王軍華 趙雙枝 陳相艷 張彥昊 辛 雪 張 翔 陳蕾蕾

(山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所/山東省農(nóng)產(chǎn)品精深加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部新食品資源加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250100)

隨著社會(huì)的進(jìn)步和生活水平的提高，人們對(duì)食品安全提出了更高的要求，然而，目前食品工業(yè)中常用的防腐劑主要為化學(xué)防腐劑，因其濫用引發(fā)的食物中毒事件頻發(fā)，也使得尋找安全、高效、綠色、低毒的生物防腐保鮮劑已成為近幾年的研究熱點(diǎn)[1]。殼聚糖是一種天然高分子聚合物，除具有廣譜抑菌性，還具有良好的生物相容性、低毒性、低抗敏性及可降解性等[2-3]。研究表明，采用殼聚糖處理采后果蔬，能在抑制病原菌侵染果實(shí)的同時(shí)，誘導(dǎo)果蔬產(chǎn)生抗性[4]，有效提高櫻桃番茄[5-6]、砂糖橘[7]、草莓[8]、臍橙[9]、蘋(píng)果梨[10]、冬棗[11]等果實(shí)的貯藏品質(zhì)；殼聚糖處理番茄幼苗可以提高番茄幼苗的光合利用率以及保護(hù)酶活性，從而提高番茄幼苗對(duì)灰霉病的抗性[12]。此外，殼聚糖涂膜處理可抑制魚(yú)類(lèi)等水產(chǎn)品的菌落增長(zhǎng)[13]。表明殼聚糖具有發(fā)展成為高效生物防腐保鮮劑的潛力。

本試驗(yàn)前期研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，市售殼聚糖經(jīng)酶解后，酶解產(chǎn)物對(duì)真菌的抑制活性顯著提高。而且有研究顯示，殼聚糖經(jīng)酶解后得到低分子量殼聚糖，其抑菌活性顯著提高[14]。因此，本試驗(yàn)擬對(duì)殼聚糖酶解產(chǎn)物的抑制真菌活性進(jìn)行研究，旨在為推進(jìn)殼聚糖在防腐保鮮方面的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

殼聚糖，上海生工生物工程股份有限公司；殼聚糖酶，自制，由菌株ncps116 的發(fā)酵上清液，經(jīng)硫酸銨沉淀、50 mmol.L-1磷酸鹽緩沖溶液(pH 值7．5)復(fù)溶并透析，酶的發(fā)酵、制備、理化性質(zhì)以及活力測(cè)定按文獻(xiàn)[15]所述；氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品，上海源葉生物科技有限公司；1 mg.mL-1碘化丙啶(propidium iodide，PI)溶液，大連美侖生物技術(shù)有限公司；馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(potato dextrose agar，PDA)，青島海博生物科技有限公司；其他化學(xué)試劑均為市售分析純。

1.2 主要儀器與設(shè)備

OLYMPUS IX71 倒置熒光顯微鏡，日本奧林巴斯株式會(huì)社；ZEISS Sigma 300 場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡，德國(guó)卡爾.蔡司股份公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1．3．1 殼聚糖酶解產(chǎn)物制備 將殼聚糖溶于1%冰醋酸中，制成2%(w/v)的殼聚糖溶液，按5 U.g-1的比例加入殼聚糖酶溶液，在50℃、180 r.min-1條件下進(jìn)行酶解試驗(yàn)，收集不同酶解時(shí)間(0、0．5、1、1．5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 和24 h)西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀真菌的酶解產(chǎn)物，沸水浴15 min 滅活，10 000 r.min-1離心2 min 后，取上清液凍干得殼聚糖酶解產(chǎn)物的凍干粉末，備用。

