朱紅芹 林紅

獻血者血液中的意外抗體可導(dǎo)致獻血者血型鑒定困難、醫(yī)院交叉配血不合，甚至可引起溶血性輸血反應(yīng)?！度统煞盅褂谩罚╓S/T 623-2018）中規(guī)定血漿及冷沉淀凝血因子的輸注原則之一為獻血者意外抗體篩查陰性可直接進行ABO相容性輸注。意外抗體篩查工作是在血站進行還是在醫(yī)院進行，并未做出明確規(guī)定?，F(xiàn)將近3年來本中心無償獻血者意外抗體檢出、反應(yīng)強度和特異性等進行分析，研究制定獻血者意外抗體篩查策略，現(xiàn)報告如下。

材料與方法

1 研究對象 2017年01月～2019年12月本中心捐獻血液的18～60周歲無償獻血者作為研究對象，共201741人捐獻血液，血液標(biāo)本294321份。

2 儀器與試劑 伽利略Galileo NEO全自動血型儀（美國Medson公司），光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)，卡式孵育箱（瑞士DiaMed公司）、卡式離心機（瑞士DiaMed公司）?？?A、抗-B（美國Immucor公司、長春博德生物技術(shù)有限公司、上海血液生物醫(yī)藥有限公司）、抗-AB(荷蘭Sanquin公司)、ABO試劑紅細胞（美國Immucor公司、上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；抗-D (美國Immucor公司、上海潤普生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司、美國BioRad公司)、抗-C、抗-E(英國Millipore公司)、D2(荷蘭Sanquin公司)、D3(美國Immucor公司)、D4（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；篩選細胞、國產(chǎn)譜細胞、抗-M、抗-N、抗-P1、抗-H、抗-IgG、C3d（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；進口譜細胞（美國Medson公司、荷蘭Sanquin公司）；微柱凝膠卡（西班牙Diagnostic Grifols公司、瑞士DiaMed公司）等，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

3 方法

3.1 血型定型方法：使用伽利略全自動血型儀U型微板法進行ABO血型正、反定型（加O型標(biāo)準(zhǔn)紅細胞）、RhD定型。

3.2 意外抗體確認(rèn)和抗體特異性鑒定方法：確認(rèn)RhD陰性、ABO正反定型不符、O細胞凝集及醫(yī)院反饋有意外抗體的血液標(biāo)本，使用篩選細胞和/或譜細胞試管法鹽水立即離心（IS）、4℃增強、37℃孵育、間接抗球蛋白試驗（IAT）確認(rèn)及鑒定。對檢出特異性意外抗體的紅細胞進行抗原確認(rèn)，通過自身對照排除自身抗體存在。

4 統(tǒng)計學(xué)處理 方法應(yīng)用SPSS 23. 0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 不同性別意外抗體的檢出率比較 2017～2019年共有201741人次（重復(fù)獻血多次只算1人次）獻血，587人檢出意外抗體，檢出率0.29%。男性獻血者意外抗體檢出率為0.22%，與女性獻血者0.40%相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=48.325，P＜0.05）。RhD陰性獻血總?cè)藬?shù)1272人，檢出意外抗體20人，檢出率1.57%；同樣地，女性意外抗體檢出率（3.16%）高于男性獻血者的0.52%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=13.659，P＜0.05），見表 1。

表1 總獻血人群及RhD陰性獻血人群意外抗體的檢出率統(tǒng)計（人）

2 不同年齡段獻血者意外抗體的檢測率比較2017～2019年共采集294321人次獻血者血液，共檢出意外抗體623例次，檢出率0.21%，見表2。其中年齡小于25歲年輕獻血者意外抗體檢出率最高（0.27%），超過56歲年長獻血者的意外抗體檢出率最低，不同年齡組獻血者意外抗體檢出率比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=40.012，P＜0.05）。

表2 不同年齡段獻血者的意外抗體檢出情況（人次）

表3 意外抗體特異性及反應(yīng)強度統(tǒng)計（例次）

3 抗體特異性及反應(yīng)強度分析 對檢出的623例意外抗體的特異性及反應(yīng)強度進行統(tǒng)計，見表3。檢出的623例意外抗體中，自身抗體2例，同種抗體375例，包括ABO血型系統(tǒng)11例，H血型系統(tǒng)1例，Rh血型系統(tǒng)18例，MNS血型系統(tǒng)115例，P血型系統(tǒng)205例和Lewis血型系統(tǒng)25例。其中，P、MNS和Lewis血型系統(tǒng)共計占全部檢出的同種抗體的92.00%（345/375）。另外有246例意外抗體未鑒定出特異性，并且反應(yīng)強度為1+以下比例為66.26%（163/246）。

