李 楠，毛 晴，周雪雪，翟雅潔

(陜西科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，西安 710021)

利用多種天然美白活性物質(zhì)進(jìn)行復(fù)配以產(chǎn)生協(xié)同增效作用，多角度、多靶點(diǎn)調(diào)節(jié)和抑制黑色素的生成是中藥美白化妝品的優(yōu)勢(shì)。

1 試驗(yàn)

1.1 試驗(yàn)儀器與試藥

儀器：UV9100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司生產(chǎn))，HWS-12電熱恒溫水浴鍋(上海恒科科學(xué)儀器公司生產(chǎn))，TDZ4-WS臺(tái)式低速離心機(jī)(湖南湘儀試驗(yàn)儀器開(kāi)發(fā)有限公司生產(chǎn))，DF-1集熱式磁力恒溫?cái)嚢杵?江蘇金壇市江南儀器廠生產(chǎn))，UB102I生物顯微鏡(重慶澳普光電技術(shù)有限公司生產(chǎn))。

試藥：無(wú)水乙醇、十六醇、氨水、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、硬脂酸、液體石蠟、無(wú)水羊毛脂、單硬脂酸甘油酯、二甲基硅油、三乙醇胺、卡波姆、尼泊金乙酯、丙二醇、丙三醇、吐溫-80、氮酮、香精(均為天津市天力化學(xué)試劑有限公司提供)；DPPH自由基、L-酪氨酸(均為上海源葉生物科技有限公司提供)；當(dāng)歸、甘草、蘆薈、白芨(均購(gòu)于西安市中藥材市場(chǎng))。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 中藥制備

甘草提?。悍Q取適量甘草粉末，采用氨性70%乙醇回流提取，料液比1∶10，提取1.5 h，抽濾得濾液，濃縮，真空干燥至恒重，即得甘草提取物[1]。

當(dāng)歸提?。悍Q取適量當(dāng)歸粉末，采用70%乙醇回流提取，料液比1∶10，提取1.5 h，抽濾得濾液，濃縮，真空干燥至恒重，即得當(dāng)歸提取物[2]。

白芨提?。悍Q取適量白芨干燥粉末，采用50%乙醇回流提取，料液比1∶10，提取1.5 h，抽濾得濾液，濃縮，真空干燥至恒重，即得白芨提取物[3]。

蘆薈提取：選取3年葉齡庫(kù)拉索蘆薈，去外皮后，研磨0.5 h，加入適量乙醚浸泡3 h，脫色后，再加50%乙醇超聲，0.5 h后，抽濾，濾液減壓，濃縮成具有一定黏度的蘆薈提取物[4]。

1.2.2 中藥復(fù)配

將中藥甘草、當(dāng)歸、白芨、蘆薈分別提取并制備提取物，按表1對(duì)4種中藥提取物進(jìn)行復(fù)配。稱取 4種提取物各 0.5 g，加入 50 mL 蒸餾水浸泡 2 h，超聲提取30 min后過(guò)濾，濾液定容 100 mL，再稀釋至原藥含量為 1.0 mg/mL。按照 1.2.3 步驟測(cè)定復(fù)配樣品 CH-1 至CH-16對(duì)酪氨酸酶的抑制率，按照 1.2.4步驟測(cè)定對(duì) DPPH·自由基的抑制率，尋找最佳復(fù)配比[5]。

表1 正交試驗(yàn)安排Tab.1 Orthogonal test arrangement

1.2.3 酪氨酸酶抑制率的測(cè)定

測(cè)定前，將樣品溶液按照正交水平表的用量進(jìn)行混合，與其他試液pH 6.8磷酸鹽緩沖液、L-酪氨酸溶液、土豆酪氨酸酶溶液按不同量配成反應(yīng)液①、②、③、④。先將反應(yīng)液置37℃水浴中保溫30 min 后立即于 475 nm 處測(cè)吸光度。吸光度值分別記為 A1、A2、A3、A4[5]，根據(jù)公式(1) 計(jì)算酪氨酸酶抑制率。

I=[(A1-A2)-(A3-A4)]/( A1-A2) ×100%

(1)

1.2.4 DPPH自由基抑制率的測(cè)定

取3 mL正交水平用量的混合樣液和 3 mL濃度為 0.2 mmol/L 的 DPPH·乙醇溶液(用無(wú)水乙醇配置0.2 mmol/L)加入同一具塞試管中，搖勻，室溫下置于暗處 30 min，測(cè)定其在波長(zhǎng) 517 nm 處的吸光度 Ai1。同法測(cè)定蒸餾水與 DPPH·乙醇溶液各 3 mL混合后的吸光度 A01以及樣品溶液與無(wú)水乙醇各 3 mL混合后的吸光度 Aj1，依據(jù)公式(2)計(jì)算抑制率 P1[5]。

P1=[1-(Ai1-Aj1)/A01]×100%

(2)

