連銳銳，李桂明，孫傳熙，李 真，劉月月，楊世發(fā)，林樹乾，石有斐，殷 斌*，萬仁忠*

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東泰安 271018；2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東濟(jì)南 250023)

熱應(yīng)激(heat stress)是指機(jī)體遭受環(huán)境溫度超過等熱區(qū)上限的高溫度刺激時(shí)，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生的一系列非特異性反應(yīng)，也稱為熱應(yīng)激反應(yīng)。短暫的過高溫刺激或長時(shí)間持續(xù)熱應(yīng)激，會導(dǎo)致動物機(jī)體出現(xiàn)器官衰竭，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)侔l(fā)死亡。在我國，大部分地區(qū)每年夏天都會出現(xiàn)超過動物等熱區(qū)上限的持續(xù)高溫天氣(35 ℃～40 ℃)，不僅會影響畜禽產(chǎn)品品質(zhì)，還會影響動物的生產(chǎn)、繁殖、健康、福利，對包括人類在內(nèi)的動物生命構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅[1-2]。家禽缺少汗腺，對熱敏感，熱應(yīng)激成為影響家禽生產(chǎn)性能的關(guān)鍵問題之一[3]。

熱應(yīng)激會導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性、聚集，使可溶性蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)椴豢扇苄缘鞍仔罘e在細(xì)胞內(nèi)，造成蛋白穩(wěn)態(tài)的失衡，對機(jī)體造成損傷。熱休克反應(yīng)(heat shock response，HSR)是機(jī)體在遭受應(yīng)激刺激時(shí)，以上調(diào)熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)為特征的防御性適應(yīng)反應(yīng)，可以有效緩解蛋白穩(wěn)態(tài)的失衡[4]。HSP作為分子伴侶，可以幫助蛋白質(zhì)的正確折疊、移位、復(fù)性和降解，還可以維持細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)發(fā)揮重要的內(nèi)源性保護(hù)作用，可被缺氧、缺血、熱應(yīng)激、氧化應(yīng)激等各種短暫的應(yīng)激所激活[5-7]。Hsps是否能被正常激活，決定對應(yīng)激的耐受性是否形成，其表達(dá)量與細(xì)胞對應(yīng)激的耐受性呈正相關(guān)。采用藥物刺激(如阿司匹林、輔酶Q10)誘導(dǎo)Hsp70高表達(dá)，會增加細(xì)胞在同等熱應(yīng)激條件下的存活率[8-9]，而采用Hsp70的抑制劑(槲皮素)會導(dǎo)致細(xì)胞在熱應(yīng)激條件下的存活率會顯著下降[10]。過表達(dá)CRYAB可以通過穩(wěn)定細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)和調(diào)控細(xì)胞周期，顯著提高心肌細(xì)胞H9C2的耐熱性，且其保護(hù)效果與CRYAB過表達(dá)量成正相關(guān)[11]。HSP參與細(xì)胞抗凋亡的各個(gè)途徑，其提高細(xì)胞的耐受性與HSP抗細(xì)胞凋亡的作用密切相關(guān)，但熱應(yīng)激條件下，HSP如何調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制目前尚不清晰。

本研究基于系統(tǒng)生物學(xué)分析方法，獲取家禽與熱應(yīng)激相關(guān)的基因，通過GO富集分析方法，篩選出調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因，并利用STRING數(shù)據(jù)庫分析其相互間作用關(guān)系。為進(jìn)一步確定熱應(yīng)激激活HSP的高表達(dá)，發(fā)揮內(nèi)源性保護(hù)作用，以300日齡蛋雞構(gòu)建熱應(yīng)激試驗(yàn)動物模型，探討不同的熱應(yīng)激時(shí)間點(diǎn)對家禽的損傷以及對HSP的誘導(dǎo)規(guī)律，為揭示HSP在熱應(yīng)激損傷中發(fā)揮的作用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用動物 300日齡健康海蘭褐蛋雞40只，購自濟(jì)南鳴仁畜牧養(yǎng)殖有限公司。

