孫俊峰

(江蘇省泰興市畜牧獸醫(yī)中心，江蘇 泰興 225400)

奶牛乳房炎在中國的發(fā)病率可以達到60%～70%，為此造成的經濟損失異常巨大[1-2]。此病的發(fā)生嚴重影響著我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，其發(fā)病原因廣且普遍發(fā)生，主要來源于某些操作不當而引發(fā)的損傷、多種致病菌的混合感染及一系列繼發(fā)的因素[3]。奶牛乳房炎易發(fā)，且因素復雜、藥療成本高，是一種難防治不易診斷的疾病，由此會引發(fā)牛奶類品質下降、奶牛的產奶功能降低等。其初期癥狀為：奶牛乳房區(qū)域會出現輕度的腫脹、發(fā)熱、痛感，并且時常有伴隨牛乳中絮狀或凝塊狀物質，偶爾還會呈現為水樣；嚴重時除了會出現初期癥狀外還會因炎癥反應而出現不同程度的滲出，最終導致產奶減少甚至停止產奶[4]。為了減少奶牛乳房炎所造成的損失，必須對其致病菌進行分離鑒定并對因對癥下藥。

1 材料

1.1 病料來源

奶牛乳房炎奶樣品4份采自于江蘇省某奶牛場。

1.2 樣品采集

選擇有明顯炎癥反應癥狀、擠出的奶樣品有顏色或性狀改變的發(fā)病乳房進行采樣，用溫水將患病區(qū)域清理干凈，然后用消毒棉球給患病區(qū)域進行消毒，擠掉一些乳汁后再將10 mL乳汁擠入事先準備好的無菌試管中，做好標記后冷藏備用。

1.3 試驗材料及儀器

吊菌環(huán)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、無菌處理過的試管、心腦浸液培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、高壓滅菌鍋、生化試驗試劑盒等。

1.4 細菌的分離與培養(yǎng)

對采集的無菌奶樣品進行充分的搖晃直至質地均勻，然后在準備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、心腦浸液培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基及麥康凱培養(yǎng)基上分別進行劃線，將接種好的培養(yǎng)基做好標記并放置在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后觀察菌落情況。

1.4.1 涂片染色鏡檢 染色的時候需要在載玻片上方滴25 μL左右的生理鹽水，選取單菌落與生理鹽水進行混合均勻后形成適當大小的均勻涂面，在酒精燈上面進行烘干固定處理。然后進行革蘭氏染色，于顯微鏡下觀察其形狀特征，并結合培養(yǎng)基培養(yǎng)出的菌落特點給出初步的判定。

1.4.2 分離培養(yǎng)與鑒定 選擇疑似金黃色葡萄球菌的菌落進行涂片，通過革蘭氏染色法染色后進行鏡檢，觀察其染色后的特性、形態(tài)及排列。革蘭氏染色鏡檢中，如果是顯微鏡下觀察到兩端鈍圓的淡紅色短桿菌[5]，可以初步判定為檢測到的細菌為大腸桿菌；如果在顯微鏡觀察到了橢圓形、陽性的球菌，單個或者一對一對的出現在視野中，觀察不到芽孢，可初步判定為腸球菌，如觀察到的細菌呈現葡萄狀，成串出現的陽性菌，初步判定結果為金黃色葡萄球菌。

1.5 生化試驗

將分離到的菌種，在無菌條件下操作，接種到表2中的生化管中，于37 ℃條件，在恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24 h左右[6-7]，觀察反應結果。

2 結果與分析

2.1 細菌的分離培養(yǎng)結果

由表1結果顯示，通過單個菌落在不同種類培養(yǎng)基中的形態(tài)顏色等生長特性來初步鑒別金黃色葡萄球菌等致病菌的存在，是可行的，不同菌株在不同種類培養(yǎng)基中會展現出獨特的光澤度、色彩形狀及有無芽孢等特點，給初步鑒定工作提供了大致方向和基本依據。

表1 細菌分離培養(yǎng)結果

2.2 細菌的生化試驗結果

由表2的培養(yǎng)結果可以看到，1號菌符合腸球菌的生化特性，2、3號菌符合金黃色葡萄球菌的生化特性，4號菌符合大腸桿菌的生化特性。

表2 試驗結果

3 討 論

金黃色葡萄球菌廣泛的存在于動物生長環(huán)境、飼料中[8]，所以在飼養(yǎng)過程中要十分注意飼養(yǎng)區(qū)域以及采奶區(qū)域的消毒衛(wèi)生工作。當飼養(yǎng)場或者養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的奶牛出現了乳腺炎感染的時候比較適合用恩諾沙星、鏈霉素等抗生素治療。但目前由于各種原因病菌的耐藥性較強，需要對病牛進行有針對性的治療才可以達到更好的治療效果。

由于抗生素使用的不合理現象較多，耐藥的問題也越來越嚴重，對全球的奶牛養(yǎng)殖業(yè)以及畜牧業(yè)都帶來了許多不良的影響。由于目前對抗生素的使用還不夠規(guī)范，很多的細菌產生了耐藥性，隨著細菌的變異、耐藥菌株的增多，也對于目前奶牛乳腺炎臨床治療添加了很大的難度。金黃色葡萄球菌是奶牛乳房炎十分常見的一種致病菌，其對抗生素的耐藥性同樣十分明顯，對于治療工作的難度也有不小的增加，如有報道金黃色葡萄球菌對萬古霉素等產生了耐藥性，面對目前的問題，獸藥研發(fā)企業(yè)還需要進行新藥物的研發(fā)，以面對耐藥性等嚴峻的問題。同時在飼養(yǎng)管理中希望養(yǎng)殖企業(yè)或養(yǎng)殖戶可以更好地推行無抗飼養(yǎng)，提高飼養(yǎng)管理水平，注意奶牛日糧營養(yǎng)均衡，保證消毒殺菌全面，適當使用一些中藥制劑，做好動物飼養(yǎng)的保健工作，有效提高奶牛的免疫力，杜絕出現濫用藥現象。