張永翠 王恩玲* 嚴俊麗 伏桂華 王宇文 譚清元 梁啟軍 楊 磊 解紅梅**

(1.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院，濰坊 261061；2.諸城市龍都畜牧獸醫(yī)站，諸城 262200；3.臨沂市郯城縣廟山鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，臨沂 276000)

銅元素作為動物生長必需的微量元素之一，能夠增強動物體的造血功能、促進有機物的代謝和生長繁殖、維護動物的毛發(fā)正常生長和色澤、增強機體抵抗力[1]，在毛皮動物飼糧中添加一定量的銅可以提高其生長性能和毛皮品質(zhì)[2-3]。飼糧中添加適宜水平的銅有利于提高動物的生長性能和營養(yǎng)物質(zhì)消化率，并且不同銅源的促生長效果存在差異[4-5]。目前，在動物生產(chǎn)中銅的添加形式主要有無機銅、有機銅2種。無機銅是飼糧中銅元素的主要添加形式，但是由于無機銅的吸收利用率低，導致高劑量添加銅成為畜禽養(yǎng)殖中的普遍現(xiàn)象[6]。高劑量的銅不但危害動物自身健康，而且最終會沉積到畜禽產(chǎn)品中，過量的銅還會隨排泄物進入土壤和水源，對生態(tài)環(huán)境造成極大破壞[7-8]。有機銅以蛋氨酸銅應用較為廣泛，其具有利用率高、穩(wěn)定性好的特點，轉(zhuǎn)運吸收不需要額外的配位反應，節(jié)省了小腸的載體蛋白，減少了與鋅、鐵等離子的競爭拮抗反應，減少能量的損耗[9-10]。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的第2625號公告《飼料添加劑安全使用規(guī)范》已經(jīng)對動物飼糧中銅的添加量作出進一步限制，其中規(guī)定肉兔配合飼料或全混合日糧中，銅的最高限量為25 mg/kg(包含飼料原料本底值)。蛋氨酸銅在畜禽飼糧中的應用研究已經(jīng)比較廣泛，但其在長毛兔飼糧中的應用研究較少且研究結論不盡相同。因此，本試驗在長毛兔飼糧中添加不同水平的蛋氨酸銅，研究其對2～4月齡長毛兔生產(chǎn)性能、血清生化指標、血清含銅酶活性及內(nèi)臟發(fā)育情況的影響，探討2～4月齡長毛兔對蛋氨酸銅形式銅的需要量，旨在為我國長毛兔飼養(yǎng)中蛋氨酸銅的應用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組

選用180只剛剪完胎毛的2月齡蒙陰長毛兔，隨機分為6組，每組10個重復，每個重復3只試驗兔。試驗兔要求體重差異不顯著(P>0.05)、公母各1/2、健康狀況良好，并采取驅(qū)蟲保健、疫苗接種等必要的抗病防疫措施。試驗兔舍自然通風、采光，于每天06:00、18:00飼喂，自由采食，自由飲水。預試期7 d，正試期53 d。

1.2 試驗飼糧及試驗設計

基礎飼糧參照中華人民共和國標準(審定稿1994)安哥拉毛兔飼養(yǎng)標準配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。以蛋氨酸銅(蛋氨酸銅中銅含量為17.1%，蛋氨酸含量為78.5%)為銅源，在基礎飼糧中分別添加0、10、20、40、80及160 mg/kg銅，配制6種試驗飼糧，試驗飼糧中銅含量的實測值分別為2.65、12.53、21.38、41.82、83.11及159.37 mg/kg。用環(huán)模制粒機將飼糧壓成直徑4 mm的顆粒飼料，通風避光處保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1.3 樣品的采集與制備

正試期結束后，試驗兔空腹稱重記為宰前活重。每組隨機抽取6只試驗兔，心臟采血10 mL，離心機以3 000 r/min離心10 min，分離所得血清分裝于離心管中，置于-20 ℃冷凍保存，用于血清生化指標、血清含銅酶活性以及鈣、磷含量的測定。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標

記錄試驗正式開始時試驗兔體重和試驗結束時試驗兔的體重，統(tǒng)計試驗期間(不包括預試期)的喂料量，計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

試驗結束后，對長毛兔剪毛，稱取實際剪毛的重量，并記錄為產(chǎn)毛量。兔毛直徑采用光學纖維直徑分析儀和纖維投影儀進行測定。

將試驗兔用頸椎錯位法致死、屠宰，剝離內(nèi)臟器官并稱重。剝離皮張，用于測定皮張面積，量取肩部、腰部、臀部長度，取平均值為皮張寬度，量取頸部中間至尾根長度，為皮張長度，計算皮張面積。

