曹 斌，郭慧輝，張 拓，李惠民，惠選柱，李玉琴，馮鎖民**

(1.陜西醫(yī)藥控股集團山海丹藥業(yè)股份有限公司，陜西 西安 710075；2.西安醫(yī)學院 藥學院，陜西 西安 710021；3.商洛職業(yè)技術(shù)學院，陜西 商州 726000)

芪天扶正膠囊由黃芪、天冬、胡蘆巴、山茱萸、陳皮、女貞子等藥物組成，具有益氣滋陰，補腎固本的功效。臨床上與規(guī)范方案的抗腫瘤化學藥物配合，用于非小細胞肺癌屬氣陰兩虛，癥見神乏疲力，少氣懶言，口干咽燥，自汗盜汗，面色晄白，或咳嗽咯痰，或納呆，或痰中帶血等癥狀的輔助治療；同時也可減輕由化療藥物引起的免疫功能低下，以及白細胞減少及惡心、嘔吐、脫發(fā)等不良反應(yīng)，提高腫瘤化療效果，改善患者的生活質(zhì)量[1-2]。由于該品種質(zhì)量標準執(zhí)行的是原國家藥品試行標準[3](YBZ13362006)，按照國家藥典委員會的要求，必須限期進行該品種質(zhì)量標準的轉(zhuǎn)正，為此，重點對處方中胡蘆巴、山茱萸、陳皮等藥材，進行了薄層色譜鑒別方法的研究，為該產(chǎn)品質(zhì)量標準轉(zhuǎn)正提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)和實驗依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 原料、試劑與儀器

胡蘆巴對照藥材：批號121609-201001，胡蘆巴堿對照品：批號110883-201604，含量78.4%計，山茱萸對照藥材：批號121495-200702，熊果酸對照品：批號110742-201823，陳皮對照藥材：批號120969-200507，橙皮苷對照品：批號110721-200613,均購于中國食品藥品檢定研究院；芪天扶正膠囊：規(guī)格0.3 g/粒，批號為20061001、20061002、20061003，陜西醫(yī)藥控股集團山海丹藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

石油醚、乙酸乙酯、甲醇、正丁醇、三氯化鐵、碘化鉍鉀：均為分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司；薄層硅膠G：化學純，青島海洋化工有限公司；水:高純水。

電子天平：FA1004B，上海越平科學儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：SENCO，上海申生科技有限公司；電熱恒溫水浴鍋：HSYZ-SP，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；數(shù)控超聲波清洗儀：AS10200AD,天津奧特賽恩斯儀器有限公司；三用紫外分析儀：ZF-7：上海嘉鵬科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 芪天扶正膠囊中胡蘆巴藥材的薄層鑒別

(1)胡蘆巴堿對照品溶液的制備：精密稱取胡蘆巴堿對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的對照品溶液。

(2)供試品溶液的制備：取芪天扶正膠囊內(nèi)容物5 g，研細，加石油醚(30～60 ℃)30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液棄去，藥渣揮干，再加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。

(3)對照藥材溶液的制備：取胡蘆巴對照藥材1.0 g，按1.2.1(2)供試品溶液的制備方法，最后加甲醇2 mL溶解。

(4)陰性供試品溶液的制備：按芪天扶正膠囊制備方法，去掉處方中胡蘆巴藥材，制備缺葫蘆巴藥材的膠囊，按1.2.1(2)方法制備缺葫蘆巴的陰性樣品溶液。

(5)薄層方法：按照《中國藥典》2020版四部0502薄層色譜法實驗[4]，吸取供試品、陰性供試品溶液和胡蘆巴對照藥材溶液各20 μL，胡蘆巴堿對照品溶液10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-鹽酸-乙酸乙酯體積比(8∶3∶1)為展開劑，展開，取出，熱風吹干，于105 ℃烘6 min，取出立即噴以碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液體積比(2∶1)配制的顯色劑，在日光下檢視。

1.2.2 芪天扶正膠囊中山茱萸的薄層鑒別

(1)對照品溶液的制備：稱取熊果酸對照品，加無水乙醇制成質(zhì)量濃度1 mg/1 mL的熊果酸對照品溶液。

(2)供試品溶液的制備：取芪天扶正膠囊內(nèi)容物5 g，加乙酸乙酯30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加1 mL無水乙醇溶解，作為供試品溶液。

