郭瀟瀟，李隱俠，王 悅，張 含，張 俊，錢(qián) 勇，孟春花，王慧利，仲躋峰，曹少先,3*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，南京 210095；2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，南京 210014；3.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺(tái)，南京 210014)

湖羊是我國(guó)著名的地方綿羊品種，具有性成熟早、產(chǎn)多羔、耐濕熱等優(yōu)點(diǎn)，但其生長(zhǎng)速度仍有待提高。在湖羊的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，初生體重和斷奶體重與后期生長(zhǎng)高度相關(guān)，同時(shí)，初生體重還與羔羊存活力關(guān)系密切，因此開(kāi)展初生體重和斷奶體重與基因標(biāo)記的關(guān)聯(lián)研究，對(duì)于湖羊本品種選育或以湖羊?yàn)橛N素材的肉羊新品種培育具有十分重要的意義。

多形性腺瘤基因1(pleomorphic adenoma gene 1，PLAG1)是多形性腺瘤基因家族成員之一，PLAG1基因在結(jié)構(gòu)上包括7個(gè)C2H2鋅指和1個(gè)富含絲氨酸的轉(zhuǎn)錄激活區(qū)[1]，Kas等[2]在研究唾液腺多形性腺瘤時(shí)通過(guò)位置克隆首次發(fā)現(xiàn)了PLAG1基因，后來(lái)陸續(xù)報(bào)道PLAG1基因與急性髓細(xì)胞白血病等癌癥有關(guān)[3-5]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，PLAG1基因可調(diào)控動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育且在胚胎期表達(dá)量高，出生后表達(dá)量降低甚至低于檢測(cè)限[6-8]。研究表明，PLAG1敲除導(dǎo)致小鼠生長(zhǎng)遲緩和生育能力下降[9-11]。Abi Habib等[12]研究發(fā)現(xiàn)，HMGA2-PLAG1-IGF2通路的遺傳缺陷可導(dǎo)致胎兒及出生后生長(zhǎng)受限。Karim等[13]發(fā)現(xiàn)，14號(hào)染色體約25 Mb 位置的QTL對(duì)身高和體重有重要影響，F(xiàn)ink等[14]對(duì)該區(qū)域進(jìn)行QTL(eQTL)定位發(fā)現(xiàn)，QTL區(qū)域包含的多個(gè)基因中只有PLAG1差異表達(dá)，且只有PLAG1與奶牛生長(zhǎng)和體重的QTLs有相同的關(guān)聯(lián)特征。人類(lèi)和家畜的全基因組關(guān)聯(lián)研究也證實(shí)了PLAG1在生長(zhǎng)中的作用[15-20]。Zhong等[21]研究顯示，PLAG1基因內(nèi)或附近的單核苷酸多態(tài)性與牛的體型等經(jīng)濟(jì)性狀有關(guān)。Li等[22]通過(guò)對(duì)牛PLAG1的多態(tài)性進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，缺失位點(diǎn)(g.3747444-3747462 del GAACACACAGCCCACAAGG)和替換位點(diǎn)(g.44966G>A)對(duì)中國(guó)牛體高、腰圍、臀長(zhǎng)、體重等生長(zhǎng)性狀有顯著影響，Guo等[23]研究表明，PLAG1是影響豬肢骨長(zhǎng)的候選基因。但湖羊PLAG1基因多態(tài)性及其與生長(zhǎng)性能的關(guān)聯(lián)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

本試驗(yàn)以湖羊?yàn)檠芯繉?duì)象，對(duì)PLAG1 5′UTR和基因5′調(diào)控區(qū)進(jìn)行克隆，篩選5′調(diào)控區(qū)SNPs位點(diǎn)，并與初生體重、斷奶體重進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，為加快以湖羊?yàn)橛N素材的肉羊新品種培育提供候選分子標(biāo)記。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

456只斷奶湖羊及其初生體重、斷奶體重等數(shù)據(jù)資料由江蘇西來(lái)原生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司提供，試驗(yàn)湖羊出生于同一季度、相同飼養(yǎng)環(huán)境，營(yíng)養(yǎng)水平和飼養(yǎng)管理一致，采集湖羊耳組織，放入冰盒帶回實(shí)驗(yàn)室，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩：蛱パ蚣∪饨M織采自江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院六合基地種羊場(chǎng)，采集后立即投入液氮罐，帶回實(shí)驗(yàn)室后轉(zhuǎn)移到-80 ℃冰箱保存。

