楊文杰，韋一言，汪 雨

（成都錦欣中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，四川 成都 610066）

中藥丹參是唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根和根莖[1]。丹參具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰之功效，常被臨床上用于治療心腦血管疾病[2]。目前，國(guó)內(nèi)外的學(xué)者已從丹參中發(fā)現(xiàn)了100 多種化學(xué)成分, 且其中尚有部分有待于進(jìn)一步分離、鑒定的化學(xué)成分[3]。丹參中的主要活性成分可分為兩大類，一是脂溶性的丹參酮類化合物，二是水溶性的丹參酚酸類化合物（多為鄰苯二羥基類化合物）[4-5]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，丹參酚酸B 具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、改善血液循環(huán)等作用。Xu 等[6]研究表明，丹參酮Ⅰ對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)肺腺腫瘤的形成具有明顯的抑制作用，而隱丹參酮能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及侵襲，進(jìn)而可發(fā)揮抗腫瘤的作用[7-8]。河南裕丹參的品質(zhì)優(yōu)良，是“中國(guó)名牌產(chǎn)品”之一。研究發(fā)現(xiàn)，裕丹參中丹參酮類成分和丹參酚酸B 的含量遠(yuǎn)高于藥典中規(guī)定的丹參中此類成分的含量[9]。本文主要是測(cè)定并分析裕丹參中活性成分的含量。

1 儀器和試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

UV-2550 紫外- 可見分光光度計(jì)（由島津企業(yè)管理有限公司制造），JBIT5374-1991 電子分析天平（由上海奧豪斯儀器有限公司制造），DJ-500J 亞太電子天平（由亞太計(jì)量?jī)x器有限公司制造），0.22 μm 和0.45 μm 的微孔濾膜（由津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)），RE-52A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（由上海亞榮儀器廠制造），KQ-250DE 型數(shù)控超聲清洗器（由昆山市超聲儀器有限公司制造），JHBE-50 閃式提取器（由北京金剛科技發(fā)展有限公司制造），電熱恒溫水浴鍋（由北京永明醫(yī)療儀器有限公司制造），200 μl 和1000μl 的移液器〔由芬蘭百得實(shí)驗(yàn)室儀器（中國(guó)）有限公司制造〕。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

甲醇（由天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司生產(chǎn)），乙醇（由新鄉(xiāng)三偉消毒制劑有限公司生產(chǎn)），丹參酮ⅡA。

2 方法與結(jié)果

2.1 裕丹參總浸膏的制備

稱取粉碎后的裕丹參300 g，加入10 倍量濃度為75%的乙醇浸泡1 h。采用閃式提取（簡(jiǎn)稱閃提）法對(duì)藥材進(jìn)行提取，第一次閃提3 min，靜置15 min 后進(jìn)行第二次閃提（共3 min），之后用10 倍量濃度為75%的乙醇對(duì)藥材進(jìn)行第三次閃提（共3 min）。將三次閃提得到的濾液合在一起。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在65℃下對(duì)濾液進(jìn)行旋干濃縮，將濃縮物轉(zhuǎn)移至坩堝中，在水浴鍋上（溫度為55℃）蒸干，得到裕丹參總膏138.4 g，得膏率為46.1%。

2.2 裕丹參中總丹參酮含量的測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 稱取2 mg 的丹參酮ⅡA，用甲醇進(jìn)行溶解，然后在25 ml 的容量瓶中定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為丹參酮ⅡA 對(duì)照品溶液。

2.2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 吸取2.5 ml 的丹參酮ⅡA 對(duì)照品溶液，采用紫外- 可見分光光度法在200 ～800 nm 的波段對(duì)丹參酮ⅡA 對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外光掃描。掃描的結(jié)果見圖1。通過對(duì)圖1 進(jìn)行分析可知，270 nm 的波長(zhǎng)為最大吸收波長(zhǎng)，即為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 丹參酮ⅡA 對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜圖

2.2.3 樣品溶液的制備 稱取丹參總浸膏5 mg，以甲醇為溶劑在25 ml 的容量瓶中定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為樣品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別用25 倍、21 倍、17 倍、13 倍、9 倍和5 倍的甲醇對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行稀釋，將其濃度稀釋為1.63 μg/ml、1.94 μg/ml、2.40 μg/ml、3.14 μg/ml、4.53 μg/ml 和8.16 μg/ml。然后采用紫外- 可見分光光度法依次在270 nm 的波長(zhǎng)下測(cè)定各對(duì)照品溶液的吸光度值。測(cè)定的結(jié)果顯示，濃度為1.63 μg/ml、1.94 μg/ml、2.40 μg/ml、3.14 μg/ml、4.53 μg/ml 和8.16 μg/ml 對(duì)照品溶液對(duì)應(yīng)的吸光度值分別為0.272、0.31、0.388、0.502、0.669和1.18。以丹參酮ⅡA 的濃度（C）為自變量，以吸光度值（A）為因變量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到以下線性回歸方程：A=0.1384C+0.05167，r=0.9993。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取2.4 μg/ml 的丹參酮ⅡA 對(duì)照品溶液，采用紫外- 可見分光光度法在270 nm 的波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度值，共重復(fù)檢測(cè)5 次。檢測(cè)的結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA 對(duì)照品溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.5%。這一結(jié)果表明該檢測(cè)方法的精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按2.2.3 項(xiàng)下的方法將5 份裕丹參總浸膏制備成樣品溶液。對(duì)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后采用紫外-可見分光光度法在270 nm 的波長(zhǎng)下依次測(cè)定各樣品溶液的吸光度值。檢測(cè)的結(jié)果顯示，5 份樣品溶液的吸光度值分別為0.726、0.724、0.727、0.726 和0.728，樣品溶液的RSD為0.21%。這一結(jié)果表明該檢測(cè)方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取2.4 μg/ml 的樣品溶液，每隔15 min采用紫外- 可見分光光度法在270 nm 的波長(zhǎng)下檢測(cè)一次樣品溶液的吸光度值，共檢測(cè)6 次。對(duì)樣品溶液進(jìn)行6 次檢測(cè)的結(jié)果顯示，其吸光度值分別為0.387、0.385、0.388、0.389、0.382 和0.387，樣品溶液的RSD 為0.49%。這一結(jié)果表明樣品溶液在90 min 內(nèi)的性質(zhì)穩(wěn)定。