1.1.2 主要試劑 RNAiso Plus、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、TB Green Premix ExTaqⅡ(2x)，日本TaKaRa公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 光學(xué)顯微鏡，重慶重光實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品；低溫冷凍離心機(jī)(Sorval Legend Micro 17 R)，美國Thermo Fisher公司產(chǎn)品；PCR儀，美國Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品；熒光定量PCR儀(QuantStudio7 Flex)，美國Applied Biosystems公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 受試雞熱應(yīng)激模型的構(gòu)建及樣品采集 40只300日齡海蘭褐蛋雞隨機(jī)分為4組，分別為熱應(yīng)激0、1、3、5 d組，每組10只。按組分群后在控溫控濕的環(huán)境(溫度25 ℃±1 ℃，相對濕度約60%)中進(jìn)行為期7 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間自由飲食、飲水。待適應(yīng)期結(jié)束后，進(jìn)入熱應(yīng)激處理期，熱應(yīng)激溫度為38 ℃2 ℃，濕度保持在60%，熱應(yīng)激期間自由飲食、飲水，分別進(jìn)行0、1、3、5 d的熱應(yīng)激處理。熱應(yīng)激期間實(shí)時(shí)觀察受試雞的行為狀態(tài)，熱應(yīng)激結(jié)束采集血液和心臟組織。采集的血液立刻分離血清后，用于雞心肌細(xì)胞損傷相關(guān)酶的檢測；心臟組織分別置于40 mg/mL甲醛和液氮中，以備組織病理學(xué)和分子生物學(xué)檢測。

1.2.2 心肌損傷酶譜的檢測 雞血清中肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase MB，CK-MB)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase，AST)的檢測,送至濟(jì)南金域檢測中心檢測采用自動生化分析儀進(jìn)行。

1.2.3 受試雞心肌組織應(yīng)激性病理損傷檢測 取出固定于40 mg/mL甲醛中的心臟組織，經(jīng)過梯度濃度乙醇脫水后進(jìn)行二甲苯透明處理，然后完成組織的石蠟包埋、切片和HE染色程序，并在400倍顯微鏡下觀察心肌組織病理學(xué)變化。

1.2.4 受試雞心肌組織Hsp轉(zhuǎn)錄水平的動態(tài)檢測 從凍存管內(nèi)取出心肌組織，用滅菌剪刀在心尖位置剪取約0.2 g的組織于1.5 mL滅菌離心管內(nèi)，加入200 μL RNAiso Plus，用研磨棒進(jìn)行研磨，研磨充分后再加入800 μL RNAiso Plus充分裂解組織，冰上裂解10 min后，加入200 μL氯仿，混勻約30 s，冰盒上放置5 min后，12 000 r/min 4 ℃下離心15 min。取上清液約500 μL轉(zhuǎn)移至新的離心管，按等體積的比例加入異丙醇，上下顛倒混勻，置于-20 ℃環(huán)境中靜置沉淀1 h。冰箱內(nèi)取出后12 000 r/min 4 ℃下離心15 min，棄掉上清液。各管加入預(yù)冷的750 mL/L乙醇1 mL，上下顛倒洗滌，7 500 r/min、 4 ℃離心5 min，棄掉上清，再以7 500 r/min 、4 ℃離心2 min，用移液槍小心吸干殘留乙醇，室溫下干燥3 min。加入無RNA酶滅菌水20 μL，吹打溶解RNA，溶解后的RNA進(jìn)行濃度與純度檢測。

反轉(zhuǎn)錄采用10 μL體系，按照說明書進(jìn)行，反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA置于-80 ℃保存，備用。Real-time PCR所需要的引物根據(jù)NCBI中已發(fā)表的雞Cryab、Hsp27、Hsp70、以及Gapdh的基因序列為參照模板，用Primer 5.0 軟件設(shè)計(jì)，由濟(jì)南博尚公司合成，引物序列見表1。cDNA模板經(jīng)過5倍稀釋后使用，real-time PCR反應(yīng)采用20 μL體系：2×TB Green Premix ExTaq10 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.8 μL，cDNA 2 μL，RNase-free水6.4 μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s，40個(gè)循環(huán)；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。每個(gè)樣品基因的相對表達(dá)水平根據(jù)甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)Ct值標(biāo)準(zhǔn)化，并使用2-ΔΔCt方法定量。

1.2.5 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究Hsps調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制

1.2.5.1 家禽熱應(yīng)激作用靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 通過NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫Gene檢索板塊，查找與家禽熱應(yīng)激相關(guān)的疾病靶標(biāo)。利用STRING數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/cgi/input.pl)，獲得家禽熱應(yīng)激相關(guān)靶標(biāo)間的相互作用關(guān)系，篩選評分≥0.7的相互作用關(guān)系作為可信的相關(guān)作用關(guān)系，并導(dǎo)入Cytoscape軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)可視化分析。利用Cytoscape軟件中network analyze功能中“generate style from statistics”的板塊獲取網(wǎng)絡(luò)中靶標(biāo)的自由度、介數(shù)、接近中心性和平均最短路徑長度等信息，并按照自由度由小到大，顏色由黃到紅進(jìn)行注釋，構(gòu)建家禽熱應(yīng)激作用靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)。

