李 冰， 朋 璐， 王 康， 熊永潔， 賀紹君

(安徽科技學院 動物科學學院，安徽 鳳陽 233100)

肉雞生長速度較快，機體代謝率高，產熱多，但由于全身覆蓋羽毛、沒有汗腺等原因，導致散熱能力差，極易受到高溫環(huán)境的負面影響。目前肉雞養(yǎng)殖業(yè)大多為規(guī)?；?、集約化養(yǎng)殖，飼養(yǎng)密度較大，特別在炎熱季節(jié)，飼養(yǎng)環(huán)境內溫度升高，當舍溫達到35 ℃以上時，肉雞就會發(fā)生熱應激(heat stress，HS)，出現(xiàn)典型癥狀，采食量降低、生長速度緩慢、飼料轉化率降低等，并且降低免疫力，誘發(fā)多種疾病。熱應激(heat stress,HS)是指機體對高溫的非特異性生理反應的總和。肉雞汗腺不發(fā)達、機體代謝率高,極易受到高溫環(huán)境的負面影響,造成典型的熱應激生理反應,導致生產、繁殖性能下降,影響產品質量和數(shù)量,造成巨大損失。在實際生產中，許多養(yǎng)殖場在雞舍周圍種植樹木或遮陽棚遮擋陽光，減少太陽光產生的輻射熱，使用隔熱材料對雞舍頂部和墻壁做好隔熱措施，阻擋外界高溫的入侵，通過風機和濕簾加強雞舍的通風降溫，提供充足的飲水并降低飲水溫度，通過調整飼料營養(yǎng)和飼喂時間、降低飼養(yǎng)密度等措施來減緩熱應激給雞群帶來的危害。研究表明,針對熱應激造成的基礎生理代謝紊亂,可調整日糧營養(yǎng),增加營養(yǎng)物質的濃度和氨基酸水平,滿足機體對能量、氨基酸和礦物質的需求,如提高1%～2%的蛋白質含量等,或者添加復方中草藥散劑和抗應激藥物,如有機酸、VC等,能有效減輕熱應激帶來的不良反應。

延胡索酸是動物營養(yǎng)中重要的有機酸,其酸化效應能調節(jié)機體酸堿平衡,可參與能量代謝,緊急生成ATP,提高抵抗力,緩解熱應激造成的不良危害,并且延胡索酸幾乎無毒副作用。目前國內外研究延胡索酸作為日糧添加劑用于反芻動物的報道較多,但對于肉雞日糧添加延胡索酸的報道并不多。本試驗在飼糧中添加延胡索酸,研究其對持續(xù)熱應激肉雞血常規(guī)指標及血清生化指標的影響,為臨床上使用延胡索酸防控肉雞熱應激提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗所用肉雞為羅斯308肉雞,肉仔雞購于蚌埠市億耀農業(yè)科技發(fā)展有限公司;延胡索酸(>99%),購于河南一躍實業(yè)有限公司;多種血清生化試劑盒,均購于深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.2 動物分組與處理

選用1日齡羅斯308肉雞220只,采用網養(yǎng)(共四層,每層4籠,每籠0.9 m×0.9 m×0.38 m)育雛,1～21 d飼喂基礎飼料,基礎飼料的成分及營養(yǎng)水平見表1,在常溫環(huán)境下飼養(yǎng)。飼養(yǎng)至21日齡時,挑選200只健康肉雞,隨機分成5組,每組4個重復,每個重復10只,公母各半,Ⅰ組常溫對照組和Ⅱ組熱應激對照組飼喂基礎飼料,Ⅲ～Ⅴ試驗組飼料中分別添加0.5%、1.0%和1.5%延胡索酸。試驗從21日齡持續(xù)到42日齡,Ⅰ組舍溫維持在22～24 ℃,相對濕度45%～50%;Ⅱ～Ⅴ組使用工業(yè)暖風機(吉毅IFH04-30A)控制溫度,舍溫(34±1) ℃,濕度50%～60%,期間肉雞持續(xù)處于熱應激環(huán)境。自由采食和飲水,每日光照中斷1 h(22:00-23:00),使肉雞適應黑暗環(huán)境。

表1 基礎飼料的成分及營養(yǎng)水平

1.3 測定項目及分析方法

1.3.1 血常規(guī)指標測定 當試驗至第28、35和42日齡時,從每個重復中選取公母各1只,每組8只,翅下靜脈采集血液2 mL裝于EDTA-2Na抗凝采血管,輕微搖晃防止凝血,使用全自動血液細胞分析儀(邁瑞B(yǎng)C-2800Vet)測定白細胞(White blood cell count,WBC)、淋巴細胞(Lymphocyte,LYM)、中性粒細胞(Neutrophil,NEU)、紅細胞(Red blood cell count,RBC)數(shù)目及血紅蛋白(Hemoglobin,HGB)和紅細胞壓積(Hematocrit,HCT)。