討 論

獻血者抗體篩查的必要性一直是有爭議的話題。江蘇省血液中心一直對全部RhD陰性獻血者標(biāo)本進行抗體篩查，并從2012年開始使用全自動血型儀進行ABO、RhD定型，反定型時增加O型細胞，增加了意外抗體的檢出幾率。我們對近3年來檢出的意外抗體進行了回顧性分析，發(fā)現(xiàn)本地區(qū)意外抗體在檢測頻率、特異性和實驗反應(yīng)強度方面均有不同于其它地區(qū)的特點。

按人統(tǒng)計檢出率為0.29%，按人次統(tǒng)計檢出率為0.21%，均高于文獻報道的漯河0. 07%[1]、南陽0.05%[2]、蘇州 0.084%[3]、安 陽 0.196%[4]、 低 于泰州0.37%[5]、廣州0.48%[6]。這可能與獻血人群的地域分布、遺傳多樣性、不同篩查方法等有關(guān)。從性別來看，女性獻血者意外抗體檢出率0.40%明顯高于男性獻血者檢出率0.22%，同樣地，RhD陰性女性獻血者意外抗體檢出率遠高于男性獻血者，這與泰州、廣州、石家莊[5-7]等地情況一致，女性意外抗體檢出率高于男性已成為共識。這種情況與女性自身產(chǎn)生紅細胞抗體的能力強于男性，妊娠增加免疫應(yīng)答有關(guān)[8]。因此，為了降低輸血反應(yīng)，有些國家女性獻血者的血漿不輸注給受血者[9]。

在檢出意外抗體的587名獻血者中有237名為長期堅持獻血的重復(fù)獻血者，僅有1次檢出意外抗體的重復(fù)獻血者為196人。每次獻血均被檢出抗體的獻血者有26人，其他重復(fù)獻血者不能每次均被檢出，可能與反應(yīng)強度低，O細胞凝集不明顯，篩查時全自動血型儀未判斷陽性有一定的關(guān)系，也可能與獻血者抗體的持續(xù)、消逝時間有關(guān)。除了抗-A1、抗-B，同一獻血者重復(fù)檢出的抗體特異性并不相同，由于抗體存在時間的差異，同時不同批次篩選細胞所攜帶的抗原種類也不相同，也是影響抗體是否檢出以及特異性不一致的另一個原因，限制了對獻血者抗體持續(xù)、消逝時間的探究。而有研究數(shù)據(jù)顯示，在確定的最常見特異性中，發(fā)現(xiàn)抗-D最持久，而抗-M最短暫[10]。

從表2不同年齡段獻血者的意外抗體檢出情況分析，18～25歲人群的檢出率最高，56～60歲人群檢出率最低，這與文獻報道漯河地區(qū)[1]、周口地區(qū)[11]檢出率隨年齡增長而升高不一致，與海南地區(qū)報道的檢出率相一致[12]。這可能與篩查方法有關(guān)，雖然統(tǒng)計了醫(yī)院反饋的意外抗體陽性樣本，但單采血小板ABO同型輸注不進行ABO配型，有可能存在意外抗體未被發(fā)現(xiàn)；也可能與本中心獻血者人群以青年18～35歲為主，導(dǎo)致這個年齡段檢出率增高；也可能與統(tǒng)計方法有關(guān)，重復(fù)檢出者多集中在18～35歲，因這部分獻血者在不同年齡獻血，未進行扣除。

對抗體的特異性進行分析，表3顯示檢出Rh血型系統(tǒng)抗體18例，反應(yīng)強度2＋以上比例為77.18%，其中17例為女性。紅細胞上Rh復(fù)合物存在豐富的抗原表位，免疫原性僅次于ABO系統(tǒng)，Rh抗原強度為D＞E＞C＞c＞e。本中心對所有確認(rèn)RhD陰性獻血者，均須使用篩選細胞篩查意外抗體，如篩查陽性，須對紅細胞進行兩次洗滌處理，才能發(fā)往醫(yī)院供患者使用。