(3)對照藥材溶液的制備：取山茱萸對照藥材1 g，按1.2.2(2)供試品溶液的制備方法，最后加無水乙醇2 mL溶解。

陰性供試品溶液的制備：按芪天扶正膠囊處方，去掉山茱萸制成膠囊，按1.2.2(2)方法制成不含山茱萸藥材的陰性樣品溶液。

(4)顯色劑的配制：取濃硫酸5 mL,加無水乙醇稀釋至100 mL,即得。

(5)薄層方法：按照《中國藥典》2020版四部0502薄層色譜法實驗[4]，吸取供試品、陰性供試品溶液和山茱萸對照藥材溶液各2 μL，熊果酸對照品溶液1 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇體積比(20∶5∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1.2.2(4)配制的顯色劑，于105 ℃烘6 min，置日光下檢視。

1.2.3 芪天扶正膠囊中陳皮的薄層鑒別

(1)供試品溶液的制備：取芪天扶正膠囊內(nèi)容物1 g，加甲醇20 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。

(2)對照藥材溶液的制備：取陳皮對照藥材1 g，按1.2.3(1)供試品溶液的制備方法，最后加甲醇1 mL溶解。

(3)對照品溶液的制備：稱取橙皮苷對照品5 mg，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。

(4)陰性供試品液的制備：取按芪天扶正膠囊處方制成不含陳皮藥材的陰性對照藥品1 g，處理方法同1.2.3(1)。

(5)顯色劑的配置：稱取三氯化鋁1 g,加乙醇稀釋至100 mL,即得。

(6)薄層方法：按照《中國藥典》2020版四部0502薄層色譜法實驗[4]，吸取供試品和對照品溶液各3 μL，分別點于同一用0.5%(g/mL)氫氧化鈉液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水體積比(100∶17∶13)為展開劑，展開約3 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水體積比(20∶10∶1∶1)的上層液為展開劑，展開約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

2.1.1 芪天扶正膠囊中胡蘆巴薄層結(jié)果

芪天扶正膠囊3批樣品(批號20061001，20061002，20061003)中胡蘆巴的薄層色譜結(jié)果見圖1～圖3。從圖中可以看出，3批樣品的供試品色譜中，在與對照藥材和胡蘆巴堿對照品色譜相應(yīng)的位置上，均有相同顏色的棕紅色斑點出現(xiàn)，而陰性供試品在此位置無斑點出現(xiàn)，表明該色譜條件分離度良好，陰性供試品無干擾，3批膠囊中均含有胡蘆巴藥材。另外，3批樣品的薄層色譜圖基本一致，也顯示該薄層色譜條件和方法，重現(xiàn)性良好。

1-胡蘆巴堿對照品液；2-胡蘆巴對照藥材液；3-陰性供試品液；4-供試品液(批號20061001)

1-胡蘆巴堿對照品液；2-胡蘆巴對照藥材液；3-陰性供試品液；4-供試品液(批號20061002)

1-胡蘆巴堿對照品液；2-胡蘆巴對照藥材液；3-陰性供試品液；4-供試品液(批號20061003)

2.1.2 芪天扶正膠囊中山茱萸薄層結(jié)果

芪天扶正膠囊3批樣品(批號20061001，20061002，20061003)中山茱萸的薄層色譜結(jié)果見圖4～圖6。從圖中可以看出，3批樣品的供試品色譜中，在與山茱萸對照藥材和熊果酸對照品色譜相應(yīng)的位置上，均有相同顏色的紫紅色斑點出現(xiàn)，而陰性供試品在此位置無斑點出現(xiàn)，表明該色譜條件分離度良好，陰性供試品無干擾，3批膠囊中均含有山茱萸藥材。另外，3批樣品的薄層色譜圖基本一致，也顯示該薄層色譜條件和方法，重現(xiàn)性比較好。

