趙曉娥，張靜，高臻，孫念琴，徐明輝，李延華，馬保華*

(1. 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)部動(dòng)物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 楊凌 712100；2. 許昌百益奶山羊養(yǎng)殖場(chǎng)，河南 許昌 461000；3. 富平縣畜牧技術(shù)推廣中心，陜西 富平 711700)

在我國(guó)北方地區(qū)，傳統(tǒng)的奶山羊生產(chǎn)周期是秋季配種、春季產(chǎn)羔，經(jīng)過(guò)6～8個(gè)月的泌乳期后，在干奶期之前進(jìn)入下一年度的繁殖和生產(chǎn)周期。在這種生產(chǎn)模式下，奶山羊每年都有相對(duì)固定的配種、產(chǎn)羔、泌乳周期，其中鮮奶供應(yīng)周期大約固定在每年的1～8月份。為了滿足奶山羊養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)市場(chǎng)全年供應(yīng)鮮羊奶的需求，通過(guò)同期發(fā)情與誘導(dǎo)發(fā)情的方法可以使奶山羊在不同季節(jié)妊娠、產(chǎn)羔及產(chǎn)奶。奶山羊的發(fā)情、排卵、妊娠和泌乳受體內(nèi)生殖激素的調(diào)控[1]，其泌乳期間激素水平的動(dòng)態(tài)變化對(duì)維持正常泌乳及泌乳后期卵巢機(jī)能恢復(fù)起重要作用。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)母羊生殖內(nèi)分泌的研究主要集中在不同品種母羊發(fā)情周期內(nèi)分泌的變化[2-3]，或母羊在不同季節(jié)內(nèi)分泌的變化[4-5]。據(jù)報(bào)道綿羊、山羊外周血中促黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)濃度均存在著季節(jié)性變化，繁殖季節(jié)高于非繁殖季節(jié)[4-7]。那么，奶山羊在不同季節(jié)產(chǎn)羔后，季節(jié)性變化是否引起產(chǎn)后母羊生殖激素及生長(zhǎng)激素(GH)水平的變化還不清楚。因此，本研究選取1、3、5、8月份生產(chǎn)的關(guān)中奶山羊，采集母羊產(chǎn)羔后不同時(shí)間的靜脈血，分離血清，使用ELISA試劑盒檢測(cè)血清中激素的變化規(guī)律，為調(diào)控奶山羊在不同季節(jié)配種實(shí)現(xiàn)全年均衡產(chǎn)奶提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

1.5～4歲的關(guān)中奶山羊，選自河南許昌百益奶山羊養(yǎng)殖場(chǎng)，體況良好，無(wú)繁殖及傳染性疾病，于當(dāng)年的8、10、12以及次年3月份分4批同期發(fā)情及配種處理，于次年的1、3、5、8月份產(chǎn)羔，每批次隨機(jī)抽取10只產(chǎn)羔母羊，共40只用于試驗(yàn)，舍飼飼養(yǎng)，常規(guī)管理。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)羊分別于產(chǎn)羔后的0 d、7 d、1～8個(gè)月(每月的第15天)采集靜脈血，1 600 r/min離心12 min，取血清移入2 mL離心管中，-20 ℃冰箱保存待用。分別用上海邦奕生產(chǎn)的羊催乳素(PRL)ELISA試劑盒(BYE80053)、羊FSH ELISA 試劑盒(BYE80199)、羊LH ELISA試劑盒(BYE80054)、羊孕激素(PROG)/孕酮(P4)ELISA試劑盒(BYE80231)和羊雌激素(E2) ELISA試劑盒(BYE93052)測(cè)定血清中的生殖激素水平，用羊生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒(BYE80125)對(duì)血清中的GH水平進(jìn)行檢測(cè)，由上海邦奕生物科技有限責(zé)任公司代測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05表示差異顯著。數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期PRL水平變化

不同月份母羊產(chǎn)后泌乳期PRL水平檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。

相同泌乳期標(biāo)注不同字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下同

1、3、5和8月份產(chǎn)羔母羊泌乳期間血清中PRL含量的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)一致，PRL濃度從產(chǎn)后0 d開(kāi)始上升，7 d達(dá)到峰值，之后下降，60 d后緩慢下降，逐漸維持在一定水平波動(dòng)。泌乳期間PRL濃度最高為(446.17±3.74)ng·L-1，最低為(221.72±2.20)ng·L-1。產(chǎn)后0 d，不同月份產(chǎn)羔母羊外周血中PRL濃度差異較大。8月份產(chǎn)羔母羊，在泌乳2個(gè)月時(shí)，外周血中PRL含量顯著低于1和3月份產(chǎn)羔母羊(P<0.05)；在泌乳3個(gè)月時(shí)，外周血中PRL含量顯著低于1月份產(chǎn)羔母羊(P<0.05)。在泌乳8個(gè)月時(shí)，1月份和8月份產(chǎn)羔母羊外周血中PRL含量顯著高于3月份和5月份產(chǎn)羔母羊(P<0.05)。