1.2.5 美白霜的制備

按表2處方量取單硬脂酸甘油酯、二甲基硅油、無(wú)水羊毛脂、液體石蠟、硬脂酸、十六醇、尼泊金乙酯加熱至80℃， 保溫過(guò)濾得油相。另取甘油、丙二醇、吐溫-80、三乙醇胺、水加熱至 80℃， 保溫過(guò)濾得水相。攪拌槳轉(zhuǎn)速設(shè)定為180 rpm，將油相緩慢加入到水相，高速攪拌5 min ( 2 min 時(shí)加入中藥提取物) ，攪拌待到溫度降至 45℃ 加入氮酮、香精，攪拌均勻即得美白霜。在此制備工藝中對(duì)乳化劑(A)、增稠劑卡波姆(B)的用量和乳化溫度(C)采用正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化，其中乳化劑硬脂酸和十六醇的質(zhì)量比為1∶1。乳化劑(A)的三個(gè)水平為4%、5%和6%，增稠劑(B)三個(gè)水平為0.15%、0.2%和0.25%，乳化溫度(C)的三個(gè)條件為65℃、75℃和85℃。

根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)配伍得到9組美白霜，將制得美白霜的外觀性狀、耐熱性、耐寒性、離心試驗(yàn)、保濕性、顯微乳化效果、pH等作為質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行打分，最后將分值進(jìn)行匯總，選擇分值較高者即總體指標(biāo)良好的作為優(yōu)化后的美白霜基質(zhì)。

表2 美白霜基質(zhì)配方表Tab.2 Whitening cream substrate formulation sheet

1.2.6 中藥加入方式及加入量考察

不同加藥方式及試驗(yàn)具體步驟：中藥浸膏屬于水溶性物質(zhì)，其加入方式主要有兩種。將油水兩相混合均質(zhì)后，再將中藥浸膏加入基質(zhì)中混勻。藥物溶于水相中，再依法制備水包油型( O/W) 膏體。按照1.2.5中的步驟制得美白霜后，以外觀性狀、離心、耐寒、耐熱等方面為指標(biāo)進(jìn)行考察后得到結(jié)果。

在確定了中藥提取物的加入方式后，提取物的加入量也是影響美白霜美白效果最重要的一點(diǎn)，若加入量過(guò)少，則會(huì)導(dǎo)致美白效果發(fā)揮不徹底，達(dá)不到預(yù)期的效果；若加入量過(guò)多，則會(huì)導(dǎo)致整個(gè)霜?jiǎng)┎环€(wěn)定，所以需要對(duì)中藥提取物的加入方式做考察。經(jīng)查閱文獻(xiàn)已確定中藥提取物用量范圍為 1%～4%較為合適，所以試驗(yàn)設(shè)計(jì)為：按照篩選好的基質(zhì)制備美白霜，在均質(zhì)時(shí)分別加入1%、2%、3%、4%的中藥提取物制得美白霜，以外觀形狀、離心、耐寒、耐熱、酪氨酸酶的抑制率以及DPPH自由基的清除率為指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 復(fù)配中草藥對(duì)酪氨酸酶及自由基抑制率結(jié)果分析

參考中醫(yī)活血化瘀、補(bǔ)氣行血理論，選擇甘草、當(dāng)歸、白芨、蘆薈4味中草藥進(jìn)行復(fù)配。甘草具有“美白皇后”之稱，甘草中的二氫黃酮類甘草素和甘草苷都能有效降低酪氨酸酶的活性。當(dāng)歸具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、清除氧自由基、增強(qiáng)免疫功能等作用。白芨美白祛斑、收斂止血、消腫生肌，自古就是美容良藥。蘆薈中富含多糖和多種維生素，對(duì)人體皮膚有良好的營(yíng)養(yǎng)、滋潤(rùn)、增白作用。結(jié)果表明，當(dāng)甘草、當(dāng)歸、白芨的用量比為3∶1∶2時(shí)，CH-14樣品溶液對(duì)酪氨酸酶的抑制率為51.06%，對(duì)DPPH自由基的清除率68.96%，在所有結(jié)果中均最好，確定按照這一比例將其添加到美白潤(rùn)膚霜的配方中。

2.2 美白霜配方

將9組試驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)后，得到結(jié)果為：美白霜中乳化劑硬脂酸、十六醇的用量均占處方量的5%、增稠劑卡波姆的用量占處方量的0.15%時(shí)，乳化溫度為85℃，其外觀形狀為乳白色，經(jīng)過(guò)離心后不分層，耐熱耐寒性好，且顯微鏡下顯示液滴均勻，粒徑小，所以選用該配方制備美白霜。

2.3 中藥提取物加入方式及加入量的考察

2.3.1 中藥提取物加入方式考察

通過(guò)上述試驗(yàn)結(jié)果分析得出，中藥提取物的最佳加藥方式為：將油水兩相混為均質(zhì)后再將中藥提取物添加進(jìn)去制備得中藥美白霜，外觀形狀、離心、耐寒熱、保濕性等方面性能均是最佳。

2.3.2 中藥提取物加入量考察

試驗(yàn)結(jié)果表明：中藥提取物的加入量為處方量的4%時(shí)，制得的中藥美白霜不論是從外觀性狀還是離心、耐寒熱等理化指標(biāo)和美白功效均是最佳。

3 結(jié)論

中藥美白霜甘草∶當(dāng)歸∶白芨的配比為3∶1∶2，加藥量占處方量的4%，加藥方式為油水兩相混，均質(zhì)后，加入中藥提取物。美白霜基質(zhì)中乳化劑硬脂酸和十六醇各占處方量的5%，卡波姆占0.15%。乳化溫度在85℃時(shí)制成的中藥美白霜，不管是外觀形狀、理化性質(zhì)還是美白效果，均是最佳的，且制備工藝簡(jiǎn)單、方便。