2×TaqMaster Mix、HiScript Ⅱ Reverse Transcriptase試劑盒均購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司，DNA Marker、SMARTerRACE 5′/3′ Kit User Manual、pMD19-T均購(gòu)自北京寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司，Goldview I型核酸染色劑購(gòu)自南京壽德生物科技有限公司，動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒購(gòu)自北京天根生化科技有限公司，DNA凝膠回收試劑盒、TreliefTM5α Chemically Competent Cell均購(gòu)自南京擎科生物科技有限公司。

1.2 DNA和RNA提取及檢測(cè)

參照動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取湖羊胎羊肌肉組織總RNA。酚/氯仿抽提法提取耳組織樣DNA。紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA/RNA純度和濃度，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其完整性。

1.3 引物設(shè)計(jì)與合成

NCBI網(wǎng)站查找綿羊PLAG1基因(NC_019466.2)及mRNA預(yù)測(cè)序列(XM_012183720.1)，利用Primer 5.0設(shè)計(jì)5′UTR、5′RACE和5′調(diào)控區(qū)特異性引物，送至上海捷瑞公司合成。引物信息見(jiàn)表1。

1.4 PCR擴(kuò)增

PCR反應(yīng)體系為25 μL：2×TaqMaster Mix 12.5 μL，上、下游引物各1 μL，DNA模板1 μL，添加ddH2O至25 μL。PCR擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，退火30 s，72 ℃延伸1 kb·min-1(根據(jù)表1引物PCR擴(kuò)增片段長(zhǎng)度確定延伸時(shí)間)，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。引物序列及退火溫度見(jiàn)表1，PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳、切膠，送南京擎科生物公司測(cè)序。

表1 特異性引物信息

1.5 5′RACE克隆

1.5.1 合成cDNA第一鏈 準(zhǔn)備Buffer Mix：5× First-stand Buffer 4.0 μL、DTT 0.5 μL、dNTPs 1.0 μL 離心混勻，置冰上備用。將肌肉組織RNA模板1 μg(1.0～10 μL)、5′-CDS Primer A 1.0 μL、sterile H2O 0～9 μL加入離心管中混勻，PCR儀中72 ℃反應(yīng)3 min，42 ℃反應(yīng)2 min，用微型離心機(jī)離心10 s，加入1 μL SMARTerⅡ A Oligonucleotide。加入Buffer Mix 5.5 μL、RNase Inhibit 0.5 μL、SMARTScribe Reverse Transcriptase 2.0 μL混合，混勻，PCR儀中42 ℃反應(yīng)90 min，70 ℃反應(yīng)10 min。作為5′RACE Ready cDNA使用。

1.5.2 擴(kuò)增5′非編碼區(qū)末端序列 采用巢式PCR，第一輪PCR：準(zhǔn)備A、B、C共3個(gè)PCR管，加入PCR-Grade H2O 15.5 μL、2×SeqAmp Buffer 25.0 μL、SeqAmp DNA Polymerase 1.0 μL離心混勻，分別加入5′RACE Ready cDNA 2.5 μL。A組加入10×UPM 5 μL；B組加入PLAG1GSP1 1 μL；C組加入PLAG1GSP1 1 μL、10×UPM 5 μL。每組補(bǔ)充ddH2O至50 μL，離心混勻。PCR反應(yīng)程序：94 ℃ 30 s，72 ℃ 3 min，5個(gè)循環(huán)；94 ℃ 30 s，70 ℃ 30 s，72 ℃ 3 min，5個(gè)循環(huán)；94 ℃ 30 s，68 ℃ 30 s，72 ℃ 3 min，25個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，3組分別取5 μL擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，觀察條帶是否特異及拖帶。

第二輪PCR：準(zhǔn)備D、E、F共3個(gè)PCR管，分別加入2×TaqMaster Mix 12.5 μL、C管加入反應(yīng)原液1 μL。D組加入U(xiǎn)niversal Primer Short 1 μL；E組加入PLAG1GSP2 1 μL；F組加入PLAG1GSP2 1 μL、Universal Primer Short 1 μL。每組補(bǔ)充ddH2O至25 μL，混勻。PCR擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸3 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃最終延伸5 min。反應(yīng)結(jié)束后，3組分別進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，切膠回收特異性條帶。

