駱小娟，龍先瓊，陳 輝

(1.湛江市第四人民醫(yī)院檢驗科，廣東 湛江 524000；2.湛江市第四人民醫(yī)院腫瘤科，廣東 湛江 524000)

癌胚抗原屬酸性糖蛋白，是一種靈敏度較高的血清腫瘤標記物，在胃癌、肺癌、大腸癌以及乳腺癌等癌癥中表達明顯，臨床常用于乳腺癌高危人群的篩選，可預測患者的5年生存率趨勢[1-2]。血管內(nèi)皮生長因子為一種促脈管生成因子，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關，幾乎所有實體腫瘤如乳腺癌、卵巢癌、胃癌、結(jié)直腸癌以及肝癌等的組織中血管內(nèi)皮生長因子的表達顯著升高[3-4]。已有的研究表明，癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展也有聯(lián)系密切，兩者在蛋白和RNA水平均在癌組織中高表達，且與乳腺癌的轉(zhuǎn)移相關，是乳腺癌預后的重要分子[5-6]。目前對乳腺癌中癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子表達的檢測多使用免疫組織化學染色和聚合酶鏈式反應技術，操作較為復雜，影響最終結(jié)果準確性的不可控因素較多。如能直接從患者血清檢測，將提高癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子在乳腺癌臨床中的應用。因此，本研究主要觀察了乳腺癌患者癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平及其治療前后的變化，并探討兩者與乳腺癌臨床病理學特征的關系，為癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子的臨床應用提供更多可參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料：篩選我院2017年3月～2019年3月收治原發(fā)浸潤性乳腺癌女性患者75例為乳腺癌組，年齡52～70歲，平均(59.44±8.30)歲；病理類型：浸潤性導管癌、浸潤性小葉癌、黏液性腺癌分別為40例、33例、2例；TNM 分期：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為10例、34例、27例、4例；選擇同期在我院進行健康體檢且無乳腺疾病的女性50例為對照組，年齡50～65歲，平均(58.93±9.49)歲。兩組研究對象的年齡差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究的納入對象和過程均得到我院倫理委員會的同意。

診斷標準：乳腺癌診斷標準參照《乳腺腫瘤學》[7]擬定，且通過術后病理確診；乳腺癌臨床病理特征根據(jù)《乳腺癌臨床實踐指南》[8]擬定，標本經(jīng)過病理科醫(yī)師審核。

入組標準：①滿足以上乳腺癌診斷標準；②年齡為20～70歲的女性患者；③在就診之前未給予輔助性治療；④病歷資料完整；⑤初治患者；⑥腫瘤為單側(cè)、單發(fā)；⑦患者及其家屬對本研究知情，簽署《知情同意書》。

排除標準：①有乳腺癌病史者；②存在嚴重心臟、肝腎、自身免疫性等疾??；③存在其他類型腫瘤者；④炎性乳腺癌；⑤存在導管內(nèi)乳頭狀瘤等其他乳腺疾病。

1.2研究方法

1.2.1血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子含量檢測：①血清采集：抽取乳腺癌組和對照組研究對象的外周血于無菌干燥管內(nèi)，立即在4 ℃以3 000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，將上層血清收集冷藏備測。②主要試劑、儀器：癌胚抗原試劑盒由上海喬羽生物科技有限公司提供(批號為QY-VN5988)，血管內(nèi)皮生長因子試劑盒由上海晶抗生物工程有限公司提供(批號為JKSJ-2102)；檢測采取全自動定量繪圖酶標儀(型號為AT2010M367428，TECAN 公司)。③應用酶聯(lián)免疫吸附法進行檢測，參照以上試劑盒說明書給予具體操作：將采集的血清加入酶聯(lián)免疫試劑盒的96 孔板內(nèi)，體積100 μl/每孔，室溫處理2 h；移液器吸棄液體，不洗，每孔加試劑A(體積為100 μl)，室溫處理1 h；吸棄液體，采用洗脫液洗3次，2 min/次，吸干液體；每孔加試劑B(體積為100 μl)，室溫處理30 min；吸棄液體，采用洗脫液洗5次，2 min/次，吸棄液體；每孔加90 μl底物溶液，室溫處理20～25 min；每孔加入50 μl終止溶液，終止反應；在酶標儀上在450 nm波長下調(diào)節(jié)并讀取吸光度值。