1．3．2 殼聚糖酶解產(chǎn)物中還原糖濃度測(cè)定 參考文獻(xiàn)[16]，采用3，5-二硝基水楊酸(3，5-dinitrosalicylic acid， DNS)法測(cè)定。準(zhǔn)確稱(chēng)取氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品，加蒸餾水配制成濃度分別為0．065、0．130、0．260、0．520、1．040、2．080、3．320、4．150、6．640 mg.mL-1的氨基葡萄糖溶液。分別吸取4 mL 氨基葡萄糖溶液，以蒸餾水為空白，加入3 mL DNS 試劑，沸水浴加熱5 min，冷卻后定容至10 mL，搖勻后測(cè)定540 nm 波長(zhǎng)處的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。取凍干粉末，加蒸餾水配制成1%的待測(cè)溶液，取4 mL 待測(cè)溶液，按照上述方法定容后，于11 000 r.min-1離心2 min，取上清液測(cè)定540 nm 波長(zhǎng)處的吸光度值，以蒸餾水為空白，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中的還原糖濃度。

1．3．3 殼聚糖酶解產(chǎn)物真菌抑制試驗(yàn) 取病原菌菌塊，接種于PDA 平板，28℃培養(yǎng)3 d 后，從病原菌菌絲邊緣制取直徑5 mm 菌塊，用無(wú)菌刀切碎后混懸于400 μL無(wú)菌水中，取50 μL 菌懸液涂布于PDA 平板上(平板中含有30 μg.mL-1的氯霉素)。在平板上打孔，孔直徑9 mm，孔間距不小于4 cm，每個(gè)孔中加入150 μL 待測(cè)樣品，28℃培養(yǎng)48 h，采用十字交叉法測(cè)定抑菌圈直徑。

1．3．4 pH 值對(duì)殼聚糖酶解產(chǎn)物抑菌性能的影響 取酶解時(shí)間為6 h 的酶解液凍干粉末加蒸餾水溶解至濃度為1%，調(diào)節(jié)pH 值分別為4．0、4．7、5．4、6．0、6．5 和7．0，以西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌為指示菌按照上述真菌抑制試驗(yàn)培養(yǎng)48 h，測(cè)定抑菌圈直徑，以相應(yīng)pH 值的0．2 mol.L-1醋酸-醋酸鈉緩沖溶液為空白對(duì)照。

1．3．5 殼聚糖酶解產(chǎn)物對(duì)孢子萌發(fā)的影響 制備新鮮的西瓜枯萎病菌孢子懸液，無(wú)菌水調(diào)整孢子個(gè)數(shù)為106個(gè).mL-1。吸取500 μL 孢子懸液至10 mL 殼聚糖6 h 酶解液(含濃度2%葡萄糖)中，酶解液濃度分別為0．1%和1．0%，28℃、150 r.min-1條件下避光培養(yǎng)12 h，11 000 r.min-1離心10 min 后收集孢子，蒸餾水洗滌2 次，加入990 μL 蒸餾水重懸孢子，加入10 μL PI 溶液，混勻后在黑暗中靜置15 min，在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察、拍照。

1．3．6 掃描電鏡觀(guān)察殼聚糖酶解產(chǎn)物對(duì)真菌菌絲的影響 取西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌抑菌圈邊界處的菌絲置于2%預(yù)冷戊二醛中，于4℃條件下固定，樣品的脫水、干燥和鍍膜由山東微亞生物技術(shù)有限公司完成，在掃描電子顯微鏡下觀(guān)察、拍照。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2010 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析；使用SPSS 22．0 軟件的Duncan 法進(jìn)行顯著性分析，P＜0．05為差異顯著，P＞0．05 為差異不顯著，方差分析結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±SD)表示。

此外，每一中不同的用地類(lèi)型有著不同的生境適宜性，對(duì)受生態(tài)威脅的敏感程度也不同，綜合眾多研究成果[26-27]的基礎(chǔ)上，結(jié)合研究區(qū)域生態(tài)環(huán)境的具體情況，將土地利用類(lèi)型分為人工地類(lèi)、自然地類(lèi)兩大類(lèi)，分別賦值0（人工）、1（自然），從人工地類(lèi)到自然地類(lèi)，敏感性由低到高，其取值范圍為0-1，0表示不敏感，1表示高度敏感性。本文對(duì)應(yīng)的地類(lèi)對(duì)各威脅因子的敏感度具體如表2所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 殼聚糖酶解產(chǎn)物對(duì)病原真菌的抑制活性