2.2 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期FSH水平變化

不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期FSH水平檢測(cè)結(jié)果如圖2所示。

圖2 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期FSH水平

1、3、5、8月份產(chǎn)羔母羊在8個(gè)月泌乳期間外周血中FSH含量動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)一致，F(xiàn)SH濃度從產(chǎn)后0 d開(kāi)始上升，產(chǎn)后7 d達(dá)峰值，隨后下降，1個(gè)月后，穩(wěn)定在一定濃度范圍內(nèi)浮動(dòng)。母羊泌乳期間FSH濃度最高為(9.49±0.77)U·L-1，最低為(3.82±0.09)U·L-1。在產(chǎn)后0 d，3月份和8月份產(chǎn)羔母羊外周血中FSH濃度顯著高于1月份和5月份產(chǎn)羔母羊(P<0.05)。

2.3 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期LH水平變化

不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期LH水平檢測(cè)結(jié)果如圖3所示。

圖3 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期LH水平

1、3、5、8月份產(chǎn)羔母羊泌乳期外周血中LH含量的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)一致，產(chǎn)后1個(gè)月內(nèi)LH濃度持續(xù)下降，之后上升，2個(gè)月時(shí)恢復(fù)到產(chǎn)后0 d水平，之后緩慢下降。母羊泌乳期間LH濃度最高為(351.17±8.73)pg·mL-1，最低為(218.16±4.41)pg·mL-1。產(chǎn)后0 d，8月份產(chǎn)羔母羊外周血中LH濃度顯著低于其他月份(P<0.05)；產(chǎn)后2個(gè)月時(shí)，1月份產(chǎn)羔母羊外周血中LH的濃度顯著高于其他月份(P<0.05)。

2.4 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期P4水平變化

不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期P4水平檢測(cè)結(jié)果如圖4所示。

圖4 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期P4水平

從圖4可以看出，1、3、5、8月份產(chǎn)羔母羊泌乳期外周血中P4含量的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)一致，產(chǎn)后1周內(nèi)P4濃度稍有下降，之后逐漸上升，60 d后再次緩慢下降。母羊泌乳期間P4濃度最高為(4 086.83±114.81)pmol·L-1，最低為(3 568.15±33.50)pmol·L-1。產(chǎn)后8個(gè)月時(shí)，1月份和8月份產(chǎn)羔母羊外周血中P4含量顯著高于3月份和5月份產(chǎn)羔母羊(P<0.05)。

2.5 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期E2水平變化

不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期E2水平檢測(cè)結(jié)果如圖5所示。

圖5 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期雌二醇水平

1、3、5、8月份產(chǎn)羔母羊泌乳期血清中E2含量的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)一致，產(chǎn)后1周內(nèi)E2濃度下降，之后直到第7個(gè)月E2水平維持在一定濃度范圍內(nèi)上下浮動(dòng)，7個(gè)月之后開(kāi)始上升。母羊泌乳期間E2濃度最高為(33.74±1.48)ng·L-1，最低為(22.30±0.83)ng·L-1。產(chǎn)后0 d，1月份產(chǎn)羔母羊外周血中E2濃度顯著低于3月份、5月份和8月份產(chǎn)羔母羊(P<0.05)；產(chǎn)后3個(gè)月，8月份產(chǎn)羔母羊外周血中E2濃度低于3月產(chǎn)羔母羊(P<0.05)；產(chǎn)后8個(gè)月，8月份產(chǎn)羔母羊外周血中E2濃度低于1月份和3月份產(chǎn)羔母羊(P<0.05)。

2.6 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期GH水平變化

不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期外周血中GH水平檢測(cè)結(jié)果如圖6所示。

圖6 不同月份產(chǎn)羔母羊泌乳期GH水平

1、3、5、8月份產(chǎn)羔母羊泌乳期外周血中GH含量的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)一致，GH濃度最高為(30.36±1.67)μg·L-1，最低為(11.57±0.92)μg·L-1。不同月份產(chǎn)羔母羊在產(chǎn)后0 d血清中GH濃度最高，產(chǎn)后7 d最低。1個(gè)月后，各批次母羊血清中GH濃度基本穩(wěn)定在一定范圍內(nèi)上下浮動(dòng)。