1.4.2 血清生化指標

血清總蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，ALB)、球蛋白(globulin，GLB)、尿素氮(urea nitrogen，UN)含量采用日本和光純藥工業(yè)株式會社提供的試劑盒，在日立7180型全自動生化儀上進行測定，白球比(albumin/globulin ratio，A/G)為ALB與GLB含量的比值。

1.4.3 血清含銅酶活性

血清銅鋅超氧化物歧化酶(copper/zinc-superoxide dismutase，Cu-Zn SOD)和銅藍蛋白(ceruloplasmin，CP)活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，在UV762型紫外分光光度計上測定吸光度值后，按照試劑盒說明計算得出。

1.4.4 血清鈣、磷含量

血清鈣、磷含量采用日立7180型全自動生化分析儀進行測定。

1.4.5 內(nèi)臟器官發(fā)育

試驗結束后，空腹稱量試驗兔體重，為宰前活重；剝離肝臟、心臟、腎臟、脾臟并稱重，并根據(jù)以下公式計算內(nèi)臟器官指數(shù)：

肝臟指數(shù)=肝臟重量(g)/宰前活重(kg)；心臟指數(shù)=心臟重量(g)/宰前活重(kg)；腎臟指數(shù)=腎臟重量(g)/宰前活重(kg)；脾臟指數(shù)=脾臟重量(g)/宰前活重(kg)。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 13.0軟件的單因素方差分析程序?qū)υ囼灁?shù)據(jù)進行方差分析，并采用Duncan氏法進行多重比較檢驗，試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準誤表示，P<0.05表示組間差異顯著。

2 結果與分析

2.1 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，各組試驗兔的初始體重無顯著差異(P>0.05)。銅添加量對試驗兔的ADFI無顯著影響(P>0.05)。銅添加量為40 mg/kg時ADG最高，F(xiàn)/G最低，但與銅添加量為20、80 mg/kg時無顯著差異(P>0.05)。銅添加量對試驗兔的產(chǎn)毛量、毛直徑、皮張面積均無顯著影響(P>0.05)。隨銅添加量的增加，產(chǎn)毛量、皮張面積呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。

表2 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔生產(chǎn)性能的影響

2.2 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清生化指標的影響

由表3可知，銅添加量對對2～4月齡長毛兔血清TP、ALB、GLB、UN含量及A/G均無顯著影響(P>0.05)。隨著銅添加量的增加，血清GLB呈含量先升高后降低的趨勢。

表3 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清生化指標的影響

2.3 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清含銅酶活性的影響

由表4可知，銅添加量對血清Cu-Zn SOD活性的影響顯著(P<0.05)，銅添加量為20 mg/kg時血清Cu-Zn SOD活性最高，為69.33 U/mL，顯著高于銅添加量為0和10 mg/kg時(P<0.05)，與銅添加量為40、80和160 mg/kg時差異不顯著(P>0.05)。銅添加量對血清CP活性的影響顯著(P<0.05)。銅添加量為20 mg/kg時血清CP活性最高，為227.30 U/L，顯著高于銅添加量為0、40和80 mg/kg時，與銅添加量為10、160 mg/kg時差異不顯著(P>0.05)。

表4 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清含銅酶活性的影響

2.4 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量的影響

由表5可知，銅添加量對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量無顯著影響(P>0.05)。

表5 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量的影響

2.5 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔內(nèi)臟器官發(fā)育的影響

由表6可知，銅添加量對2～4月齡長毛兔肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、心臟指數(shù)、脾臟指數(shù)均無顯著影響(P>0.05)。

表6 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔內(nèi)臟器官發(fā)育的影響

3 討 論

3.1 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔生產(chǎn)性能的影響

一般來講，有機微量元素的吸收利用率要高于無機微量元素。Mcdowell[11]研究指出，動物對飼糧中不同銅源的吸收率有差異。晏家友等[12]研究表明，飼糧中添加甘氨酸銅可提高肉兔的ADG，較對照組提高15.63%。對于毛皮動物，在水貂[13]、藍狐[14]、銀狐[15-16]的研究中發(fā)現(xiàn)，與硫酸銅相比，氨基酸銅的相對利用率分別為113.41%、127.91%、116.46%，氨基酸銅能更好地被動物吸收利用。本試驗表明，以蛋氨酸銅為銅源，長毛兔飼糧中添加量為20 mg/kg時，ADG比對照組提高54.78%，比10 mg/kg組提高19.37%，與上述研究基本一致。

