張洪坤 黃玉瑤 郭長達 楊美華 路麗 高貫彪 吳韶輝

摘要?[目的]探索知母初加工及炮制過程中黃酮類成分的變化規(guī)律。[方法]采用一測多評的方法，以芒果苷、新芒果苷、異芒果苷為指標，對產(chǎn)地炮制一體化加工所得的知母片、知母個、傳統(tǒng)工藝知母個潤切片以及鹽知母等炮制品進行研究，探究知母初加工和炮制過程中黃酮類成分變化。[結果]產(chǎn)地炮制一體化所得知母片與新鮮知母相比，新芒果苷具有顯著性差異（P<0.01），平均增幅91.2%;傳統(tǒng)工藝所得知母個與新鮮知母相比，芒果苷、新芒果苷具有顯著性差異（P<0.01），芒果苷平均增幅225.4%，新芒果苷降幅82.7%，而相對應的新芒果苷的含量明顯下降;知母個再潤切之后，變化趨勢與傳統(tǒng)工藝加工知母個一致，但是幅度小;經(jīng)炮制成鹽知母可知，產(chǎn)炮片經(jīng)鹽水潤制后，芒果苷含量明顯上升，新芒果苷含量明顯下降，炮制后，由產(chǎn)炮片炮制所得的鹽知母與傳統(tǒng)片炮制所得的鹽知母的成分含量處于同一水平，所得炮制品最終質量趨于一致。[結論]知母的初加工及其炮制過程中一直伴隨著芒果苷和新芒果苷的成分轉化。產(chǎn)地炮制一體化知母片與傳統(tǒng)工藝所得的知母片黃酮類成分存在明顯的差異，但這2種知母片炮制所得的鹽知母最終質量趨于一致，而轉化的程度取決于藥材本身的物質基礎。

關鍵詞?知母;炮制;初加工;黃酮類;質量變化

中圖分類號?R283?文獻標識碼?A?文章編號?0517-6611（2021）03-0189-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.03.050

Abstract?[Objective]To?explore?the?variation?of?flavonoids?during?the?primary?processing?and?processing?of?Anemarrhena?asphodeloides.[Method]One?test?and?multiple?evaluation?method?was?used，?with?mangiferin，?neomangiferin，?and?isomangiferin?as?indicators，?research?on?processed?products?such?as?salt?Anemarrhena?asphodeloides，?to?explore?the?change?of?ingredients?in?Anemarrhena?asphodeloides.?[Result]Compared?with?fresh?Anemarrhena?asphodeloides?produced?by?the?integrated?processing?of?Anemarrhena?asphodeloides?tablets?from?the?origin，?neomangiferin?had?significant?differences?（P<0.01），?with?an?average?increase?of?91.2%.?Traditional?mothers?obtained?from?traditional?Anemarrhena?asphodeloides?were?compared?with?fresh?mothers，?there?was?a?significant?difference?between?mangiferin?and?neomangiferin?（P<0.01），?the?average?increase?of?mangiferin?was?225.4%，?and?the?decrease?of?neomangiferin?was?82.7%，?neomangiferin?content?decreased?significantly.?After?recutting，?the?change?trend?was?the?same，?but?the?range?was?small.?It?could?be?seen?from?the?processing?of?salted?motherinlaw?that?the?content?of?mangiferin?increased?significantly?and?the?content?of?new?mangiferin?decreased?significantly?after?the?production?of?the?tablet?was?humidified?with?salt?water.?The?content?of?the?ingredients?of?Anemarrhena?asphodeloides?was?at?the?same?level，?and?the?final?quality?of?the?processed?products?tends?to?be?the?same.?[Conclusion]The?initial?processing?of?Anemarrhena?asphodeloides?and?its?processing?have?been?accompanied?by?the?conversion?of?mangiferin?and?neomangiferin.?There?are?obvious?differences?in?the?flavonoid?composition?between?the?integrated?Anemarrhena?asphodeloides?tablets?produced?in?the?origin?and?the?Anemarrhena?asphodeloides?tablets?obtained?by?traditional?techniques，?but?the?final?quality?of?the?salt?Anemarrhena?asphodeloides?prepared?by?the?two?Anemarrhena?asphodeloides?tablets?tends?to?be?consistent，?and?the?degree?of?conversion?depends?on?the?medicinal?materials.