2.2.8 不同年份裕丹參中總丹參酮含量的測(cè)定結(jié)果 分別稱取3 份不同年份（2018 年和2016 年）的裕丹參制備成裕丹參總浸膏，再按照2.2.3 項(xiàng)下的方法制備成樣品溶液。對(duì)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在270 nm 的波長(zhǎng)下依次檢測(cè)各樣品溶液的吸光度值。檢測(cè)的結(jié)果顯示，2018 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.79%，2016 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.26%。詳見表1。

表1 不同年份裕丹參中總丹參酮含量的測(cè)定結(jié)果

2.3 裕丹參中丹參總酚酸含量的測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 稱取5 mg 的丹參酚酸B 標(biāo)準(zhǔn)品，在25 ml 的容量瓶中用60% 的甲醇定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為丹參酚酸B 對(duì)照品溶液。

2.3.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 吸取2.5 ml 的丹參酚酸B 對(duì)照品溶液，對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在200 ～800 nm 的波段對(duì)丹參酚酸B 對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外光掃描。掃描的結(jié)果見圖2。通過對(duì)圖2 進(jìn)行分析可知，286 nm 波長(zhǎng)為最大吸收波長(zhǎng)，即為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖2 丹參酚酸B 對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜圖

2.3.3 樣品溶液的制備 稱取丹參總浸膏5 mg，以60%的甲醇為溶劑在25 ml 的容量瓶中定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為樣品溶液。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密量取0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.6 ml 和3.2 ml 的丹參酚酸B 對(duì)照品溶液，將其分別置于10 ml 的容量瓶中，并以60% 的甲醇為溶劑分別定容至刻度線，然后采用紫外- 可見分光光度法依次在286 nm的波長(zhǎng)下測(cè)定各丹參酚酸B 對(duì)照品溶液的吸光度值。檢測(cè)的結(jié)果顯示，0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.6 ml 和3.2 ml 的丹參酚酸B 對(duì)照品溶液對(duì)應(yīng)的吸光度值分別為0.036、0.065、0.123、0.237、0.477 和0.93。以丹參酚酸B 濃度（C）為自變量，以吸光度值（A）為因變量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到以下線性回歸方程：A=0.01445C+0.00787，r=0.9998。

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取16 μg/ml 的丹參酚酸B 對(duì)照品溶液，采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長(zhǎng)下檢測(cè)其吸光度值，共重復(fù)檢測(cè)5 次。檢測(cè)的結(jié)果顯示，丹參酚酸B 對(duì)照品溶液的RSD 為0.81%。這一結(jié)果表明該檢測(cè)方法的精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按2.2.3 項(xiàng)下的方法制備5 份樣品溶液，對(duì)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長(zhǎng)下依次檢測(cè)各樣品溶液的吸光度值。測(cè)得的結(jié)果是，5 份樣品溶液的吸光度值分別為0.434、0.436、0.437、0.433、0.431 和0.550，樣品溶液的RSD 為0.55%。這一結(jié)果表明該檢測(cè)方法的重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取32 μg/ml 的樣品溶液，每隔15 min采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長(zhǎng)下檢測(cè)一次樣品溶液的吸光度值，共檢測(cè)6 次。對(duì)樣品溶液進(jìn)行6 次檢測(cè)的結(jié)果顯示，其吸光度值分別為0.477、0.479、0.475、0.476、0.474 和0.471，樣品溶液的RSD 為0.42%。這一結(jié)果表明樣品溶液在90 min 內(nèi)的性質(zhì)穩(wěn)定。

2.3.8 不同年份裕丹參中丹參總酚酸含量的測(cè)定結(jié)果 分別稱取3 份不同年份（2018 年和2016 年）的裕丹參制備成裕丹參總浸膏，再按照2.2.3 項(xiàng)下的方法制備成樣品溶液。對(duì)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長(zhǎng)下依次檢測(cè)各樣品溶液的吸光度值。檢測(cè)的結(jié)果顯示，2018 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為37.9%，2016 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為34.7%。詳見表2。

表2 不同年份裕丹參中丹參總酚酸含量的測(cè)定結(jié)果

3 討論

2015 版《中國(guó)藥典》中規(guī)定丹參中丹參酮類的總量不得低于0.25%。本研究的結(jié)果顯示，2018 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.79%，2016 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.26%；2018 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為37.9%，2016 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為34.7%。由此可見，河南裕丹參中丹參酮類成分的含量遠(yuǎn)高于《中國(guó)藥典》中規(guī)定的丹參中丹參酮類成分的含量。翟宏宇等[10-11]對(duì)產(chǎn)自河南、山東、四川、安徽、甘肅、江蘇、河北、山西等地的丹參中活性成分的含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，河南所產(chǎn)丹參中活性成分的含量最高。

綜上所述，河南裕丹參中總丹參酮和丹參總酚酸的含量較高，其品質(zhì)優(yōu)良。河南裕丹參中總丹參酮和丹參總酚酸的含量會(huì)隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng)而減少。