對紅細胞上A/B抗原水平明顯低于常見表達水平（如A3或Ax）的樣本采用吸收放散實驗方法確認(rèn)，檢出ABO血型系統(tǒng)抗體11例。檢出1例類孟買型，該獻血者正反定型不符，與抗-H試劑不凝集，經(jīng)意外抗體篩查和驗證檢出抗-H抗體，經(jīng)吸收放散試驗未檢出B抗原，鑒定Lewis血型為Le（a-b+），PCR-SSP分析，基因型為B101/O02，判斷該獻血者為Bmh類孟買血型。類孟買血型較為罕見，國內(nèi)相關(guān)報道也以個案為主。檢出1例抗-Mur，反應(yīng)較弱，4℃增強試驗才能檢出，抗-Mur能夠引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血?。℉DN），被認(rèn)為是有臨床意義抗體。

抗-P1一般為冷抗體，血凝反應(yīng)很弱，大部分P2均有抗-P1[13]，本調(diào)查也顯示確定特異性的各類抗體中，抗-P1中反應(yīng)強度≤1+，占比最大（38.05%），罕見抗-P1引起溶血性輸血反應(yīng)和HDN的報道。本調(diào)查中Lewis系統(tǒng)以抗-Leb為主（90.9%），多為冷抗體，37℃沒有臨床意義。偶見Lewis系統(tǒng)抗體在37℃有活性且引起溶血性輸血反應(yīng)的報道[14]。間接抗球蛋白試驗陽性的抗-M引起HDN[15]。因此，對這部分抗體以及未確定特異性的抗體需要進行37℃間接抗球蛋白試驗?？?M、抗-P1、Lewis抗體及未鑒定出特異性共計590例，其中220例間接抗球蛋白試驗陽性，對這部分37℃反應(yīng)的抗體需要引起關(guān)注。

醫(yī)院反饋的交叉配血不合血液均為RhD陽性血液共計24例，經(jīng)鑒定5例IgG型抗體：抗-E，抗-Ce，IgM型抗體中14例具有37℃活性。分析3種途徑數(shù)據(jù)提示，導(dǎo)致反定型O細胞凝集的意外抗體主要為鹽水反應(yīng)性抗體，如抗-M、抗-P1、抗-Leb，結(jié)合醫(yī)院反饋的均為RhD陽性血液，如用反定型O細胞作為意外抗體的篩查方法容易遺漏一部分具有臨床價值的抗體，存在局限性。有報道木瓜酶法[16]、單特異性的抗人球蛋白試劑[17]、適用于血型儀的Capture-R法[18]，可增加IgG型抗體的檢出率，同時避免檢出臨床意義不大的IgM型抗體。

《全血及成分血質(zhì)量要求》沒有明確規(guī)定血液中不能含有意外抗體，而部分醫(yī)院參照《全血和成分血使用》對患者使用的血漿及冷沉淀凝血因子進行意外抗體篩查。為了保障患者用血安全，IgG型抗體和一部分37℃反應(yīng)具有臨床意義的IgM型抗體均有檢出的必要性。另一方面，因同一獻血者的血漿和冷沉淀凝血因子同時發(fā)到同一醫(yī)院的概率極低，醫(yī)院如對血漿及冷沉淀凝血因子全部進行篩查，必將導(dǎo)致同一獻血者的血液被重復(fù)篩查。

我國血站提供臨床醫(yī)院的血液制劑未區(qū)分性別，因此需要考慮對所有獻血者血液進行意外抗體篩查，尤其是女性獻血者的血液。使用篩選細胞進行意外抗體篩查及譜細胞進行確認(rèn)，費用較高，為避免血站和醫(yī)院重復(fù)進行意外抗體篩查，增加患者負(fù)擔(dān)，建議由血站對獻血者血液標(biāo)本進行意外抗體篩查和確認(rèn)，并對意外抗體篩查和確認(rèn)方法進行驗證和遴選，以提高具有臨床意義抗體的檢出率。另一方面，可參照已經(jīng)成功開展的傳染病標(biāo)志物篩查反應(yīng)性獻血者歸隊方案，屏蔽篩查出的具有臨床意義意外抗體的獻血者，在一定的屏蔽期后，依據(jù)擬捐獻血液品種，確定篩查節(jié)點。如捐獻單采血小板及血漿，需先篩查后采集；捐獻全血可先采集，單獨篩查。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突