1.2.5.2 家禽熱應(yīng)激調(diào)控細(xì)胞凋亡作用靶標(biāo)的篩選及相互作用關(guān)系的分析 家禽熱應(yīng)激作用靶標(biāo)導(dǎo)入DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)數(shù)據(jù)庫，基因類型選擇Official Gene Symbol，物質(zhì)信息和基因背景均選擇Gallus gallus，進(jìn)行GO富集分析，獲得負(fù)調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用靶標(biāo)(negative regulation of apoptotic process)。將獲得的熱應(yīng)激條件下調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用靶標(biāo)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫，獲得靶標(biāo)間相關(guān)作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)和蛋白共表達(dá)間關(guān)系。

表1 RT-PCR引物序列

1.2.6 數(shù)據(jù)分析 所有試驗(yàn)均采用3個(gè)平行，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(standard deviation，SD)表示。試驗(yàn)組之間的差異使用SPSS軟件v.20.0，通過單向方差分析(ANOVA)和最小顯著差異(LSD)多重比較測試方法分析。*和**分別表示P<0.05和P<0.01。

2 結(jié)果

2.1 熱應(yīng)激對受試雞臨床表現(xiàn)的影響

受試雞遭受熱應(yīng)激4 h時(shí)，明顯出現(xiàn)張口呼吸、劇烈喘息的表現(xiàn)，拒食、但飲水量增加；伴隨熱應(yīng)激時(shí)間的增加，受試雞的活動量減少，伏于籠底部；當(dāng)熱應(yīng)激持續(xù)至2 d時(shí)，熱應(yīng)激的狀態(tài)有所緩解，受試雞飲食逐漸恢復(fù)，張口呼吸的癥狀也有所減輕；當(dāng)熱應(yīng)激持續(xù)至5 d時(shí)，受試雞的行為和呼吸基本恢復(fù)。

2.2 熱應(yīng)激對心肌損傷酶譜的檢測結(jié)果

受試雞血清內(nèi)心肌損傷相關(guān)酶CK、CK-MB、LDH和AST在熱應(yīng)激條件下的動態(tài)變化如圖1所示。由圖1可以看出，熱應(yīng)激1 d會上調(diào)受試雞血清中CK(P<0.01)和CK-MB(P<0.05)的水平；當(dāng)熱應(yīng)激持續(xù)至3 d時(shí)，CK和CK-MB的水平有所恢復(fù)，與正常條件下的水平無差異；當(dāng)熱應(yīng)激持續(xù)至5 d時(shí)，CK和CK-MB的水平均極顯著高于熱應(yīng)激0 d組(P<0.01)。另外，熱應(yīng)激5 d會上調(diào)LDH(P<0.01)和AST(P<0.05)的水平。

A.肌酸激酶；B.肌酸激酶同工酶；C.乳酸脫氫酶；D.谷草轉(zhuǎn)氨酶

2.3 熱應(yīng)激條件下受試雞心肌組織的病理變化

熱應(yīng)激導(dǎo)致的雞心肌組織的病理性損傷結(jié)果見圖2。當(dāng)受試雞處于熱應(yīng)激環(huán)境時(shí)，心肌組織出現(xiàn)損傷，具體表現(xiàn)為熱應(yīng)激1 d會導(dǎo)致心肌細(xì)胞的顆粒變性(→)和空泡變性(↑)；當(dāng)熱應(yīng)激持續(xù)至3 d時(shí)，顆粒變性和空泡變性加重；當(dāng)熱應(yīng)激持續(xù)至5 d時(shí)，心肌細(xì)胞顆粒變性和空泡變性繼續(xù)加重，并開始出現(xiàn)核濃縮、核深染為特點(diǎn)的壞死(←)。

2.4 熱應(yīng)激條件下受試雞心肌組織中Hsp轉(zhuǎn)錄水平的動態(tài)變化

受試雞心肌組織中Hsp的轉(zhuǎn)錄水平如圖3所示。熱應(yīng)激會激活Hsp的轉(zhuǎn)錄，在遭受38 ℃熱應(yīng)激刺激時(shí)，持續(xù)至3 d時(shí)會上調(diào)Cryab(P<0.05)和Hsp70的轉(zhuǎn)錄水平，在熱應(yīng)激5 d時(shí)，Hsp60、Hsp70和Hsp90均呈現(xiàn)極顯著上調(diào)(P<0.01)。