1.5.3 TA克隆 切膠回收的DNA與pMD19-T載體連接，進(jìn)行轉(zhuǎn)化、搖菌，將菌液送至南京擎科公司測(cè)序。

1.6 基因分型

根據(jù)測(cè)序結(jié)果，使用Chromas進(jìn)行分析，查找SNP位點(diǎn)。統(tǒng)計(jì)計(jì)算基因型頻率及等位基因頻率。

1.7 數(shù)據(jù)分析

PIC-CALC程序計(jì)算多態(tài)信息含量，HAPLOVIEW軟件進(jìn)行SNPs連鎖分析，SPSS 18.0軟件中One-Way ANOVA方法統(tǒng)計(jì)分析不同基因型、單倍型與初生體重、斷奶體重的差異。數(shù)值以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 PLAG1預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄本5′UTR的驗(yàn)證

以NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中綿羊PLAG1預(yù)測(cè)的轉(zhuǎn)錄本XM_012183720.1序列為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)引物，以湖羊肌肉組織cDNA為模板，分段巢式擴(kuò)增，驗(yàn)證預(yù)測(cè)的5′UTR序列是否正確。結(jié)果顯示，第一輪無(wú)目的條帶，第二輪擴(kuò)增出的條帶與預(yù)測(cè)目的條帶大小一致(圖1)，PCR產(chǎn)物測(cè)序拼接總長(zhǎng)度為4 968 bp，并發(fā)現(xiàn)與預(yù)測(cè)序列XM_012183720.1一致，表明預(yù)測(cè)序列確實(shí)為PLAG1 5′UTR序列，但轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和5′UTR 的5′末端序列仍需通過(guò)5′RACE確定。

上圖為第二輪巢式PCR。M.DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～3.依次為5′非翻譯區(qū)(5′UTR)r.112～r.2442、r.2422～r.4253、r.4072～r.5166的擴(kuò)增產(chǎn)物

2.2 PLAG1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)鑒定

利用5′RACE技術(shù)，擴(kuò)增PLAG1 5′UTR的5′末端序列，獲得的特異性條帶分別經(jīng)TA克隆、測(cè)序比對(duì)，結(jié)果顯示，獲得5種PLAG1 5′UTR的5′末端序列，且轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)均位于PLAG1基因g.30535位點(diǎn)(圖2)。

箭頭所示為PLAG1轉(zhuǎn)錄本轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)

2.3 PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)擴(kuò)增

根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)PLAG1基因序列(NC_019466.2)，從已經(jīng)鑒定的PLAG1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)g.30535向前擴(kuò)增5′調(diào)控區(qū)，分別在g.28626、g.30994 位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增大小為2 369 bp的目的片段。如圖3所示，表明成功擴(kuò)增PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)。

圖3 PLAG1 基因5′調(diào)控區(qū)的PCR擴(kuò)增

2.4 PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)SNPs篩選

通過(guò)PCR產(chǎn)物測(cè)序，在湖羊群體中檢測(cè)到PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)共有15個(gè)突變位點(diǎn)，均具有3種基因型。測(cè)序峰圖如圖4所示，分別為g.28888A>T、g.28901G>T、g.28913T>A、g.29717G> C、g.29724A>C、g.29725G>A、g.29768T> C、g.29771A>G、g.30141T>A、g.30144A> G、g.30691C>A、g.30694A>T、g.30737T> C、g.30802C>T、g.30825A>G。

圖4 PLAG1 SNPs位點(diǎn)雜合型測(cè)序圖

2.5 PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)群體遺傳學(xué)特征

2.5.1PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)SNPs基因分型 通過(guò)PCR產(chǎn)物測(cè)序，456只湖羊群體中PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)共發(fā)現(xiàn)15個(gè)突變位點(diǎn)，15個(gè)SNPs位點(diǎn)的基因型頻率、等位基因頻率及多態(tài)信息含量見(jiàn)表2。結(jié)果表明，15個(gè)SNPs位點(diǎn)在湖羊群體中均有3種 基因型，均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P>0.05)；g.28888A>T、g.28901G>T、g.29717G>C、g.29724A>C、g.29725G>A、g.29768T>C、g.29771A> G、g.30141T>A、g.30144A>G、g.30691C> A、g.30694A>T、g.30802C>T、g.30825A> G多態(tài)信息含量(PIC)為0.09或0.10，為低度多態(tài)；g.28913T>A和g.30737T>C的PIC分別為0.34和0.33，為中度多態(tài)。