Key?words?Anemarrhena?asphodeloides;Processing;Primary?processing;Flavonoids;Quality?change

知母為百合科植物知母（Anemarrhena?asphodeloides?Bge.）的干燥根莖，始載于《本經(jīng)》，列為中品，《別錄》載：“知母生河內川谷，二月八月采根暴干”，黃酮類為其主要藥效成分，具有清熱瀉火、滋陰潤燥的功效，是常用大宗品種[1]。知母初加工有2種方式，一種是亳州地區(qū)習慣的產(chǎn)地炮制一體化加工，即趁鮮切片，另一種是河北地區(qū)的傳統(tǒng)個子貨干燥，而對應的知母片就有2種來源（趁鮮切片和個子貨潤切片）。根據(jù)市場調研情況，目前市場上知母產(chǎn)地趁鮮切片占60%～70%，企業(yè)多從市場上采購這種趁鮮切片，而這種加工方式的知母片出現(xiàn)不合格片的比重較高，而經(jīng)知母片炮制所得的鹽知母片基本不會出現(xiàn)不合格現(xiàn)象。有文獻報道，藥監(jiān)抽檢的市面上40批知母片和21批鹽知母中，知母片不合格5批，鹽知母不合格1批，總不合格率為9.8%，其中知母片不合格項均為芒果苷[2]。不同加工炮制的知母的質量情況是否存在一定的聯(lián)系值得探究。目前已有文獻研究發(fā)現(xiàn)芒果苷等成分存在轉化[3-5]，但是未明確知母整個加工炮制環(huán)節(jié)的質量變化關系。為了探尋知母在加工炮制中，鮮知母、知母片、鹽知母之間的質量變化，研究其存在的“炮制轉化”[6]，該研究于產(chǎn)地收集鮮知母（經(jīng)新鮮采挖，除去泥沙、毛須等），進行產(chǎn)炮片（產(chǎn)地炮制一體化加工所得的知母片，簡稱產(chǎn)炮片，為鮮知母趁鮮切片后干燥所得）、知母個（鮮知母直接整個干燥而成）、傳統(tǒng)片（傳統(tǒng)工藝知母個潤切片，簡稱傳統(tǒng)片，為取知母個，經(jīng)軟化后切制、干燥所得）、鹽知母（取知母片，經(jīng)鹽炙法炮制所得）等的加工和炮制，選擇質量差異較大的黃酮類成分為指標，通過一測多評的方法，測定芒果苷、新芒果苷、異芒果苷等成分的含量，研究黃酮類成分的質量變化規(guī)律。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

1.1.1?儀器和設備。

DIONEX?Ultimate?3000高效液相色譜系統(tǒng);色譜柱Waters?XBridge?C18（5?μm，250?mm×4.6?mm）;XS204型電子天平（d=0.1?mg，Mettler?Toledo）;MX5型電子天平（d=0.001?mg，Mettler?Toledo）;RHP-100型高速多功能粉碎機（浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司）;DHG-9245A型電熱鼓風干燥箱（上海市一恒科學儀器有限公司）;KQ-500DA型數(shù)控超聲波清洗儀（40?kHz?&?500?W，昆山市超聲儀器有限公司）;電熱炒藥機。

1.1.2?試劑。

芒果苷（111607-200402，中國食品藥品檢定研究院）;新芒果苷（MUST-16042232，成都瑞芬思生物科技有限公司，純度大于98%）;異芒果苷（MUST-15100910，成都曼思特生物科技有限公司，純度99.81%）;乙腈（色譜純，Merck）;冰乙酸（HPLC級，阿拉?。?水為超純水;其他試劑均為分析純。

1.1.3?原料。

知母為2018年3月采集自安徽某些鄉(xiāng)鎮(zhèn)的知母，經(jīng)亳州市滬譙藥業(yè)有限公司郭長達副主任中藥師鑒定均為百合科植物知母（Anemarrhena?asphodeloides?Bge.）的根莖。所收集的樣品類型為新鮮知母（6批）。樣品信息見表1。

1.2?試驗方法

1.2.1?測定方法。

該研究參照黃玉瑤等[4]的含量測定方法，以芒果苷和新芒果苷、異芒果苷為評價指標，方法學考察內容不再贅述，具體的含量測定方法如下。

1.2.1.1?色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗。色譜柱Waters?XBridge?C18（250?mm×4.6?mm，5?μm）;流動相乙腈（A）和0.2%冰乙酸（B），按表2中的規(guī)定進行梯度洗脫，流速1.0?mL/min，柱溫為30?℃，檢測波長為258?nm。理論塔板數(shù)以芒果苷色譜峰計在50?000以上。

1.2.1.2?對照品溶液的制備。取芒果苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇溶解，配制成0.05?mg/mL的溶液，即得。