圖1 不同酶解時(shí)間的殼聚糖酶解產(chǎn)物(1%)對(duì)棉花黃萎病菌的抑制活性Fig.1 The inhibitory activities of chitosan hydrolysates at a concentration of 1%at different digestion time toVerticillium dahliae

使用殼聚糖酶對(duì)市售殼聚糖進(jìn)行酶解，以棉花黃萎病菌為病原指示菌，抑菌結(jié)果顯示(圖1)，整個(gè)酶解期間，抑菌活性呈先升高后降低的趨勢(shì)。酶解0．5 h時(shí)，抑菌活性顯著升高，酶解0．5 ～2 h 期間，抑菌活性無(wú)顯著變化，之后呈線(xiàn)性提高，在酶解6 h 時(shí)達(dá)到最大，之后緩慢降低；酶解12 h 內(nèi)，酶解產(chǎn)物對(duì)棉花黃萎病菌的抑制活性均較未經(jīng)酶解的殼聚糖顯著增強(qiáng)，直至24 h 時(shí)，酶解較為完全，抑菌活性低于未經(jīng)酶解的殼聚糖。殼聚糖酶能夠?qū)Ｒ淮呋鈿ぞ厶侵械奶擒真I，生成低分子量殼聚糖，酶解程度不同，其抑菌活性存在差異，然而殼聚糖抑制真菌活性與分子量相關(guān)[17]，分子量降低減少了殼聚糖分子間作用，有利于殼聚糖與細(xì)胞壁的脂質(zhì)雙層和陰離子脂質(zhì)的靜電和疏水締合，增強(qiáng)殼聚糖與真菌細(xì)胞膜的結(jié)合[18]。

為深入驗(yàn)證殼聚糖酶解產(chǎn)物對(duì)植物病原菌的抑制活性均有改善，測(cè)定抑菌活性提高最顯著的6 h 酶解產(chǎn)物對(duì)3 種病原真菌的最低抑菌活性，結(jié)果顯示(表1)，市售殼聚糖對(duì)3 種病原菌的最低抑菌濃度在0．500% ～1．000%，而6 h酶解產(chǎn)物為0．125% ～0．250%，最低抑菌活性提高了4～8 倍。

表1 殼聚糖及酶解產(chǎn)物的抑菌效果Table 1 The inhibitory activities of the chitosan and chitosan hydrolysate

2.2 殼聚糖酶解產(chǎn)物中還原糖濃度分析

殼聚糖經(jīng)酶解后，暴露出還原端，分子內(nèi)的自由醛基與DNS 發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成紅棕色的3-氨基-5-硝基水楊酸[19]。經(jīng)測(cè)定氨基葡萄糖濃度在0．13 ～2．00 mg.mL-1范圍內(nèi)，OD540(y)與濃度(x)呈線(xiàn)性相關(guān)(y＝1．264 7x- 0．093 9，r＝0．997 6)，還原糖濃度高低可反映殼聚糖的酶解水平。