1.3.2 血清生化指標測定 當試驗至第28、35和42日齡時,從每個重復中選取公母各1只,每組8只,翅下靜脈采集血液于普通真空采血管中,靜置待有少量血清析出后,2 000 r/min離心10 min,取上清液于EP管中待測,使用全自動生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S-200)測定血清中葡萄糖(Glucose,GLU)、總蛋白(Total protein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)、球蛋白(Globulin,GLB)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL-C)和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL-C)含量。

1.3.3 分析方法 采用SPSS 18.0對同一時間點不同組的數(shù)據(jù)進行 LSD法多重比較,用“平均值±標準差”表示試驗結果,以

P

>0

.

05表示差異不顯著,

P

<0

.

05表示差異顯著,

P

<0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 延胡索酸對熱應激肉雞血液中WBC、LYM及NEU數(shù)目的影響

由表2可知,在28日齡時Ⅲ組WBC顯著低于Ⅰ組(

P

<0.01);在35日齡時Ⅰ組顯著高于其它各組(

P

<0.01),Ⅲ和Ⅴ組在35日齡時均顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05)。Ⅲ組LYM在28日齡時顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05)。在28日齡時,Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ組NEU顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05或

P

<0.01),Ⅳ組NEU顯著高于Ⅲ組(

P

<0.05);在35日齡時,Ⅰ組NEU顯著高于其它各組(

P

<0.01),Ⅴ組NEU顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05);在42日齡時Ⅳ組NEU顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05)。

表2 延胡索酸對熱應激肉雞血液中WBC、LYM及NEU數(shù)目的影響

2.2 延胡索酸對熱應激肉雞血液中RBC、HGB及HCT的影響

由表3可知,Ⅰ和Ⅲ組RBC在35日齡時顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),Ⅳ組RBC在42日齡時顯著低于Ⅲ組(

P

<0.05)。在28日齡時,Ⅱ和Ⅲ組HGB顯著低于Ⅰ組(

P

<0.05或

P

<0.01);在35日齡時,Ⅱ組HGB顯著低于其它各組(

P

<0

.

05或

P

<0

.

01)。在28日齡時, Ⅰ和Ⅴ組HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05);在35日齡時,Ⅲ組HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05)。

表3 延胡索酸對熱應激肉雞血液中RBC、HGB及HCT的影響

2.3 延胡索酸對熱應激肉雞血清中GLU、TP、ALB及GLB含量的影響

由表4可知,28日齡時,Ⅱ組GLU顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05),Ⅲ和Ⅳ組GLU顯著高于Ⅰ和Ⅴ組(

P

<0.05或

P

<0.01);35日齡時Ⅴ組GLU顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05);42日齡時Ⅱ組GLU顯著高于Ⅰ和Ⅲ組(

P

<0.05)。42日齡時的Ⅲ組TP顯著比Ⅱ組高(

P

<0.05)。28、35、42日齡時各組的ALB和GLB變化均不顯著(

P

<0.05)。

表4 延胡索酸對熱應激肉雞血清中GLU、TP、ALB及GLB含量的影響

2.4 延胡索酸對熱應激肉雞血清中TG、TC、HDL-C及LDL-C含量的影響

由表5可知,28和42日齡時Ⅲ組TG與Ⅰ組相比顯著降低(

P

<0

.

05或

P

<0.01)。在42日齡時Ⅲ和Ⅳ組TC均顯著高于Ⅱ和Ⅴ組(

P

<0.05),同時Ⅳ組TC顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05)。關于HDL-C,35日齡時Ⅳ組HDL-C顯著小于Ⅱ組(

