趙忠平

（甘肅省定西市漳縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心石川鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，甘肅 定西 748300）

新城疫病毒為副粘病毒科腮腺炎病毒屬成員，病毒核酸為單股、負(fù)鏈、不分節(jié)段的RNA，新城疫病毒可以感染各種年齡的雞、鴨、鵝等家禽，新城疫病毒感染后根據(jù)臨床表現(xiàn)可以分為最急性型、急性型和慢性型。2019 年4 月，某養(yǎng)鴨場(chǎng)出現(xiàn)疑似感染新城疫病毒情況，通過(guò)對(duì)病死鴨剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷確定疫情并成功分離鑒定到新城疫病毒，下面介紹如下。

1 發(fā)病情況

發(fā)病鴨精神沉郁，采食量下降，排稀便，水樣，暗紅色或綠色，病鴨呈張口呼吸，有甩頭動(dòng)作，出現(xiàn)咳嗽等呼吸道癥狀，發(fā)病鴨發(fā)病后3d 死亡。曾在飼料中添加青霉素等抗生素進(jìn)行治療，無(wú)效果。

2 病理剖檢

取病死鴨剖檢可見(jiàn)消化道出血，盲腸扁桃體出血，肝臟出血，氣管內(nèi)有粘稠分泌物，取病死鴨的肝臟、胰腺等組織病料送實(shí)驗(yàn)室診斷。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 PCR 檢測(cè)

取病死鴨的送檢組織病料研磨處理，按照1:3 的比例加入滅菌生理鹽水，研磨器研磨成組織勻漿，12000r/min 離心15min，小心吸取上清液。提取上清液病毒基因組RNA，按照參考文獻(xiàn)[2]進(jìn)行鴨源新城疫病毒、鴨瘟病毒和鴨圓環(huán)病毒三重PCR 檢測(cè)，PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物跑核酸電泳，根據(jù)擴(kuò)增片段大小進(jìn)行結(jié)果判定。PCR 核酸電泳顯示擴(kuò)增片段為823 bp 左右，與新城疫病毒的預(yù)期擴(kuò)增片段大小一致，說(shuō)明發(fā)病鴨經(jīng)PCR為鴨源新城疫病毒陽(yáng)性。

3.2 雞胚接種

將上面研磨處理的病毒上清液用0.45μm 濾器過(guò)濾除菌，接種10 日齡SPF 雞胚，觀察雞胚接種后的發(fā)病死亡情況。雞胚在接種后48～72h 全部死亡，胚體出血，剖檢胚體可見(jiàn)肝臟出血嚴(yán)重，頭部及腎臟都有明顯出血，收集死亡雞胚尿囊液，連續(xù)接種兩代10 日齡SPF 雞胚，收集尿囊液作進(jìn)一步鑒定。

3.3 血凝試驗(yàn)

收集的第三代雞胚尿囊液對(duì)1%雞胚紅細(xì)胞的血凝效價(jià)達(dá)9log2，且該血凝特性可以被NDV 陽(yáng)性血清所抑制，初步鑒定分離毒為鴨源新城疫病毒。

3.4 毒價(jià)測(cè)定

將收集的第三代雞胚尿囊液做10 倍系列稀釋，取10-5、10-6、10-7三個(gè)稀釋度接種10 日齡SPF 雞胚，每個(gè)稀釋度接種5 枚10 日齡SPF 雞胚，每天照蛋觀察雞胚的死亡情況，120h 后收集尿囊液做血凝試驗(yàn)，血凝效價(jià)在7log2 及以上判定為感染，計(jì)算分離毒的EID50。結(jié)果顯示，10-5稀釋度感染雞胚5 枚，10-6稀釋度感染雞胚3 枚，10-7稀釋度感染雞胚3枚，根據(jù)Reed-Muench 方法計(jì)算分離毒的雞胚半數(shù)感染量為10-5.78/0.1mL。

4 防控措施

發(fā)生疫情后，對(duì)發(fā)病鴨及時(shí)隔離飼養(yǎng)，未發(fā)病鴨群及時(shí)接種新城疫疫苗，鴨舍嚴(yán)格消毒，內(nèi)外環(huán)境都要消毒處理，經(jīng)過(guò)積極防控，發(fā)病鴨一部分死亡，一部分康復(fù)，沒(méi)有出現(xiàn)新發(fā)病例，疫情得到有效控制。

5 討 論

鴨源新城疫是一種高度接觸性病毒性傳染病，雖然新城疫病毒主要感染雞，鴨也可感染。根據(jù)發(fā)病家禽的臨床表現(xiàn)可以做出初步診斷，確診需要借助實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，當(dāng)前新城疫的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要包括病毒分離鑒定、分子生物學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)方法，病毒分離鑒定是病毒判定最可靠的方法，分子生物學(xué)主要包括PCR 方法和熒光定量PCR 檢測(cè)方法，血清學(xué)檢測(cè)方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和膠體金試紙條檢測(cè)方法，臨床可采用分子生物學(xué)方法進(jìn)行早期診斷，通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行雞群的血清流行病學(xué)調(diào)查。