由圖2 可知，隨著酶解的進(jìn)行，酶解產(chǎn)物中的還原糖濃度總體逐漸增加，酶解0．5 h 時(shí)還原糖濃度為44．24 μg.mL-1，與未經(jīng)酶解的市售殼聚糖相比，其抑菌活性顯著提高(圖1)，表明用酶解反應(yīng)提高市售殼聚糖的抑菌活性是可行的；隨后還原糖濃度呈增加趨勢(shì)，至酶解9 h 時(shí)達(dá)到571．79 μg.mL-1，酶解9 ～12 h期間，還原糖濃度變化平穩(wěn)，酶解24 h 產(chǎn)物的還原糖濃度迅速增大為酶解12 h 產(chǎn)物的3 倍，表明酶解反應(yīng)一直在進(jìn)行。此外，酶解1 ～12 h 產(chǎn)物的抑菌活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，其中酶解6 h 產(chǎn)物的抑菌活性最強(qiáng)，此時(shí)還原糖濃度為383．34 μg.mL-1，與酶解0～1 h 產(chǎn)物中的還原糖濃度存在顯著差異(P＜0．05)，與酶解12 h 內(nèi)其他產(chǎn)物中的還原糖濃度無(wú)顯著差異(P＞0．05)；而酶解24 h 產(chǎn)物的還原糖濃度較酶解6 h產(chǎn)物顯著提高，但其抑菌活性顯著降低(P＜0．05)。同時(shí)，DNS 法測(cè)定還原糖濃度的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，氧化還原過(guò)程中，酶解0～12 h 的酶解產(chǎn)物中均有沉淀出現(xiàn)，而酶解24 h 的產(chǎn)物無(wú)沉淀析出，表明此時(shí)已酶解充分，推測(cè)主要成分為溶解性較好的殼寡糖。而酶解24 h產(chǎn)物對(duì)棉花黃萎病菌的抑制活性顯著降低，甚至低于未經(jīng)酶解的殼聚糖，表明并非酶解越充分，抑制活性越好。因此，酶解過(guò)程中可通過(guò)控制還原糖濃度，并結(jié)合抑菌活性，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)酶解過(guò)程，以防酶解不足或過(guò)度水解，影響水解液的抑制真菌效果。

圖2 不同酶解時(shí)間殼聚糖酶解產(chǎn)物(1.0%)中的還原糖濃度Fig.2 The reducing sugar content of chitosan hydrolysates at a concentration of 1.0%at different digestion time

2.3 pH 值對(duì)殼聚糖酶解產(chǎn)物抑制真菌活性的影響

以活性提高最顯著的酶解6 h 產(chǎn)物為研究對(duì)象，考查pH 值對(duì)殼聚糖酶解產(chǎn)物抑制真菌活性的影響。由圖3 可知，pH 值在4～7 范圍內(nèi)(初始pH 值4．7)對(duì)病原真菌西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌都有抑制作用，但不同pH 條件下，抑菌活性存在顯著差異。當(dāng)pH 值＞5．4時(shí)，酶解6 h產(chǎn)物的抑菌圈直徑較初pH 值顯著減小，隨著pH 值的持續(xù)增加，抑菌圈發(fā)生不同程度的減小，當(dāng)pH 值達(dá)到7．0 時(shí)，抑菌圈直徑最小。目前普遍認(rèn)為，低pH 值條件下，殼聚糖氨基經(jīng)質(zhì)子化，所帶正電荷與細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)或磷脂相互作用增強(qiáng)，影響細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)[8，20]，質(zhì)子化殼聚糖也會(huì)進(jìn)入菌體胞內(nèi)，吸附結(jié)合部分帶負(fù)電的細(xì)胞質(zhì)，擾亂菌體細(xì)胞的正常生理代謝[21-22]；而當(dāng)pH 值持續(xù)升高，正電荷的比例降低，細(xì)胞膜表面結(jié)合作用以及細(xì)胞質(zhì)吸附作用就變差；此外，pH 值升高還導(dǎo)致殼聚糖酶解產(chǎn)物的溶解性變差[23]，最終導(dǎo)致抑菌活性降低。因此，在殼聚糖酶解產(chǎn)物應(yīng)用過(guò)程中，酸性條件有利于殼聚糖酶解產(chǎn)物質(zhì)子化，更有利于發(fā)揮其對(duì)真菌的抑制活性。也確有研究證實(shí)，殼聚糖水解液在酸性環(huán)境下對(duì)耐藥性大腸桿菌的抑制作用顯著[22]，馬海賓等[24]也發(fā)現(xiàn)低分子量殼聚糖在pH 值5．5～6．5 時(shí)抑制病原菌效果最佳。