1.2.1.3?供試品溶液的制備。取知母粉末（過3號篩）約0.1?g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25?mL，稱定重量，超聲處理（功率400?W，頻率40?kHz）30?min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻。用0.22?μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.1.4?測定法。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?μL，注入液相色譜儀測定，以芒果苷為參照，以其相應的峰為S峰，計算新芒果苷、異芒果苷的相對保留時間，其相對保留時間應在規(guī)定值的±5%范圍內，以芒果苷的峰面積為對照，分別乘以校正因子，計算新芒果苷、異芒果苷的含量，計算公式為Wm=Wk×Amf×Ak（Ak為參照物峰面積，Wk為參照物濃度，Am為其他組分m峰面積，Wm為其他組分m濃度）。相對保留時間和校正因子見表3。

1.2.2?產(chǎn)炮片成分變化研究。

取鮮知母，清洗泥沙，去除毛須后直接切片，置烘箱中50?℃干燥，備用，共6批（樣品序號1～6）。按照一測多評法測定，得新芒果苷、芒果苷、異芒果苷的含量。

1.2.3?知母個成分變化研究。

取鮮知母，清洗泥沙，去除毛須后直接置烘箱中50?℃干燥，備用，共6批（樣品序號1～6）。按照一測多評法測定，得新芒果苷、芒果苷、異芒果苷的含量。

1.2.4?傳統(tǒng)片成分變化研究。

取干燥知母個，共6批（樣品序號1～6），搶水洗凈之后，置鏤空的塑料筐中，每隔1?h噴淋一次，共噴淋4次后，用濕布覆蓋，放置6?h后，檢查知母個已潤透，取出，切片，50?℃干燥，備用。按照一測多評法測定，得新芒果苷、芒果苷、異芒果苷的含量。

1.2.5?鹽知母成分變化研究。

根據(jù)生產(chǎn)經(jīng)驗，鹽知母的炮制工藝為：取知母片，加40%鹽水（食鹽用量為2%）拌勻，悶潤，采用電熱炒藥機炒至鹽知母片老黃色～黃色，質硬脆，炒藥機溫度120?℃，頻率45?Hz。該研究采用產(chǎn)地切片和知母潤切片2種知母片原料，考察鹽知母悶潤、炒制炮制過程中的成分變化。

1.2.5.1?以產(chǎn)炮片為原料炮制鹽知母。

（1）潤制過程中的成分變化。

取產(chǎn)地切片干燥品（樣品序號1）5?kg，噴淋800?mL食鹽水至知母片全部濕潤潤透，于放置0、10、20、30、40、50、60?min后取樣，置50?℃烘箱中干燥至水分合格，比較不同潤制時間的成分變化。

（2）炒制過程中的成分變化。

取上述潤制好的知母片，置已預熱至120?℃的炒藥機中，頻率40?Hz，進行炒制。在不同時間點取樣，比較不同炒制時間的成分變化。

1.2.5.2?以傳統(tǒng)片為原料炮制鹽知母。

（1）潤制過程中的成分變化。

取傳統(tǒng)片干燥品（樣品序號1）5?kg，噴淋800?mL食鹽水至知母片全部濕潤潤透，于放置0、10、20、30、40、50、60?min后取樣，置50?℃烘箱中干燥至水分合格，比較不同潤制時間的成分變化。

（2）炒制過程中的成分變化。

取潤制好的知母片，置已預熱至120?℃的炒藥機中，頻率40?Hz，進行炒制。在不同時間點取樣，比較不同炒制時間的成分變化。

2?結果與分析

2.1?產(chǎn)炮片成分變化研究

產(chǎn)炮片的成分變化見表4。經(jīng)成對樣本t檢驗（P<0.01）[7]，鮮知母與產(chǎn)炮片相比，芒果苷、異芒果苷無顯著性差異，而新芒果苷具有顯著性差異，平均增幅91.2%。另外該研究示例的產(chǎn)炮片含4批次不符合中國藥典芒果苷規(guī)定的含量限度。

2.2?知母個成分變化研究

知母個的成分變化見表5。經(jīng)成對樣本t檢驗（P<0.01），鮮知母與干燥后的知母個相比，芒果苷、新芒果苷具有顯著性差異，而異芒果苷無顯著性差異，鮮知母加工干燥個子貨之后，芒果苷的含量明顯上升，而相對應的新芒果苷含量明顯下降，芒果苷平均增幅225.4%，新芒果苷降幅82.7%。知母個為傳統(tǒng)的知母產(chǎn)地初加工，與“2.1”項產(chǎn)炮片相比，產(chǎn)炮片是快速風干的過程，而知母個則是在自身水、熱參與下的緩慢過程，所表現(xiàn)出來的黃酮類成分的變化情況也不同。即在鮮知母加工成知母個的過程中，明顯出現(xiàn)了新芒果苷向芒果苷轉化的情況。

