曾先富 李昕竺 熊維全

（成都市農(nóng)林科學(xué)院園藝所，四川成都610030）

金針菇（Flammulina velutipes）又稱冬菇、樸菇、毛柄金錢菌等，其菌蓋滑潤、菌柄細(xì)長脆嫩，形美味鮮，營養(yǎng)價值和保健功效顯著，具益智作用和觀賞價值，開發(fā)利用前景廣闊[1]。近年來，即食金針菇食品、休閑產(chǎn)品等加工產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)，既拓展了金針菇產(chǎn)品市場，也滿足了人們更高層次的營養(yǎng)保健需求。

加工的金針菇除了對外觀品質(zhì)有一定要求外，更重要的是營養(yǎng)、口感。目前金針菇加工企業(yè)原料均為鮮金針菇，品質(zhì)參差不齊，且加工產(chǎn)品普遍存在塞牙、咀嚼不爽的現(xiàn)象，嚴(yán)重制約了金針菇加工產(chǎn)品的銷售及深度開發(fā)[2]。

研究立足于解決企業(yè)對加工金針菇品質(zhì)要求，以咀嚼口感為主要指標(biāo)，兼顧營養(yǎng)和產(chǎn)量指標(biāo)，通過單孢雜交和系統(tǒng)篩選，獲得品質(zhì)優(yōu)良的黃色金針菇加工專用新品種“蓉金567”。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）金針菇菌株：收集性狀優(yōu)良的9個金針菇菌株作為親本篩選材料，其編號分別為①（B3，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院）、②（G1，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院）、③（F3-1，成都市農(nóng)林科學(xué)院）、④（川金7號，四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院）、⑤（金絲，成都市農(nóng)林科學(xué)院）、⑥（FA12-24，成都市農(nóng)林科學(xué)院）、⑦（川金3號，四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院）、⑧（金雜19，福建三明真菌研究所）、⑨（金絲2號，成都市農(nóng)林科學(xué)院）。

（2）培養(yǎng)基：PDA 加富培養(yǎng)基為馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂16 g，蛋白胨2 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g。原種培養(yǎng)基為棉籽殼78%，米糠15%，玉米粉5%，白糖1%，石膏1%。培養(yǎng)料為配方①棉籽殼53%，胡豆殼9%，棉渣24%，玉米粉7%，麩皮2%，稻草1%，磷肥1%，尿素0.1%，硫酸鎂0.1%，石灰2%，石膏0.8%；配方②玉米芯42%，細(xì)木屑30%，麩皮20%，玉米粉5%，白糖1%，石膏1%，石灰1%。

1.2 試驗方法

1.2.1 技術(shù)路線

親本材料篩選——單孢分離與單核菌絲鑒定——單核菌絲配對雜交——雜合子初篩——優(yōu)良菌株復(fù)篩

1.2.2 親本材料篩選

成都市農(nóng)林科學(xué)院從四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院、福建三明真菌研究所等地引進金針菇（菌株）5 個，自主分離保藏菌株4 個，共9 個菌株進行比較試驗。以配方①配制培養(yǎng)料，用22 cm×45 cm 袋裝料，每袋裝料800 g，高壓滅菌，接種；18～20 ℃培養(yǎng) 45 d，移入菇房，開口，搔菌，保濕出菇（兩頭出菇）。連續(xù)試驗3 批次。每個菌株選擇30 袋，采收第一潮菇，考察商品外觀、產(chǎn)量、營養(yǎng)成分和脆度，從中篩選出產(chǎn)量較高、商品外觀較好、營養(yǎng)品質(zhì)高且脆度值高的2 個菌株作為雜交親本材料。

金針菇菌株的脆度由成都大學(xué)采用質(zhì)構(gòu)儀測定，營養(yǎng)成分由四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心檢測。

1.2.3 雜交選育

1.2.3.1 孢子的分離和單核菌絲的鑒定

分別制作親本孢子印，以梯度稀釋法將孢子液稀釋至約103個/mL，兩個親本各取0.1 mL 孢子液均勻涂布于PDA平板培養(yǎng)皿中，倒置于24 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d。待培養(yǎng)基上出現(xiàn)肉眼可見微小菌落時，挑取單個菌落轉(zhuǎn)接于PDA 平板上，在菌落邊緣斜插一滅菌的蓋玻片，24 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d，待菌絲爬上蓋玻片后取出蓋玻片，用乳酸酚棉藍試劑染色，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察有無鎖狀聯(lián)合。試驗共獲得36 個③號（F3-1）菌株的單核體、24 個④號（川金-7）菌株的單核體。

1.2.3.2 單核菌絲配對雜交

將1.2.3.1 的單核體兩兩配對培養(yǎng)。在無菌條件下用滅菌的吸管切取直徑約0.8 cm的菌塊于PDA平板上培養(yǎng)，兩個菌塊間距1 cm，24 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3～5 d。當(dāng)兩個能融合的單菌落中間形成突起的融合線時，在無菌環(huán)境中挑取融合處菌絲到另一PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，將滅菌的蓋玻片斜插入菌落邊緣培養(yǎng)基中，24 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d。待菌絲爬上蓋玻片后取出蓋玻片，用單核菌絲檢驗方法檢驗融合是否成功，將有鎖狀聯(lián)合或雙核的菌絲轉(zhuǎn)接到PDA斜面培養(yǎng)基中擴培。