表2 PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)SNPs基因型頻率和等位基因頻率

2.5.2PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)SNPs位點(diǎn)單倍型分析 通過(guò)連鎖突變分析，發(fā)現(xiàn)g.28901G>T、g.29717G> C、g.29724A>C、g.29725G>A、g.29768T> C、g.29771A>G、g.30141T>A、g.30144A> G、g.30691C>A、g.30694A>T、g.30802C> T、g.30825A>G，連鎖突變相關(guān)性為100%，g.28888A>T與上述除g.28901G>T外11個(gè) 位點(diǎn)的連鎖突變相關(guān)性為97%，g.28913T>A、g.30737T> C兩者連鎖突變相關(guān)性為97%(圖5)。單倍型分析發(fā)現(xiàn)，湖羊群體中具有18種單倍型，AAGGAAGGAAGGTTAATTAACCAACCCCAA單倍型頻率為40.4%，AAGGTAGGAAGGTTAATTAACCAATCCCAA單倍型頻率為36.0%，屬于優(yōu)勢(shì)單倍型。其他單倍型占比低，屬于劣勢(shì)單倍型(表3)。

表3 PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)不同單倍型和單倍型頻率

圖5 PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)連鎖分析圖

2.6 PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)SNPs突變位點(diǎn)與體重關(guān)聯(lián)分析

2.6.1 SNPs位點(diǎn)不同基因型與體重關(guān)聯(lián)分析 根據(jù)SNPS基因分型獲得的數(shù)據(jù)，排除沒(méi)有統(tǒng)計(jì)意義的基因型，分別將單個(gè)位點(diǎn)與初生體重、斷奶體重進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。如表4所示，就群體初生體重而言，g.28888A>T 位點(diǎn)AA型顯著大于AT型(P<0.05)，g.28901G>T位點(diǎn)GG型顯著大于GT型(P<0.05)，g.30802C>T 位點(diǎn)CC型顯著大于CT型(P<0.05)，g.30825A>G位點(diǎn)AA型顯著大于AG型(P<0.05)。群體斷奶體重g.30737T>C位點(diǎn)CC型顯著小于TC型(P<0.05)，且CC型A、g.30737T>C位點(diǎn)，其他位點(diǎn)優(yōu)勢(shì)純合基因型初生體重、斷奶體重均大于相應(yīng)的雜合基因型，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表4 SNPs位點(diǎn)不同基因型與湖羊體重的關(guān)聯(lián)分析

2.6.2 不同單倍型與體重關(guān)聯(lián)分析 將PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)突變位點(diǎn)進(jìn)行單倍型分析，排除樣本較少的單倍型，選取樣本較多的5種單倍型與湖羊初生體重、斷奶體重關(guān)聯(lián)分析(表5)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AAGGTAGGAAGGTTAATTAACCAATCCCAA型初生體重、斷奶體重都大于其他單倍型，且初生體重與ATGTTAGCACGATCAGTAAGCAATTCCTAG型相比達(dá)到顯著水平(P<0.05)，斷奶體重與AAGGAAGGAAGGTTAATTAACCAACCCC-AA型相比達(dá)到顯著水平(P<0.05)，與其他單倍型之間差異不顯著(P>0.05)。

表5 不同單倍型與湖羊體重的關(guān)聯(lián)分析

3 討 論

PLAG1是多形性腺瘤基因家族重要成員之一，屬于鋅指轉(zhuǎn)錄因子，可直接靶向調(diào)控胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)[24-27]，參與細(xì)胞增殖。小鼠PLAG1基因敲除導(dǎo)致生長(zhǎng)遲緩[28]，表明PLAG1對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)揮重要作用。據(jù)報(bào)道，基因可通過(guò)可變剪接產(chǎn)生不同的5′UTR，影響mRNA穩(wěn)定性、折疊及與核糖體相互作用，從而調(diào)控基因的表達(dá)[29-33]。本研究鑒定出湖羊PLAG1基因5種5′UTR序列，這些不同的5′UTR序列可能調(diào)控PLAG1基因的表達(dá)，從而影響湖羊生長(zhǎng)發(fā)育。