P

<0.05);42日齡時,Ⅲ組HDL-C顯著高于其它各組(

P

<0.05或

P

<0.01)。28日齡時Ⅲ、Ⅳ組LDL-C顯著低于Ⅱ組(

P

<0.05),Ⅴ組LDL-C顯著高于Ⅲ組(

P

<0.05);42日齡時,Ⅲ組LDL-C顯著高于Ⅰ和Ⅴ組(

P

<0.05),Ⅳ組LDL-C顯著高于Ⅰ組(

P

<0.05)。

表5 延胡索酸對熱應激肉雞血清中TG、TC、HDL-C及LDL-C含量的影響

3 結論與討論

3.1 延胡索酸對熱應激肉雞血常規(guī)指標的影響

WBC包括LYM和NEU,屬于免疫細胞。有研究表明,熱應激會抑制肉雞的免疫能力,對淋巴細胞的活性沒有明顯影響,但會抑制總白細胞數(shù)和抗體產生,使熱應激肉雞血液中WBC數(shù)目下降,同時應激時下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸機能增強,使下丘腦分泌促進促腎上腺皮質激素分泌的激素,其中腎上腺皮質釋放過量的糖皮質激素,會分解靶細胞,尤其是能溶解LYM,使熱應激時肉雞血液中LYM數(shù)目降低。本試驗結果顯示,Ⅱ組血液中WBC、LYM、NEU數(shù)目均比Ⅰ組低,Ⅱ組LYM數(shù)目呈下降趨勢,與上述研究結果一致。延胡索酸試驗組的WBC數(shù)目普遍高于熱應激對照組,Ⅲ和Ⅴ組在35 日齡時都顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),說明延胡索酸能提高WBC數(shù)目,可能是因為延胡索酸形成能量的途徑短,應激時可快速合成ATP,增強抗應激能力,提高免疫力,緩解熱應激對白細胞的抑制。延胡索酸組的LYM與熱應激對照組相比變化不顯著。在28、35日齡時延胡索酸試驗組的NEU數(shù)目均高于熱應激對照組,但又均低于常溫對照組,在28日齡時Ⅳ組的NEU數(shù)目明顯比Ⅲ組高(

P

<0.05),在35日齡時Ⅴ組的NEU數(shù)目明顯比Ⅱ組高(

P

<0.05),說明延胡索酸能提高NEU數(shù)目,其中1%的延胡索酸在短期內比0.5%的延胡索酸更快生效,但效果持續(xù)時間較短。熱休克蛋白能增強細胞的抗應激能力,使細胞免受應激造成的不可逆損失甚至死亡,應激過程中產生的熱休克蛋白在LYM與NEU中均有表達,延胡索酸能促進LYM和NEU生成,使熱休克蛋白的表達增加,從而增強機體和細胞對多種應激原的耐受能力,對雞的免疫功能起一定的調節(jié)作用。RBC是血液中數(shù)量最多的一種血細胞,具有免疫功能,內含運輸氧的HGB,而HCT代表一定體積全血中RBC體積的相對比例,因RBC增加或血漿量減少而增加。有研究表明,熱應激反應會干擾肉雞腸道的微生態(tài)平衡,導致細菌大量繁殖與死亡。一方面,細菌和內毒素破壞腸黏膜的屏障作用,然后進入血液,另一方面,腸黏膜缺血缺氧使酸性產物過多,阻礙細胞代謝,損害組織,細胞外Ca內流使組織水腫,增加上皮通透性,加快細菌和內毒素進入血液,對身體造成損害,影響RBC生成,并直接對RBC造成損傷,因此血液中RBC和HGB會隨時間延長而減少,同時在熱應激條件下,肉雞張口呼吸,并伴有一定的腹瀉,使機體缺失水分,使熱應激肉雞血液中HCT減少。本研究結果顯示,Ⅱ組RBC、HGB、HCT均低于Ⅰ組,且隨時間延長而降低。延胡索酸組的RBC、HGB、HCT普遍高于熱應激對照組,28日齡時Ⅴ組HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),35日齡時Ⅲ組的RBC和HCT顯著高于Ⅱ組(

P

<0.05),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組HGB顯著高于Ⅱ組(

P

<0

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05或

P

<0.01),表明延胡索酸能提高熱應激肉雞血液中的RBC、HGB、HCT,因為延胡索酸能改善腸道內微生物環(huán)境,抑制或殺滅有害菌,在飼料中添加延胡索酸能減少內毒素的產生和進入血液,從而減少對機體的影響,減少內毒素對紅細胞的損害,使熱應激肉雞血液中RBC和HGB增加。延胡索酸的酸化效應能降低胃內 pH,增強消化酶活性,降低胃排空速度,降低腹瀉發(fā)生率,從而使熱應激肉雞血液中HCT增加。

本研究結果顯示,在28日齡時Ⅳ和Ⅴ組的血常規(guī)指標普遍高于Ⅲ組,在35和42日齡時Ⅲ組的血常規(guī)指標普遍高于Ⅳ和Ⅴ組,說明0.5%的延胡索酸能長期改善熱應激肉雞血常規(guī)指標,但生效較慢;1%和1.5%的延胡索酸能在早期快速改善熱應激肉雞血常規(guī)指標,但效果持續(xù)時間較短,其中1%的延胡索酸產生的效果更好。