3 討論

PRL、P4、E2、FSH、LH是母畜產(chǎn)后維持泌乳的主要激素。母羊分娩后開(kāi)始泌乳，其血清中P4水平開(kāi)始降低，解除它對(duì)PRL的抑制作用使PRL濃度升高，而高水平的PRL及胎盤(pán)、卵巢分泌的P4、E2共同作用促進(jìn)母羊產(chǎn)后泌乳[8]。這與本試驗(yàn)的結(jié)果相符。本試驗(yàn)中，母羊從產(chǎn)后0 d開(kāi)始，外周血中PRL濃度開(kāi)始升高，E2、P4濃度下降，7 d后，PRL濃度開(kāi)始降低，E2、P4濃度逐漸升高，繼而E2、P4濃度穩(wěn)定在一定水平上下波動(dòng)，而PRL仍處于下降趨勢(shì)，直到3個(gè)月之后穩(wěn)定下來(lái)，此時(shí)，3種激素穩(wěn)定分泌以維持母羊正常泌乳。本試驗(yàn)中母羊產(chǎn)羔后7 d FSH升高到較高水平，之后下降，1個(gè)月后，維持在一定濃度范圍內(nèi)上下浮動(dòng)，這符合母畜產(chǎn)后FSH和P4之間的消減規(guī)律。母畜在分娩后P4迅速降低解除它對(duì)PRL的抑制作用，同時(shí)解除丘腦下部對(duì)促性腺激素釋放激素(GnRH)的分泌，使FSH釋放增加，而LH沒(méi)有像FSH那樣在產(chǎn)后7 d時(shí)升高，而是下降，可能與高濃度PRL有關(guān)。據(jù)報(bào)道，母畜產(chǎn)后，吮乳刺激能促進(jìn)母畜PRL分泌[9-10]，促進(jìn)初乳的生成與分泌，引起產(chǎn)奶量增加[11]。高濃度的PRL抑制垂體LH的分泌，即產(chǎn)后母畜外周血LH水平同PRL水平負(fù)相關(guān)[12]。但吮乳刺激對(duì)母畜體內(nèi)E2、P4和FSH分泌都無(wú)明顯影響[13]。本試驗(yàn)中，母羊產(chǎn)后，LH開(kāi)始下降，7 d后，盡管PRL開(kāi)始下降，但相對(duì)于整個(gè)泌乳期而言，PRL仍處在較高水平，負(fù)反饋調(diào)控使LH濃度繼續(xù)緩慢下降?？傊?，5種激素共同作用維持母羊產(chǎn)后正常泌乳。

奶山羊在不同月份產(chǎn)羔后，同一泌乳期部分激素水平有差異，這可能與4個(gè)批次母羊處于不同的季節(jié)有關(guān)，即產(chǎn)羔月份的不同對(duì)奶山羊激素水平有一定的影響。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3和5月份產(chǎn)羔母羊從產(chǎn)后7個(gè)月開(kāi)始LH、FSH、P4濃度升高，主要是因?yàn)檫@2個(gè)批次母羊在泌乳7個(gè)月時(shí)，一方面奶山羊進(jìn)入泌乳后期，另一方面此時(shí)正是奶山羊常規(guī)繁殖季節(jié)秋冬季，母羊處于短日照季節(jié)，有利于P4分泌。Suttie等[14]報(bào)道，短日照可以加速P4分泌，而長(zhǎng)日照明顯抑制P4的分泌。P4是一個(gè)重要的內(nèi)分泌信號(hào)，它控制著FSH分泌峰的周期性及母羊新生卵泡的數(shù)量[15]。即P4對(duì)母羊的發(fā)情具有“啟動(dòng)”作用，可以促使卵巢從相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛钴S狀態(tài)，從而使母羊的發(fā)情和排卵恢復(fù)正常，LH、FSH濃度也上升[16]。因此，這2個(gè)批次母羊在泌乳7個(gè)月時(shí)已恢復(fù)正常的發(fā)情周期，母羊外周血中FSH、LH和P4濃度升高。

GH的作用是調(diào)節(jié)母畜的乳腺發(fā)育和泌乳活動(dòng)，反芻奶畜依賴(lài)于GH維持其泌乳[17]。家畜GH的分泌受晝夜節(jié)律、運(yùn)動(dòng)、機(jī)體代謝以及應(yīng)激刺激的影響。本試驗(yàn)中，母羊產(chǎn)后第7天GH下降到最小值，可能的原因與產(chǎn)房?jī)?nèi)懸掛白熾燈提供晝夜照明有關(guān)。為了更好地護(hù)理母羊與羔羊，母羊產(chǎn)羔后，飼養(yǎng)工人將母羊關(guān)在懸掛白熾燈的產(chǎn)房?jī)?nèi)，由于母羊長(zhǎng)時(shí)間處于光照條件下，抑制GH的分泌，當(dāng)母羊重新回到圈舍，母羊血中GH濃度上升。本研究中，4個(gè)批次母羊GH到達(dá)峰值時(shí)不在同一泌乳階段，可能的原因是母羊處于不同的季節(jié)，晝夜長(zhǎng)短不一樣，晝夜節(jié)律、光照時(shí)間對(duì)母羊GH分泌的影響。

4 結(jié)論

奶山羊在不同月份產(chǎn)羔后，同一泌乳期部分激素水平有差異，這可能與4個(gè)批次母羊處于不同的季節(jié)有關(guān)，即奶山羊在不同月份產(chǎn)羔后，對(duì)其激素水平有一定的影響，但是在整個(gè)泌乳期間靜脈血中PRL、FSH、LH、P4、E2及GH濃度的變化趨勢(shì)是一致的。因此，奶山羊在不同月份進(jìn)行配種、產(chǎn)羔對(duì)其泌乳期生殖內(nèi)分泌影響較小，可以對(duì)奶山羊進(jìn)行分批次配種、產(chǎn)羔，實(shí)現(xiàn)其全年均衡產(chǎn)奶。