全基因組關(guān)聯(lián)分析研究表明，PLAG1基因內(nèi)或附近的SNPs與荷斯坦牛和胡安×澤西牛雜交種的體高等經(jīng)濟(jì)性狀有關(guān)[34]。Littlejohn等[35]研究表明，PLAG1 ss319607402(chr14 g.23232324A>G)SNP與新生小牛體重(P=1.5×10-19)、青春期前體重(P=1.9×10-5)和日增重(P=0.035)顯著相關(guān)，AA型有利于牛的生長(zhǎng)。范家萌[36]研究發(fā)現(xiàn)，PLAG1基因的9個(gè)SNPs位點(diǎn)與豬的體長(zhǎng)性狀呈顯著相關(guān)。Zhou等[37]研究表明，在牛PLAG1基因的內(nèi)含子1中發(fā)現(xiàn)了1個(gè)19 bp的插入/缺失，19 bp缺失 與體高、胯高、胸圍呈顯著相關(guān)(P<0.05)。這些研究表明了PLAG1基因多態(tài)性在動(dòng)物體重等經(jīng)濟(jì)性狀中的作用，可能作為動(dòng)物體重選擇的候選分子標(biāo)記。本研究首先鑒定了PLAG1在湖羊中有5個(gè) 5′UTR且具有相同的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，位于g.30535。根據(jù)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位置擴(kuò)增湖羊PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)，PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)在湖羊群體中檢測(cè)到15個(gè)SNPs位點(diǎn)，基因分型發(fā)現(xiàn)15個(gè)SNPs位點(diǎn)在湖羊群體中均具有3種基因型。關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，g.28888A>T位點(diǎn)AA型、g.28901G>T位點(diǎn)GG型、g.30802C>T位點(diǎn)CC型、g.30825A>G位點(diǎn)AA型湖羊群體初生體重均顯著大于相應(yīng)的雜合型群體(P<0.05)，而這些位點(diǎn)群體斷奶體重差異均未達(dá)到顯著水平，可能是由于湖羊攝乳量等后天因素或標(biāo)準(zhǔn)差較大引起的。g.30737T>C位點(diǎn)CC型群體斷奶體重顯著小于CT型(P<0.05)，而CC型群體初生體重小于CT型，但差異未達(dá)到顯著水平(P>0.05)，推測(cè)是由于湖羊個(gè)體存在差異所致。說(shuō)明g.28888A>T位點(diǎn)AA型、g.28901G>T位點(diǎn)GG型、g.30802C>T位點(diǎn)CC型、g.30825A>G位點(diǎn)AA型有利于提高湖羊的初生體重，g.30737T>C位點(diǎn)CT型有利于提高湖羊的斷奶體重。

據(jù)報(bào)道，牛PLAG1-CHCHD7基因間區(qū)域存在雙向啟動(dòng)子的序列變體Q(11個(gè)重復(fù)序列CCG與G連鎖)和q(9個(gè)重復(fù)序列CCG與A連鎖)，Q啟動(dòng)子活性是q啟動(dòng)子的1.5倍，且在胎兒期QQ型胎牛肝、骨骼肌、肌肉和大腦PLAG1表達(dá)水平高于qq型[13]。研究發(fā)現(xiàn)，PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)的15個(gè)突變位點(diǎn)在湖羊群體中連鎖，說(shuō)明PLAG1表達(dá)受連鎖位點(diǎn)的調(diào)控。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)PLAG1基因5′調(diào)控區(qū)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行連鎖和單倍型分析發(fā)現(xiàn)，有18種單倍型，對(duì)具有統(tǒng)計(jì)意義的5種單倍型與初生體重、斷奶體重進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，AAGGTAGGAAGGTTAATTAACCAATCCCAA型初生體重、斷奶體重都大于其他單倍型，且初生體重與ATGTTAGCACGATCAGTAAGCAATTCCTAG型相比達(dá)到顯著水平(P<0.05)，斷奶體重與AAGGAAGGAAGGTTAATTAACCAACCCCAA型相比達(dá)到顯著水平(P<0.05)，說(shuō)明AAGGTAGGAAGGTTAATTAACCAATCCCAA型有利于提高湖羊早期體重，對(duì)湖羊羔羊PLAG1表達(dá)的調(diào)控仍有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

綜上所述，湖羊PLAG1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位于g.30535，其5′調(diào)控區(qū)在湖羊群體中檢測(cè)到15個(gè)SNPs位點(diǎn)且存在連鎖。其中g(shù).28888A>T、g.28901G>T、g.30802C>T、g.30825A>G位點(diǎn)與初生體重顯著相關(guān)(P<0.05)，g.30737T>C位點(diǎn)與斷奶體重顯著相關(guān)(P<0.05)。AAGGTAGGAAGGTTAATTAACCAATCCCAA單倍型與初生體重和斷奶體重顯著相關(guān)(P<0.05)。這些位點(diǎn)可以作為候選分子標(biāo)記用于湖羊生長(zhǎng)性狀的輔助選擇。