3.2 延胡索酸對熱應激肉雞血清生化指標的影響

血清中的GLU能夠隨著血液輸送到各個組織器官中氧化分解、產生ATP,供應生命活動所需的能量。其中一部分是來自于食物中的碳水化合物,經酶分解為單糖;一部分是肝臟通過糖異生合成。在正常情況下,機體的血清GLU分解與合成代謝處于一種動態(tài)平衡狀態(tài)。有研究表明,熱應激促使家禽血漿中皮質酮水平升高,糖異生反應增多,因此肉仔雞血漿GLU水平與常溫對照組相比升高。同時在高溫環(huán)境下,家禽的采食量下降導致機體的糖攝入量不足,為了維持平衡,機體開始消耗自身的脂肪,使血液中的游離脂肪酸水平增高,對GLU的利用減少,因此血清中GLU含量會相對增高。本研究結果顯示,28、35、42日齡時Ⅱ組的GLU含量與Ⅰ組比相對增高,且28和42日齡時Ⅱ組明顯比Ⅰ組高(

P

<0.05),與上述結果一致。28日齡時,Ⅴ組顯著低于Ⅲ和Ⅳ組(

P

<0

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05或

P

<0

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01);42日齡時Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組GLU含量較Ⅱ組均有不同程度降低,且Ⅲ組GLU含量顯著降低(

P

<0.05),表明延胡索酸能調節(jié)熱應激肉雞血清中的GLU含量。血清TP是機體蛋白質的來源之一,由ALB和GLB組成。持續(xù)熱應激影響肉雞采食量,為了維持細胞新陳代謝只能通過分解體內營養(yǎng)物質來提供所需能量。有研究表明,經過高溫處理后,肉雞食欲下降,機體攝入蛋白質也相對減少,同時高溫可能導致蛋白質代謝異常使得機體血清TP含量與常溫對照組相比發(fā)生下降。本試驗結果與其一致,28、35、42日齡時Ⅱ組血清中TP、ALB、GLB含量與Ⅰ組相比不顯著降低。延胡索酸組的TP、ALB、GLB含量普遍高于熱應激對照組,在42日齡時Ⅲ組血清中TP含量與Ⅱ組相比顯著增高(

P

<0.05),說明延胡索酸對熱應激引起的TP、ALB、GLB下降起到一定的緩解作用,但對ALB和GLB的影響不明顯,同時0.5%延胡索酸的效果持續(xù)時間更長,但生效較慢。血脂中的主要成分是TG和TC,還有LDL-C和HDL-C。當發(fā)生熱應激時,高溫環(huán)境會造成細胞損傷,細胞膜的通透性增大,也會增高脂蛋白酶的活性,使得一些組織內酶進入血液中,加速分解血液中的TG和TC,進而導致其含量降低,同時LDL-C和HDL-C將相對增高。本試驗結果顯示,在28、35、42日齡時,與Ⅰ組相比,Ⅱ組血清中的TG和TC含量降低不顯著、LDL-C和HDL-C含量增高不顯著。試驗結果顯示,與Ⅱ組相比,28、35、42日齡時延胡索酸組TG變化不顯著,表明延胡索酸對血清中TG含量影響不明顯。延胡索酸組TC含量均高于熱應激對照組,同時42日齡時Ⅲ和Ⅳ組TC明顯高于Ⅱ和Ⅴ組(

P

<0.05),表明延胡索酸能提高血清中TC的含量。42日齡時,Ⅲ組HDL-C顯著高于其它各組(

P

<0

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05或

P

<0

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01),表明延胡索酸能提高血清HDL-C含量。28日齡時Ⅲ和Ⅳ組LDL-C顯著低于Ⅱ組(

P

<0.05),表明延胡索酸能調節(jié)血清LDL-C含量。

延胡索酸是一種有機酸,添加到日糧中能夠降低胃內pH,經家禽采食后能夠增強胃內消化酶的活性,促進食物的消化吸收,保證糖攝取充足,減少糖異生作用,提高對飼料蛋白質的利用率,提高粗脂肪的消化率,增強機體對脂肪吸收利用,能夠滿足機體正常生命活動的需求,降低熱應激對機體造成的損害作用。因此延胡索酸能調節(jié)熱應激肉雞血清中的GLU、LDL-C含量,提高TP、TC和HDL-C含量,其中0.5%和1%的延胡索酸需要更長時間生效,并且0.5%延胡索酸效果更好,而1.5%延胡索酸能快速生效,但效果持續(xù)時間較短。

綜上所述,延胡索酸能改善熱應激肉雞血常規(guī)和血清生化指標,提高血液中的WBC、NEU、RBC、HGB和HCT含量,調節(jié)血清中的GLU、LDL-C含量,提高TP、TC和HDL-C含量,但對LYM、ALB、GLB、和TG的影響不明顯。飼料中添加0.5%的延胡索酸能長期改善熱應激肉雞血常規(guī)和血清生化指標,但生效較慢;飼料中添加1.5%延胡索酸能在早期快速改善熱應激肉雞血常規(guī)和血清生化指標,但效果持續(xù)時間較短。