陳永剛, 荊 丹, 黃 重, 張耀玲, 劉 勇, 陳 慷, 魏芳勤

(1.漢中市農(nóng)業(yè)科學研究所 陜西 漢中 723000；2.榆林市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心 陜西 榆林 719000)

前言

大球蓋菇又名皺球蓋菇，裴氏假黑傘等[1]。大球蓋菇肉質(zhì)嫩滑，口感佳，子實體含有豐富蛋白質(zhì)、礦質(zhì)元素、維生素、多糖等物質(zhì)[3]，營養(yǎng)非常豐富。據(jù)研究大球蓋菇具有防治動脈硬化，助消化，預防冠心病等多種功效[2]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)大球蓋菇菌絲即使在適宜的環(huán)境下依然生長較為緩慢，菌絲活力較弱，菌絲退化較快，而菌絲生長活性對后期子實體產(chǎn)量影響很大。本文對大球蓋菇菌絲生長適宜的環(huán)境條件及營養(yǎng)需求進行研究，旨在篩選出使大球蓋菇菌絲長勢較優(yōu)的條件，以求縮短制種時間，為其母種的培育和擴繁上提供參考依據(jù)，以期為高產(chǎn)質(zhì)優(yōu)低耗栽培提供科學基礎。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

供試野生大球蓋菇于2019年5月采自陜西省漢中市南鄭縣漣水鎮(zhèn)漣水村，通過組織分離留種，記為大球蓋菇1號菌株。

1.2 大球蓋菇菌絲培養(yǎng)基

基礎培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，蔗糖10 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂1 g，蛋白胨2 g，酵母粉2 g，瓊脂粉10 g，葡萄糖10 g，加水定容至1L, pH自然。

1.3 方法

1.3.1 碳源對菌絲生長的影響 為了研究碳源對大球蓋菇菌絲生長的影響，分別添加7種碳源于基礎培養(yǎng)基中，添加量為20 g·L-1，以添加量零為對照，各處理采用平板培養(yǎng)法，于25℃黑暗培養(yǎng)，采用十字交叉法測定菌落直徑。每個處理重復3次。

1.3.2 氮源對菌絲生長的影響 為了研究氮源對大球蓋菇菌絲生長影響，分別添加8種氮源于基礎培養(yǎng)基中，添加量2 g·L-1，以添加量零為對照。結(jié)果處理同1.3.1。

1.3.3 無機鹽離子對菌絲生長影響 在培養(yǎng)基中分別添加五種無機鹽，濃度均為0，0.5 g·L-1，1.0 g·L-1，1.5 g·L-1，2.0 g·L-1濃度梯度，以添加量零為對照，結(jié)果處理同1.3.1。

1.3.4 溫度對菌絲生長的影響 用基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)大球蓋菇菌絲，設置15℃，20℃，25℃，30℃四個溫度梯度，結(jié)果處理同1.3.1。

1.3.5 pH對菌絲生長的影響 用基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)大球蓋菇菌絲，分別設置pH為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0。結(jié)果處理同1.3.1。

1.3.6 碳氮比對絲生長的影響 用基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)，改變蛋白胨添加量配成碳氮比為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1的培養(yǎng)基，結(jié)果處理同1.3.1。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Micrsoft Excel 2013軟件作圖，用DPS軟件方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 碳源對菌絲生長的影響

大球蓋菇菌絲在分別添加7種碳源的培養(yǎng)基上均能生長，且菌絲潔白，邊緣呈圓形完整，但是菌絲的生長差異較為顯著。如表2-1所示，在葡萄糖中菌絲生長速度最快，果糖和蔗糖菌絲生長速度次之，這三種碳源均可促進菌絲生長更為粗壯。菌絲在添加有乳糖的培養(yǎng)基上生長最緩慢。乳糖、葡萄糖分別與其它碳源之間，菌絲生長速度差異達到了極顯著水平。而果糖、蔗糖之間差異性不顯著；通過比較充分說明大球蓋菇碳源需求范圍較為寬泛，在單糖、二糖和多糖上均能生長。綜合比較，說明大球蓋菇的最適碳源為葡萄糖，其次為蔗糖。(表1，菌絲生長速率后不同大、小寫字母表示在0.01和0.05水平上顯著?！?+++”表示菌絲致密、粗壯；“+++”表示菌絲濃密、粗壯；“++”表示菌絲較密、較壯；“+’’表示菌絲稀疏、纖弱，下同。)

表1 碳源對菌絲生長的影響

2.2 氮源對菌絲生長的影響

大球蓋菇菌絲在添加8種供試氮源的培養(yǎng)基中均邊緣整齊，色澤潔白，菌絲呈絨毛狀。如表2所示，在硝酸鈉培養(yǎng)基中菌絲生長速率小、菌落長勢最差，主要表現(xiàn)為菌絲活力弱，生長不致密，與其他處理間達到了極顯著水平；在蛋白胨中菌絲粗壯，生長速率最大，與其他處理間達到了顯著水平。苯丙氨酸、磷酸二氫銨和牛肉膏三種氮源，菌絲之間的長勢差異不明顯。綜合比較，蛋白胨是大球蓋菇菌絲生長的最適氮源。