1.2.2治療方法：根據(jù)《乳腺癌診療規(guī)范(2011年版)》[9]進行治療；臨床分期屬Ⅰ期、Ⅱ期、部分Ⅲ期且無手術禁忌者，進行乳腺癌改良根治術并在術后給予放化療；晚期乳腺癌者進行新輔助化療，如給予含蒽環(huán)類和(或)紫杉類藥物的化療方案。

2 結(jié)果

2.1兩組入院時血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平比較：入院時乳腺癌組患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 兩組入院時血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平比較

2.2乳腺癌患者治療后血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平比較：治療后，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平均顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表2。

表2 乳腺癌患者治療后血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平比較

2.3乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平與臨床病理參數(shù)的關系：乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平與患者的人表皮生長因子受體-2(HER-2)狀態(tài)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級有關(P<0.01)，而與年齡、腫瘤直徑無關(P>0.05)。見表3。

表3 乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平與臨床病理特征的關系

3 討論

乳腺癌早期癥狀隱匿，當患者確診時已進展至中晚期。探尋一種便捷、有效的乳腺癌早期篩查方法對該病的臨床診斷、治療具有重要的臨床價值[10]。目前臨床對乳腺癌常采取影像學觀察、血液檢測、病理學檢查等手段，其中病理學檢查技術操作復雜且有侵入性等特點，影像學檢測常出現(xiàn)假陰性體征[11]。血清學腫瘤標志物的測定已廣泛用于乳腺癌的臨床篩查，其效果也獲得越來越多的肯定[12-13]。

癌胚抗原是一種多糖蛋白復合物，通常存在于正常胎兒消化道內(nèi)皮細胞，含量甚少，患癌后大量增加，首先發(fā)現(xiàn)于結(jié)腸癌組織中，雖然癌胚抗原升高常見于胃腸道惡性腫瘤，但在乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中也明顯增加[14-15]。癌胚抗原可由腫瘤細胞分泌或脫落，或者機體對腫瘤反應而產(chǎn)生并進入到體液、組織，引起其高表達[16]。文獻報道了乳腺癌患者體內(nèi)癌胚抗原的表達顯著高于正常人群，癌胚抗原的表達程度對乳腺癌的早期診斷、病情監(jiān)測以及臨床預后評價具有重要臨床意義[5]。血管內(nèi)皮生長因子是腫瘤血管形成的血管生成因子，可特異性結(jié)合內(nèi)皮細胞表面受體，促進血管內(nèi)皮細胞分裂，增加血管的通透性，使得纖維蛋白原與血漿蛋白等外滲，從而引發(fā)腫瘤間水腫，形成細胞外基質(zhì)變化，進而加劇了腫瘤的轉(zhuǎn)移狀況[17-18]。血管內(nèi)皮生長因子也能夠促進間質(zhì)膠原酶、蛋白水解酶等的生成，間接促進血管的生成[18]。研究發(fā)現(xiàn)，浸潤性乳腺癌患者血管內(nèi)皮生長因子含量顯著高于健康女性，且與乳腺癌的轉(zhuǎn)移密切相關[19]。惡性腫瘤組織包括乳腺癌組織的血管內(nèi)皮生長因子高表達是一項臨床預后預測的獨立因子[20]。但也有學者認為血管內(nèi)皮生長因子水平與乳腺癌的臨床病理特征并不相關，能否作為臨床預后評價指標尚待驗證[21]。

本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子，取材、操作便捷，動態(tài)監(jiān)測的可實施強。研究結(jié)果顯示，入院時乳腺癌組患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子顯著高于對照組，表明癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子作為癌基因在乳腺癌患者血清中的水平升高；治療后，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平顯著降低，說明癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子能有效反映乳腺癌患者的治療效果。筆者的研究還發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平與患者的HER-2狀態(tài)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級有關，而與年齡、腫瘤直徑無關；以上結(jié)果再次證實了癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子可能在乳腺癌的病情發(fā)展和腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移中起到重要作用。

綜上所述，乳腺癌患者血清癌胚抗原與血管內(nèi)皮生長因子水平明顯升高，與HER-2狀態(tài)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學分級相關，可作為評價臨床療效的指標之一。