絲塊接種萌發(fā)后，給平皿統(tǒng)一劃起始線，2 d后劃終止線，計(jì)算菌絲日均長(zhǎng)速，最后取3個(gè)重復(fù)的平均值；栽培種菌絲生長(zhǎng)至菌袋肩下3 cm 左右劃起始線，5 d 后再劃終止線，計(jì)算菌絲日均長(zhǎng)速，取15個(gè)重復(fù)的平均值。同時(shí)觀察記錄供試配方菌絲長(zhǎng)勢(shì)和顏色，菌核出現(xiàn)時(shí)間、菌核顏色和數(shù)量。

菌絲日均長(zhǎng)速（mm/d）=（終止線菌落長(zhǎng)度-起始線菌落長(zhǎng)度）/培養(yǎng)天數(shù)

羊肚菌采收標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[6]，當(dāng)羊肚菌子囊果棱紋展開、蜂窩狀凹陷基本展開時(shí)采收。采收時(shí)用小刀齊土割下菌柄基部，統(tǒng)計(jì)各小區(qū)羊肚菌產(chǎn)量。每個(gè)小區(qū)選取20 個(gè)形態(tài)正常的羊肚菌樣品稱量單菇重。

1.4 數(shù)據(jù)分析

對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)分析，用Duncan法比較差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試母種培養(yǎng)基上各羊肚菌菌株生長(zhǎng)情況

5 株羊肚菌菌絲在供試配方培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，但菌絲平均長(zhǎng)速及菌落特征有差異（表1、表2）。配方1 培養(yǎng)基上5 個(gè)羊肚菌菌株菌絲長(zhǎng)速最快，其中Y-Q4菌絲平均長(zhǎng)速為1.4 mm/d，快于其他4個(gè)菌株；Y-Q1 在配方2 培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最慢，Y-Q2、Y-Q4 在配方4 培養(yǎng)基上菌絲長(zhǎng)速最慢，Y-Q5 在配方3 培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)最慢，均與配方1 差異顯著。Y-Q3 菌絲平均長(zhǎng)速在供試配方間無顯著差異。

由圖1，表2 可見，配方1 培養(yǎng)基上的羊肚菌菌絲密度為中等至濃密，顏色呈白色至淡黃色，供試羊肚菌菌株均產(chǎn)生白色絨毛狀的菌核；配方2 的羊肚菌菌絲稀疏，菌絲長(zhǎng)勢(shì)較差，但菌核形成最早，菌核呈白色顆粒狀，其中Y-Q5 的菌核在平皿中央聚集；配方3 與配方1 相比，羊肚菌菌絲更加濃密，菌絲顏色更黃，沒有產(chǎn)生菌核，只有Y-Q4 有少量菌絲扭結(jié)；配方4 羊肚菌菌絲稀疏，菌絲顏色黃色為主。結(jié)合羊肚菌菌絲生長(zhǎng)情況可得，配方1 培養(yǎng)基較適合供試羊肚菌母種菌絲生長(zhǎng)。

表1 5株羊肚菌在不同母種培養(yǎng)基中的菌絲平均長(zhǎng)速（P＜0.05）

表2 5株羊肚菌在供試母種培養(yǎng)基上的菌落特征

圖1 5株羊肚菌在供試母種培養(yǎng)基上的菌絲及菌核特征

表3 5株羊肚菌在不同栽培種培養(yǎng)基中的菌絲生長(zhǎng)速度（P＜0.05）

2.2 供試栽培種培養(yǎng)基中供試羊肚菌菌株生長(zhǎng)情況

由表3可知，Y-Q1、Y-Q2、Y-Q4、Y-Q5在供試栽培種培養(yǎng)基中菌絲平均長(zhǎng)速無顯著差異；Y-Q3在配方④培養(yǎng)基中的菌絲平均長(zhǎng)速快于其他3個(gè)配方，且差異顯著（P＜0.05），可能是培養(yǎng)基中含有豆皮的緣故。由表4可知，供試栽培種培養(yǎng)基配方中，各羊肚菌菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)中等，顏色呈淡黃至黃色。菌核特征，Y-Q5 在配方①、配方②上無菌核形成；Y-Q4 在配方①、配方②中形成顆粒狀菌核，在配方④上為白色塊狀菌核；其他菌株形成的菌核均為黃色或淡黃色，絨毛狀。Y-Q1、Y-Q2、Y-Q3在供試栽培種培養(yǎng)基中菌絲長(zhǎng)勢(shì)、形態(tài)、菌核形態(tài)相似。

表4 5株羊肚菌在供試栽培種培養(yǎng)基上的菌落特征

2.3 5株羊肚菌菌株產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)分析

菌株Y-Q2 雖在補(bǔ)水后產(chǎn)生大量原基，但原基迅速變黃枯萎，未能發(fā)育成子實(shí)體。其他4 個(gè)菌株均正常出菇，結(jié)果見表5。由表5可知，試驗(yàn)條件下，供試羊肚菌菌株單位平均產(chǎn)量和單菇質(zhì)量有顯著差異（P＜0.05）。菌株Y-Q1 的單位平均產(chǎn)量最高，而菌株Y-Q4 的平均單菇重最高。菌株Y-Q5 的單位平均產(chǎn)量和單菇重都是最低的，且與其他菌株有顯著性差異。

表5 供試羊肚菌栽培結(jié)果

圖2 大棚栽培羊肚菌出菇狀態(tài)

3 小結(jié)與討論

5 個(gè)羊肚菌菌株在4 種母種培養(yǎng)基和4 種栽培種培養(yǎng)基中均能生長(zhǎng)。母種培養(yǎng)基配方1中供試的5 個(gè)羊肚菌菌株菌絲長(zhǎng)速、顏色、密度和菌核等性狀最優(yōu)，可作為羊肚菌母種培養(yǎng)基的配方。配方④栽培種培養(yǎng)基適合Y-Q3 菌株生長(zhǎng)。綜合栽培試驗(yàn)結(jié)果，Y-Q1、Y-Q4 菌株綜合性狀最優(yōu)，具有較好的推廣價(jià)值。

Y-Q5 菌株菌絲長(zhǎng)速、形態(tài)，菌核量及子實(shí)體產(chǎn)量等最差，不具有推廣價(jià)值。Y-Q2 菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)良好，補(bǔ)水后產(chǎn)生大量原基，但后期均枯萎而死，可能與該菌株原基不耐高溫有關(guān)。Y-Q1 菌株在供試栽培種培養(yǎng)基中長(zhǎng)速最快，菌核量最多，小區(qū)單產(chǎn)最高；Y-Q4 菌株在供試母種培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)最快，且子實(shí)體單菇重最高。Y-Q1、YQ4 這兩個(gè)菌株均為六妹系列（M.sextelata），說明六妹系列羊肚菌菌株比較適宜衢州環(huán)境條件。

相比配方1 母種培養(yǎng)基，供試羊肚菌菌株在配方3、配方4培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)慢，菌核量少或無，是否與培養(yǎng)基中添加麩皮、麥粒導(dǎo)致氮素過量有關(guān)；配方2菌核形成最早，菌核多呈白色顆粒狀，是否與培養(yǎng)基加入土壤浸出液有關(guān)。這些有待進(jìn)一步研究。