表2 氮源對菌絲生長的影響

2.3 無機鹽離子對菌絲生長影響

由表3、4、5及圖1所示可知，菌絲在所有無機鹽培養(yǎng)基中均長勢良好，邊緣圓形完整。如下圖所示，菌絲生長速率曲線呈先上升后下降的趨勢，說明添加過多的無機鹽，會抑制菌絲的正常生長。在無機鹽濃度為0.5 g·L-1時，硫酸鎂對菌絲生長也有一定的促進作用，但是效果明顯低于硫酸鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈣和硫酸鉀。在培養(yǎng)基中添加0.5 g·L-1硫酸鉀時，大球蓋菇菌絲生長速度最大為2.59 mm·d-1，與其他無機鹽處理的菌絲生長差異達到極顯著水平；相比之下，大球蓋菇菌絲生長的最適無機鹽是硫酸鉀。

圖1 無機鹽濃度對大球蓋菇菌絲生長的影響

表3 Na2SO4和CaC12對菌絲生長影響

表4 K2SO4和MgSO4對菌絲生長影響

表5 KH2PO4對菌絲生長影響

2.4 溫度對菌絲生長的影響

大球蓋菇菌絲生長和子實體發(fā)育的整個過程中，溫度是一個重要環(huán)境因子。如表6及圖2所示，在15℃～30℃溫度范圍內(nèi)，大球蓋菇菌絲都是可以生長的，菌絲對溫度變化較為明顯敏感，結(jié)果表明15℃時菌絲長速度是最小的，15℃到30℃，菌絲生長速度呈增加后降低的趨勢，菌絲在溫度為25℃時生長速度達到最大，菌絲長勢最佳，菌絲潔白完整，與菌絲在其他溫度下的生長速度差異顯著，25℃時菌絲生長速度高于30℃，二者差異顯著。

表6 溫度對菌絲生長的影響

圖2 溫度對大球蓋菇菌絲生長的影響

2.5 pH值對菌絲生長的影響

試驗表明，培養(yǎng)基pH值對大球蓋菇菌絲生長影響較為顯著。pH為6.0～7.0時菌絲長勢達到最好，邊緣呈絨毛狀且整齊，差異極顯著；菌絲長速度在pH為7.0時達到最大，所以pH為6.0～7.0時最適大球蓋菇菌絲生長。

表7 pH對菌絲生長的影響

2.6 碳氮比對菌絲生長的影響

由表8可知，大球蓋菇菌絲對培養(yǎng)基中碳氮比變化對較為敏感，在試驗范圍內(nèi)，菌絲長勢在培養(yǎng)基中碳氮比為10：1時達到最佳，生長速度達到最大。

表8 碳氮比對菌絲生長的影響

3 討論

通過碳源試驗表明大球蓋菇可以利用的碳源很廣，在供試碳源范圍內(nèi)，篩選出大球蓋菇生長的最佳碳源為葡萄糖，其次為蔗糖；乳糖不適宜大球蓋菇生長。這與閆培生的研究結(jié)果一致[6]。張世敏和晶亮研究發(fā)現(xiàn)乳糖為大球蓋菇生長的最適宜碳源[5]；黃春燕研究發(fā)現(xiàn)最適宜大球蓋菇菌絲生長的碳源為蔗糖[4]。出現(xiàn)這樣的結(jié)果可能是所選基礎培養(yǎng)基成分和選取的碳源范圍有關。

在8種供試氮源中，大球蓋菇在添加蛋白胨的培養(yǎng)基中長勢最佳，菌絲粗壯，活力旺盛，其次是硫酸銨、牛肉膏和磷酸二氫銨。由于蛋白胨中含有多種有機氮源、無機氮源和生長因子，能提供多樣的營養(yǎng)元素以供菌絲生長；而氨基酸和無機氮源因其營養(yǎng)成分單一，難以滿足菌絲生長時對多重營養(yǎng)的需求，導致菌絲長勢較差。因此，大球蓋菇菌絲對無機氮源和氨基酸吸收利用情況較差，對有機氮源蛋白胨的吸收最好。這與閆培生[6]所得結(jié)果不同。不同碳氮比對菌絲生長影響較為明顯，碳氮比為 10:1時能滿足菌絲生長對碳氮營養(yǎng)的需求，菌絲長勢最佳。

在0.5 g·L-1濃度下，大球蓋菇菌絲生長的最佳無機鹽為硫酸鉀，其次為硫酸鈉。大球蓋菇菌絲在適宜濃度無機鹽培養(yǎng)環(huán)境中生長旺盛，而高濃度無機鹽會抑制菌絲生長。經(jīng)研究，菌絲在15℃～30℃培養(yǎng)條件下均能生長，大球蓋菇菌絲生長的最適宜溫度是25℃，最適pH為6.0～7.0，這與其他人的研究結(jié)果一致。