白玉妍等[17]研究表明，蛋氨酸酮對烏蘇里貉對針毛、絨毛長度和細度無顯著影響，但0號皮和Ⅰ級皮的數(shù)量要比對照組分別高出9.24%和4.06%，說明在烏蘇里貉飼糧中添加蛋氨酸銅可提高毛皮質(zhì)量。本試驗中，蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔的產(chǎn)毛量、毛直徑、皮張面積均無顯著影響，與上述研究結果一致。其原因可能是因為銅元素作為酪氨酸酶的合成酶，影響黑色素的形成[18]，銅元素主要在加深毛色方面起著重要作用，而在毛直徑、產(chǎn)毛量方面的影響較小。隨著銅添加量的增加，產(chǎn)毛量先提高后降低，其原因是銅添加量增加后長毛兔的體重及皮張面積增大，所以產(chǎn)毛量有所提高；但隨銅添加量繼續(xù)提高，長毛兔體重降低，皮張面積減少，產(chǎn)毛量降低。

3.2 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清生化指標的影響

血液中的TP由ALB和GLB組成。本試驗中試驗兔血清TP、ALB、GLB含量都與正常值接近，提示飼糧中營養(yǎng)成分充足，長毛兔的免疫力較強，銅添加量對免疫性能的影響不大。血液中的尿素是蛋白質(zhì)分解的最終產(chǎn)物[19]，通過鳥氨酸循環(huán)合成，是反映蛋白質(zhì)代謝的重要指標，在飼糧蛋白質(zhì)含量穩(wěn)定的情況下，血清中UN含量也比較穩(wěn)定。本試驗結果表明，銅添加量對血清UN含量無顯著影響，說明在長毛兔的蛋白質(zhì)代謝過程中銅對蛋白質(zhì)的利用率并無促進作用。

3.3 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清含銅酶活性的影響

含銅蛋白和含銅酶廣泛存在于自然界中。含銅蛋白和含銅酶涉及生物體內(nèi)的電子傳遞、氧化還原、氧分子的運送及活化等過程。Cu-Zn SOD可以有效地除去超氧負離子，是一種很好的抗氧化劑，從而起到防止老化、抑制腫瘤發(fā)生等作用。在貂、狐等動物的研究中發(fā)現(xiàn)，血清中Cu-Zn SOD和CP的活性與飼糧中銅含量相關，隨著飼糧中銅含量的升高，血清中Cu-Zn SOD和CP的活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢[20-23]。本試驗研究表明，銅添加量顯著影響血清Cu-Zn SOD和CP活性，且血清Cu-Zn SOD和CP活性均以銅添加量為20 mg/kg時最高，隨后呈現(xiàn)降低趨勢，與上述毛皮動物中的研究結果一致。

3.4 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量的影響

動物生長需要多種維生素和礦物元素，這些礦物元素之間可能存在拮抗的現(xiàn)象。郝貴增[24]研究表明，飼糧中添加125和250 mg/kg蛋氨酸銅，可使血清鋅含量顯著下降，而對血清鐵含量則無顯著影響。銅添加量對血清鈣、磷含量影響的報道較少。本試驗中，銅添加量對血清鈣、磷含量無顯著影響，說明在飼糧中添加蛋氨酸銅時，可不考慮鈣、磷添加量的問題。

3.5 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔內(nèi)臟器官發(fā)育的影響

動物的內(nèi)臟器官重量和指數(shù)在一定程度上反映了動物機體的機能狀況，對于理論研究和生產(chǎn)實踐有重要的意義[25-26]。本試驗中，各組試驗兔的肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、心臟指數(shù)、脾臟指數(shù)均無顯著影響，該結果表明，在以蛋氨酸銅為銅源時，20～160 mg/kg的銅添加量并不會對2～4月齡長毛兔內(nèi)臟器官造成不良影響。

4 結 論

本試驗條件下，以蛋氨酸銅為銅源，飼糧中添加20～40 mg/kg銅時長毛兔有較高的ADG和血清含銅酶活性；綜合本試驗結果并考慮環(huán)保要求，推薦2～4月齡長毛兔飼糧中銅添加量為20 mg/kg。