圖3 不同pH 值下殼聚糖酶解6 h 產(chǎn)物(1.0%)對(duì)西瓜枯萎病菌的抑菌作用Fig.3 The inhibitory activities of chitosan hydrolysate at 6 h (1.0%)with different pH value to F. oxysporum f.sp. niveum

2.4 殼聚糖酶解產(chǎn)物對(duì)孢子的作用

Plascencia-Jatomea 等[25]研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖溶液會(huì)延遲黑曲霉孢子休眠期，影響孢子極化和芽管形成，并產(chǎn)生孢子聚集現(xiàn)象。為研究殼聚糖酶解產(chǎn)物是否也對(duì)真菌孢子有抑制作用，在熒光顯微鏡下觀(guān)察不同處理對(duì)孢子萌發(fā)的影響(圖4)，相較于未處理孢子，0．1%殼聚糖6 h 酶解產(chǎn)物處理的孢子萌發(fā)不受影響，但菌絲長(zhǎng)度明顯變短，生長(zhǎng)緩慢；而1%殼聚糖酶解6 h 產(chǎn)物處理的孢子形狀變長(zhǎng)，僅有少數(shù)伸出芽管。在熒光顯微鏡下，3 個(gè)試驗(yàn)組結(jié)果均為PI 陰性。PI 不能通過(guò)活細(xì)胞膜，卻能穿過(guò)破損的細(xì)胞膜，對(duì)死細(xì)胞進(jìn)行染色，這表明殼聚糖酶解產(chǎn)物僅能抑制孢子萌發(fā)，不能破壞孢子完整性。為驗(yàn)證這種抑制作用是否只是暫時(shí)的，進(jìn)而將1%殼聚糖酶解產(chǎn)物處理的孢子用蒸餾水洗滌2 次，蒸餾水重懸后，取50 μL 懸液涂布于PDA平板上。12 h 后，對(duì)照平板已布滿(mǎn)菌絲(圖5-A)，而處理過(guò)的平板無(wú)肉眼可見(jiàn)菌落出現(xiàn)(圖5-B)，直至48 h開(kāi)始出現(xiàn)較小的菌落，生長(zhǎng)緩慢(圖5-D)，7 d 后，菌落直徑增加，但菌落數(shù)沒(méi)有增加(未列圖)。這可能是由于酶解后低分子量的殼聚糖不可逆地結(jié)合到孢子表面，抑制了部分孢子的萌發(fā)；而對(duì)于已經(jīng)萌發(fā)的孢子，沒(méi)有足量的殼聚糖與之結(jié)合，菌絲的生長(zhǎng)不能完全被抑制[25-26]。

圖4 不同濃度殼聚糖6 h 酶解產(chǎn)物對(duì)西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌真菌孢子的作用Fig.4 The effect of chitosan hydrolysates at 6 hours with different concentration on spore germination with F. oxysporum as indicator

2.5 掃描電鏡觀(guān)察殼聚糖酶解產(chǎn)物對(duì)真菌菌絲的影響

圖5 殼聚糖6 h 酶解產(chǎn)物(1.0%)對(duì)西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌真菌孢子的作用Fig.5 The F. oxysporum spore germination on plate after being treated with chitosan hydrolysates at 6 hours (1.0%)

真菌抑菌試驗(yàn)中，0．1%～1．0%殼聚糖酶解6 h 產(chǎn)物均能抑制西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)(表1)，圖5-B 顯示0．1%殼聚糖酶解產(chǎn)物也能抑制孢子萌發(fā)生長(zhǎng)速度，但PI 陰性表明0．1%酶解產(chǎn)物并不能破壞孢子的膜通透性，也沒(méi)能破壞萌發(fā)菌絲的膜通透性。上文提及，質(zhì)子化殼聚糖不可逆的結(jié)合到孢子表面，抑制孢子萌發(fā)，而對(duì)于已萌發(fā)的菌絲，沒(méi)有酶解產(chǎn)物的結(jié)合，未觀(guān)察到對(duì)菌絲的破壞。為探究該酶解產(chǎn)物對(duì)菌絲的作用，采用掃描電鏡觀(guān)察1．0%殼聚糖酶解產(chǎn)物對(duì)菌絲的影響，結(jié)果顯示殼聚糖酶解產(chǎn)物處理過(guò)的菌絲，菌絲邊界不清，部分菌絲融合成一片(圖6-A)，表面褶皺、凹凸不平，菌絲斷裂，末端出現(xiàn)囊泡等畸形(圖6-B、C)。