1-熊果酸對照品液；2-山茱萸對照藥材液；3,4-供試品液(批號20061001)；5-陰性供試品液

1-熊果酸對照品液；2-山茱萸對照藥材液；3,4-供試品液(批號20061002)；5-陰性供試品液

1-熊果酸對照品液；2,3-供試品液(批號20061003)；4-山茱萸對照藥材液；5-陰性供試品液

2.1.3 芪天扶正膠囊中陳皮薄層結(jié)果

芪天扶正膠囊3批樣品(批號20061001，20061002，20061003)中陳皮的薄層色譜結(jié)果見圖7～圖9。由圖可知，3批樣品的供試品色譜中，在與陳皮對照藥材和橙皮苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，均有相同顏色的熒光斑點出現(xiàn)，而陰性供試品在該位置熒光斑點顏色差異較大，表明3批膠囊中均含有陳皮藥材。該色譜條件分離度良好，陰性供試品干擾較小，另外，3批樣品的薄層色譜圖基本一致，也表明該薄層色譜條件和方法，重現(xiàn)性比較好。

1-陳皮對照藥材液；2-供試品液(批號20061001)；3-橙皮苷對照品液；4-陰性供試品液

1-陳皮對照藥材液；2-供試品液(批號20061002)；3-橙皮苷對照品液；4-陰性供試品液

1-陳皮對照藥材液；2-供試品液(批號20061003)；3-橙皮苷對照品液；4-陰性供試品液

2.2 討論

2.2.1 芪天扶正膠囊中胡蘆巴供試品溶液制備方法及薄層顯色劑的篩選

為了獲得理想的薄層效果，參照《陜西省中藥飲片標準》第一冊[5]和2020版中國藥典一部[6]胡蘆巴藥材薄層鑒別中供試品的制備方法，對石油醚脫脂和甲醇提取，分別比較了超聲法和回流提取法2種方法的薄層效果，結(jié)果表明回流法制備的供試品液薄層色譜圖中，薄層斑點圓整、清晰、分離度好，因此，芪天扶正膠囊中胡蘆巴供試品溶液的制備采用回流提取法。原因可能是超聲法對單味藥材簡單可行，但對復(fù)方制劑因溫度低，提取效果差，不如回流法。鑒定的標準物質(zhì)除胡蘆巴對照藥材外，還選用其主要成分胡蘆巴堿做對照品[7-11]，同時，對薄層顯色劑進行了篩選，采用中國藥典[6]中稀碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液顯色后，薄層色譜底色淺，有拖尾，因此，最終選擇碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液體積比(2∶1)作為顯色劑。

2.2.2 芪天扶正膠囊中山茱萸供試品溶液制備方法及展開劑的篩選

熊果酸是山茱萸的主要成分和中國藥典控制指標，對芪天扶正膠囊中山茱萸的薄層鑒別，實驗采用山茱萸對照藥材和熊果酸對照品作為比對標準[12-15]。藥典中[6]供試品的制備方法是用乙酸乙酯超聲提取，實驗改為回流提取后供試品溶液在薄層色譜色譜圖中，斑點集中、圓整、清晰、分離度好。同時薄層展開的溶劑系統(tǒng)采用環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇體積比(20∶5∶4∶2)，代替2020版中國藥典[6]使用的甲苯-乙酸乙酯-甲酸體積比(20∶4∶0.5)，薄層效果更好。

2.2.3 芪天扶正膠囊中陳皮供試品處理方法的篩選

橙皮苷是藥材陳皮的主要有效成分，也是質(zhì)量控制的指標性成分[16-19]。為了鑒別芪天扶正膠囊中主要藥材陳皮，實驗選用陳皮對照藥材和橙皮苷作為對照，并對2020版中國藥典陳皮藥材[6]供試品溶液的甲醇超聲提取方法，與回流提取方法處理的供試品，進行薄層效果的比較，結(jié)果甲醇回流提取法制備的供試品溶液，薄層斑點較多，斑點圓整、清晰、分離度好，因此，芪天扶正膠囊中陳皮供試品溶液的制備方法采用甲醇回流提取法。

3 結(jié) 論

芪天扶正膠囊為陜西醫(yī)藥控股集團山海丹藥業(yè)股份有限公司的獨家品種，為了使該品種的質(zhì)量標準能夠盡快轉(zhuǎn)正，實驗所確定的處方中胡蘆巴、陳皮、山茱萸等藥材薄層鑒別方法，專屬性強,重現(xiàn)性良好，可用于芪天扶正膠囊的定性質(zhì)量控制及質(zhì)量標椎準轉(zhuǎn)正的科學依據(jù)。