1.2.3.3 雜合子初篩

以配方②配制培養(yǎng)料，用17 cm×33 cm 的袋裝料（每袋裝料折干250 g），121 ℃滅菌2 h。每個雜交種直接用母種接種5 袋，培養(yǎng)室25 ℃恒溫暗培養(yǎng)。待菌絲長滿袋后，移入出菇房出菇。采收第一潮菇，記錄產(chǎn)量等數(shù)據(jù)。篩選農(nóng)藝性狀優(yōu)良的菌株進入復(fù)篩。

1.2.3.4 優(yōu)良雜交菌株復(fù)篩

培養(yǎng)料同初篩，用22 cm×45 cm 袋裝料，每袋裝料800 g，高壓滅菌，接種，18～20 ℃培養(yǎng)45 d，移入菇房，開口，搔菌，保濕出菇（一頭出菇）。每個菌株選擇30袋，采收第一潮菇，記錄其產(chǎn)量等數(shù)據(jù)，同時送樣至成都大學(xué)檢測脆度。

2 結(jié)果與分析

2.1 親本材料篩選結(jié)果

綜合色澤、基部褐變長度等商品外觀，編號②、④、⑤、⑥、⑨菌株較優(yōu)，而從袋產(chǎn)量考慮，編號③（F3-1）的產(chǎn)量最高，比大面積栽培的⑦號（川金3號）高2%左右。

表1 9個金針菇菌株產(chǎn)量和商品外觀等性狀比較

表2 每100 g鮮品金針菇營養(yǎng)成分及脆度值

由表2 可知，金針菇③、④、⑤、⑦號品質(zhì)較優(yōu)，③號（F3-1）的脆度值極高，口感極佳，非常滿足深加工要求。

2.2 雜交選育結(jié)果

孢子分離和單核菌絲的鑒定，獲得36個③號菌株的單核體、24 個④號菌株的單核體。單核菌絲兩兩配對雜交，獲得具有鎖狀聯(lián)合的雜合子452 個。袋栽出菇試驗初篩，獲得黃色、菌柄較細(xì)且白、菌蓋包裹緊實、基部褐變少的菌株19個。

2.2.1 優(yōu)勢雜交菌株復(fù)篩結(jié)果

由表3 可以看出，雜交親本③、④號菌株在培養(yǎng)料（配方②）上的菌絲生長速度分別為（2.28±0.14）mm/d、（2.16±0.06）mm/d，菌絲長勢較好。雜交子代菌絲生長速度較兩個親本快的有325、371、389、503、567、607號菌株，其中371、503、567號菌株的菌絲生長極為濃密。

圖1 親本子實體形態(tài)

表3 優(yōu)勢雜交菌株及其親本在培養(yǎng)料（配方②）上菌絲生長情況

表4 優(yōu)勢雜交菌株及其親本子實體性狀及產(chǎn)量比較

由表4可以看出，與親本菌株相比，雜交子代基部褐變長度變短，編號187、300、389 菌株基部褐變相對較長。雜交子代第一潮菇袋產(chǎn)量差異較大，介于220～410 g，其中產(chǎn)量高于兩個親本菌株的雜交菌株有54、187、299、300、375、429、504、567 號，產(chǎn)量最高的為567號菌株。

2.2.2 親本及優(yōu)良雜交菌株的營養(yǎng)成分及脆度

表5 優(yōu)勢雜交菌株及其親本子實體主要營養(yǎng)成分及脆度

由表5 可以看出，雜交子代菌株子實體脆度值高于兩個親本子實體脆度值的有299、371、389、429、567、607號菌株，其中567號菌株子實體脆度值明顯高于親本。子實體蛋白質(zhì)含量介于親本③和④菌株之間的有 19、325、336、371、389、429、450、567 號菌株。子實體氨基酸總量介于親本③和④菌株之間，或者是高于兩個親本的有19、54、299、300、325、371、429、503、567、607、714、743號菌株。

綜合表4、表5結(jié)果，子實體脆度值高，營養(yǎng)價值高的雜交子代菌株為567號。該菌株經(jīng)四川省農(nóng)作物品種認(rèn)定委員會定名為“蓉金567”。

圖2 高脆度黃色金針菇“蓉金567”子實體形態(tài)

3 小結(jié)

蓉金567 營養(yǎng)成分與親本接近，但脆度值約是親本③（F3-1）菌株的1 倍，是親本④（川金7 號）菌株2 倍多。相對于親本F3-1，該菌株具有菌蓋不易開傘，菌柄色澤光亮，基部褐變部位短等商品外觀優(yōu)勢，且脆度值高（咀嚼不塞牙），非常適合加工為即食食品。