3 討論

殼聚糖分子量與抑菌活性顯著相關(guān)[17]，但是活性最強(qiáng)的分子量范圍，仍存在爭(zhēng)議。酶解法降解殼聚糖具有高效、無(wú)污染、低成本等優(yōu)勢(shì)[27]，本研究采用自制殼聚糖酶進(jìn)行酶解，以降低市售殼聚糖分子量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著酶解進(jìn)行，酶解產(chǎn)物的抑菌活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。理論上，隨著酶解的進(jìn)行，分子量逐漸降低，說(shuō)明并非分子量越低，酶解產(chǎn)物對(duì)病原真菌的抑制活性越強(qiáng)，而是在酶解6 h 發(fā)生了轉(zhuǎn)折，這與楊冬芝等[28]的研究相似。楊冬芝等[28]關(guān)于殼聚糖的研究發(fā)現(xiàn)，隨著分子量的增加，抗菌活性先增強(qiáng)后降低，也出

圖6 1.0%殼聚糖6 h 酶解產(chǎn)物對(duì)西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌真菌菌絲的影響Fig.6 The effect of chitosan hydrolysates at 6 hours (1.0%) to the F. oxysporum hypha

現(xiàn)了一個(gè)分子量的拐點(diǎn)，但是抑菌活性差異并不顯著。而本試驗(yàn)與之不同的是酶解6 h 的殼聚糖酶解產(chǎn)物，對(duì)真菌的抑制活性較其他酶解時(shí)間的酶解產(chǎn)物差異顯著(P＜0．05)，除分子量的差異外，這個(gè)顯著差異也可能是源于殼聚糖酶解產(chǎn)物未經(jīng)純化，其組成為分子量不同的殼聚糖，成分復(fù)雜，對(duì)真菌的抑制作用為多種成分協(xié)同作用。

本研究進(jìn)行酶解反應(yīng)的pH 值為4．7，無(wú)需進(jìn)一步調(diào)節(jié)，后處理簡(jiǎn)單。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，酶解產(chǎn)物能長(zhǎng)期抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)，殼聚糖酶解產(chǎn)物處理過(guò)的菌絲發(fā)生斷裂，產(chǎn)生末端囊泡等畸變，初步證實(shí)殼聚糖酶解產(chǎn)物能明顯抑制病原真菌。此外，本研究還對(duì)殼聚糖酶解產(chǎn)物抑制真菌性質(zhì)進(jìn)行了初步探討，相較于純品殼聚糖，酶解0．5～12 h 產(chǎn)物對(duì)試驗(yàn)病原菌的抑制活性均顯著提高，后續(xù)研究會(huì)深入探討該酶解產(chǎn)物與市售各種分子量的殼聚糖在抑菌活性上是否存在差異，以促進(jìn)該酶解產(chǎn)物作為生物防腐保鮮劑的發(fā)展。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)使用自制的殼聚糖酶來(lái)酶解殼聚糖，其中酶解6 h 的產(chǎn)物對(duì)3 種病原真菌(棉花黃萎病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌)的最低抑菌活性較未酶解殼聚糖提高了4～8 倍，在pH 值4．0 ～4．7 時(shí)西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌抑菌活性最顯著；同時(shí)，酶解6 h 的殼聚糖產(chǎn)物能導(dǎo)致西瓜專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌真菌菌絲發(fā)生形態(tài)變化，造成菌絲斷裂、褶皺、菌絲末端囊泡等畸形生長(zhǎng)，并長(zhǎng)期抑制孢子生長(zhǎng)和菌絲伸長(zhǎng)，從而有效抑制真菌生長(zhǎng)。