2.5 家禽熱應(yīng)激作用靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)

基于NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫Gene檢索板塊，共獲得與家禽熱應(yīng)激相關(guān)的基因靶標(biāo)共198個(gè)，將其導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫共獲得1 514條相關(guān)作用關(guān)系，篩選評分≥0.7的相互作用關(guān)系有530條。530條相互作用關(guān)系導(dǎo)入Cytoscape軟件，進(jìn)行可視化分析，獲得家禽熱應(yīng)激作用靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)見圖4，其中橢圓代表蛋白靶標(biāo)，其顏色由黃-紅按自由度升序標(biāo)注。由圖4可以看出DNAJC6、HSPA9、HSPA8、HSPA2、HSPA4、HSPA5、HSP90AA1、HSPH1、SUGT1、HSP90AB1、GAK和HSPA4L自由度較高，均≥21，在家禽遭受熱應(yīng)激時(shí)發(fā)揮重要的作用。

A.0 d；B.1 d；C.3 d；D.5 d。心肌細(xì)胞應(yīng)激性病理損傷，顆粒變性(→)、空泡變性(↑)、細(xì)胞壞死(←)

A.cryab mRNA；B.hsp60 mRNA；C.hsp70 mRNA；D. hsp90 mRNA

橢圓代表蛋白靶標(biāo)，其顏色由黃-紅按自由度升序標(biāo)注

2.6 家禽熱應(yīng)激調(diào)控細(xì)胞凋亡作用靶標(biāo)的篩選及相互作用分析

將獲得的與家禽熱應(yīng)激相關(guān)的198個(gè)基因靶標(biāo)，導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO富集分析，篩選與調(diào)控細(xì)胞凋亡相互的作用靶標(biāo)見表2。發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白家族成員CRYAA、HSP90AB1、HSP90B1、HSPA5、HSPD1、DNAJA1和DNAJC3均參與熱應(yīng)激條件下調(diào)控家禽細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。將獲得的調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用靶標(biāo)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行相互間作用分析，獲得相互間作用網(wǎng)絡(luò)見圖5，獲得靶標(biāo)間共表達(dá)結(jié)果見圖6。Hsp90AB1和Hsp90B1可以調(diào)控細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶1(cyclin dependent kinase 1，CDK1)，Hsp90AB1和HspD1可以與CDK1共表達(dá)，影響細(xì)胞周期。Hsp90B1、DNAJC3和IGF1可以調(diào)控白介素6(interleukin 6，IL-6)，影響細(xì)胞因子的表達(dá)，從而影響細(xì)胞凋亡。

表2 家禽熱應(yīng)激調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用靶標(biāo)

圖5 熱應(yīng)激調(diào)控家禽細(xì)胞凋亡的靶標(biāo)間相互作用網(wǎng)絡(luò)

圖6 熱應(yīng)激調(diào)控家禽細(xì)胞凋亡的靶標(biāo)共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)

3 討論

應(yīng)激(stress)是一種由多種應(yīng)激原作用于動物機(jī)體而造成機(jī)體非特異性損傷的反應(yīng)。應(yīng)激原在畜禽生長發(fā)育過程中普遍存在，如夏天高溫時(shí)節(jié)的熱應(yīng)激、長途運(yùn)輸時(shí)的運(yùn)輸應(yīng)激等。隨著集約化養(yǎng)殖和全球氣溫變暖趨勢的影響，熱應(yīng)激已經(jīng)成為影響畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重大因素之一。當(dāng)環(huán)境溫度超過各種動物的舒適區(qū)上限時(shí)，動物就會出現(xiàn)熱應(yīng)激反應(yīng)，環(huán)境溫度超過舒適區(qū)上限越高、持續(xù)時(shí)間越長，熱應(yīng)激反應(yīng)的程度就越嚴(yán)重。2003年美國因熱應(yīng)激造成了1.69億～ 23.6億美元的損失[12]。在我國，大部分地區(qū)每年夏天都會出現(xiàn)超過各種家畜、家禽等熱區(qū)上限的持續(xù)高溫天氣(35 ℃～40 ℃)，造成動物免疫力下降及各種疾病，甚至猝死。此外，熱應(yīng)激還會降低肉品品質(zhì)，降低母豬的產(chǎn)奶量和仔豬的斷奶重量[13-15]、肉雞日增重[16-18]、蛋雞體重和蛋殼厚度[19],引起火雞的死亡率升高[20]。由于熱應(yīng)激與其他傳染病的致病因素不同，其對動物機(jī)體的損害是非特異性的，引起的動物疾病甚至死亡因素并不單一，且目前尚無有效的解決和控制辦法，因此研究熱應(yīng)激對動物機(jī)體的損傷機(jī)制以及動物機(jī)體的應(yīng)答措施，對防止動物熱應(yīng)激損傷及篩選抗熱應(yīng)激藥物具重要的實(shí)際意義。