2.3?傳統(tǒng)片成分變化研究

由表6可知，加工成傳統(tǒng)片后，各成分變化幅度較小，成對樣本t檢驗（P<0.01）均無顯著性差異。但是從直觀數(shù)據(jù)分析中可以看出，加工成傳統(tǒng)片后，芒果苷上升，新芒果苷下降，雖然幅度較小，但是也說明了在知母個潤切的過程中，芒果苷和新芒果苷存在轉化的情況。個別數(shù)據(jù)出現(xiàn)潤切后芒果苷含量降低，可能是因為水處理損失的問題。

2.4?鹽知母成分變化研究

2.4.1?以產(chǎn)炮片為原料炮制鹽知母。

2.4.1.1?潤制過程中的成分變化。

由表7可知，產(chǎn)炮片經(jīng)鹽水潤制后，芒果苷含量逐漸上升，新芒果苷含量逐漸下降，異芒果苷含量變化無明顯規(guī)律。即在鹽水的參與下，隨著潤制程度的加深，產(chǎn)炮片中新芒果苷逐漸向芒果苷轉化。

2.4.1.2?炒制過程中的成分變化。

由表8可知，以產(chǎn)炮片為原料炮制鹽知母的炒制過程中，芒果苷、新芒果苷和異芒果苷均呈小幅度的降低。

2.4.2?以傳統(tǒng)片為原料炮制鹽知母。

2.4.2.1?潤制過程中的成分變化。

由表9可知，傳統(tǒng)片經(jīng)鹽潤制后，芒果苷有小幅度的上升，新芒果苷和異芒果苷均有小幅度的降低。

2.4.2.2?炒制過程中的成分變化。

由表10可知，以傳統(tǒng)片為原料炮制鹽知母的炒制過程中，芒果苷、新芒果苷和異芒果苷均呈小幅度的降低。

3?結論與討論

知母初加工及其炮制過程中一直伴隨著芒果苷和新芒果苷的成分轉化。結合鮮知母、知母片（產(chǎn)炮片、傳統(tǒng)片）、知母個、鹽知母等炮制過程中的變化規(guī)律，芒果苷和新芒果苷間存在轉化，其轉化的原理是在有水參與的條件下發(fā)生水解反應[3-5]。

綜合各組數(shù)據(jù)，可知所得炮制品最終質量可趨于一致，即“鮮知母→產(chǎn)炮片→鹽知母”≈“鮮知母→知母個→傳統(tǒng)片→鹽知母”。2種路線趨同的關鍵是水的參與，盡管前述產(chǎn)炮片芒果苷含量很低、新芒果苷含量高，但是在水的參與下，經(jīng)過一定時間潤制，激發(fā)了這個環(huán)節(jié)的質量轉化，最終與傳統(tǒng)片處于同一水平。而各環(huán)節(jié)轉化的程度主要基于2個方面的因素，一是藥材本身的原始物質積累，二是水參與的程度（工藝參數(shù)的控制）。有研究報道，鹽知母先拌鹽水后炒比先炒后加鹽水的方式所得芒果苷含量也增高[8]，鹽知母炮制前后芒果苷含量變化趨勢不一致[9-12]，該研究所得的結論也可以解釋此種現(xiàn)象。

該試驗經(jīng)研究知母產(chǎn)品加工和炮制過程中的成分轉化，再次說明產(chǎn)地炮制一體化并不是所有品種都適用的，需要通過研究驗證其可行性、合理性。該研究中知母經(jīng)產(chǎn)炮一體化加工后，所得的知母片的芒果苷含量低、新芒果苷含量高，該研究項目組跟蹤了3年，每月取亳州地塊知母樣品進行跟蹤，所得的結果一致，與傳統(tǒng)的加工方式所得相悖。如果不進行再次炮制，是不能滿足質量和臨床用藥要求的，如炮制成鹽知母或經(jīng)潤制。但是有文獻報道，先將鮮知母干燥至一定的程度（40%含水量），再切片，經(jīng)驗證一體化工藝飲片與傳統(tǒng)工藝飲片在化學組成和藥效上具有等效性[13]。這一方法與該研究所使用的直接趁鮮切片的方法不同，可能產(chǎn)地農(nóng)戶大部分無法把握這個關鍵的參數(shù)，因此所產(chǎn)出的知母片多有不合格的。

綜上所述，知母產(chǎn)地初加工及炮制過程中成分變化復雜，內環(huán)境下如何轉化的還有待探究，但是通過該試驗的研究，可知鮮知母、產(chǎn)炮片、知母個、傳統(tǒng)片、鹽知母等的質量變化的重要因素是水環(huán)境，過多易造成流失，過少反應不完全，因此芒果苷和新芒果苷是可以作為知母加工和炮制過程中的重要質量指征，監(jiān)測知母的質量變化。

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