心臟對熱敏感。鮑恩東等[21]的研究中發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激可導(dǎo)致肉雞的心肌纖維斷裂等病理變化。熱應(yīng)激導(dǎo)致動物死亡的原因可能與熱應(yīng)激對心肌細(xì)胞的損傷有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，熱應(yīng)激1 d會導(dǎo)致心肌細(xì)胞的顆粒變性和空泡變性，該病理損傷會隨熱應(yīng)激時(shí)間的持續(xù)而加重，在熱應(yīng)激持續(xù)5 d時(shí)，出現(xiàn)核濃縮、核深染為特點(diǎn)的壞死。細(xì)胞作為構(gòu)成生命機(jī)體的基本單元，同樣具有抗損傷的功能。當(dāng)細(xì)胞受到應(yīng)激刺激時(shí)，會啟動自身的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制來抵抗損傷。

動物細(xì)胞在受到應(yīng)激刺激時(shí)會上調(diào)相關(guān)功能蛋白的基因轉(zhuǎn)錄水平，從而上調(diào)功能性蛋白質(zhì)翻譯水平，主要通過暫時(shí)的升高HSP的表達(dá)水平來增強(qiáng)細(xì)胞耐受性以及存活率。HSP作為重要的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制參與蛋白，協(xié)助機(jī)體適應(yīng)環(huán)境的變化，抵抗應(yīng)激造成的損傷。各種應(yīng)激刺激如缺氧、缺血、冷應(yīng)激、熱應(yīng)激、創(chuàng)傷、感染等都可誘導(dǎo)HSP的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，HSP表達(dá)量與細(xì)胞抗損傷能力呈正相關(guān)，因此，HSP被認(rèn)為是衡量機(jī)體抵抗外應(yīng)激刺激能力的重要指標(biāo)。HSP具有眾多生物學(xué)功能。在大多數(shù)生物體中表達(dá)的CRYAB可作為分子伴侶穩(wěn)定細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，并且參與細(xì)胞周期與凋亡通路的調(diào)控[22]。Hsp60主要分布在線粒體中，在各種脅迫條件下重新折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)中起重要作用[23]。Hsp70在抗細(xì)胞損傷中發(fā)揮重要作用，其誘導(dǎo)表達(dá)可以有效提高細(xì)胞存活率并減輕應(yīng)激損傷[24]。熱應(yīng)激還誘導(dǎo)Hsp90高表達(dá)，Hsp90與促生存/抗凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑密切相關(guān)，且Hsp90還可以幫助其客戶蛋白維持其正確的分子結(jié)構(gòu)[25]。本研究也發(fā)現(xiàn)38 ℃熱應(yīng)激，會在3 d時(shí)會上調(diào)Cryab和Hsp70的轉(zhuǎn)錄水平，在熱應(yīng)激持續(xù)5 d時(shí)，Hsp60、Hsp70和Hsp90均呈現(xiàn)極顯著上調(diào)，這一結(jié)果也反映出HSP在細(xì)胞抵抗損傷過程中發(fā)揮著重要的作用。

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞遭受損傷時(shí)發(fā)生的重要生物學(xué)過程，本研究發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激條件下，HSP在調(diào)控細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要的作用，尤其是Hsp60、Hsp70和Hsp90家族。通過蛋白靶標(biāo)間互作分析和共表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)Hsp90AB1和Hsp90B1可以調(diào)控CDK1，Hsp90AB1和HspD1可以與CDK1共表達(dá)，影響細(xì)胞周期。Hsp90B1、DNAJC3和IGF1可以調(diào)控白介素6(interleukin 6，IL-6)，影響細(xì)胞因子的表達(dá)，從而影響細(xì)胞凋亡。這一結(jié)果為探索HSP在抗熱應(yīng)激損傷的機(jī)制方面提供了理論依據(jù)。