徐 慧，董昌武

原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)是臨床常見的心血管疾病，以體循環(huán)動(dòng)脈壓升高為主要病癥，病人長期處于高血壓狀態(tài)會(huì)引起心、腦、腎等靶器官的嚴(yán)重并發(fā)癥[1]。據(jù)報(bào)告，我國有1/3～1/2的心血管性死亡歸結(jié)于高血壓。如果血壓得不到有效控制，病人心血管事件風(fēng)險(xiǎn)將增加74%[2]。高血壓中最常見的中醫(yī)證型是肝陽上亢證[3]，一般而言，實(shí)則肝陽上亢，治以平肝潛陽，而天麻鉤藤飲即是平肝潛陽法經(jīng)典的代表方劑。天麻鉤藤飲可以降低血壓，改善高血壓引起的眩暈、頭痛等癥狀，還可以對(duì)高血壓腦出血病人起到神經(jīng)保護(hù)作用等[4-5]。另外，通過針刺自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)的耳甲、曲池穴，也可以顯著降低大鼠的血壓，尤以耳甲穴最為明顯[6]。但是，目前關(guān)于天麻鉤藤飲聯(lián)合針刺治療高血壓的研究較少，且限于臨床研究，有關(guān)其機(jī)制探討文獻(xiàn)報(bào)道較少。本研究擬觀察兩者聯(lián)合對(duì)SHR大鼠的降壓作用，并初步探討其可能存在的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SHR大鼠40只，雄性，12周齡，體質(zhì)量(230±10)g，購自北京維通利華動(dòng)物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0006。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)審核通過。

1.2 主要儀器和試劑 小動(dòng)物無創(chuàng)血壓測定儀(美國Kent公司生產(chǎn)，RZ-CODA)；電子天平(德國sartorius公司生產(chǎn)，BSA224S)； 冷凍離心機(jī)(美國Sigma公司生產(chǎn)，2-16PK)；神經(jīng)肽Y(Neuropeptide Y，NPY)大鼠酶聯(lián)免疫試劑盒(美國Cell Signaling Technologies公司生產(chǎn)，批號(hào)：11976)；內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)大鼠酶聯(lián)免疫試劑盒(Santa Cruz公司生產(chǎn)，批號(hào)：sc-45061)。天麻鉤藤飲組成：天麻9 g，鉤藤12 g(后下)，石決明18 g(先煎)，山梔9 g，黃芩9 g，川牛膝12 g，杜仲9 g，益母草9 g，桑寄生9 g，夜交藤9 g，茯苓9 g，購自安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組 使用隨機(jī)數(shù)字表法將40只SHR隨機(jī)分為4組：針刺組、天麻鉤藤飲組、針刺+天麻鉤藤飲組、模型組，每組10只。

1.3.2 干預(yù)方法 針刺組：針刺大鼠雙側(cè)耳甲穴(大鼠耳甲區(qū)，穿透至耳背的“降壓溝”位置)、足三里穴(后肢脛骨粗隆下方約5 mm處)、曲池穴(屈肘，肱骨外上髁內(nèi)側(cè)凹陷處)，垂直插入，順時(shí)針均勻提插捻轉(zhuǎn)，平補(bǔ)平瀉手法30 s，逆時(shí)針捻轉(zhuǎn)提出。針刺治療每日1次，療程為4周。天麻鉤藤飲組：天麻鉤藤飲制備后，按照10.26 g/kg劑量給藥，按1 mL/100 g大鼠(含生藥1 g/mL)的灌胃劑量，予水煎液灌胃，每日1次，連續(xù)4周。按照等量不等濃度的原則，不同組每只大鼠依其體質(zhì)量確定其灌胃。針刺+天麻鉤藤飲組：實(shí)施針刺和灌胃天麻鉤藤飲兩種方法聯(lián)合使用。模型組：與另外3組體質(zhì)量、周齡相同的大鼠，于相同環(huán)境和相同飼養(yǎng)方式下喂養(yǎng)致4周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，檢測相同指標(biāo)，作為對(duì)照。

1.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)測定

1.4.1 血壓檢測 大鼠37 ℃預(yù)熱，10～15 min后用小動(dòng)物無創(chuàng)血壓測定儀測量大鼠清醒狀態(tài)下尾動(dòng)脈收縮壓，測量3次，取其平均值作為該樣本的收縮壓，分別于治療前、治療2周和治療4周時(shí)進(jìn)行測定。

1.4.2 血清NPY、ET-1含量測定 將大鼠使用戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，取血后，將4 mL全血轉(zhuǎn)移至離心管中，4 ℃、3 000 r/min離心10 min，分離上清液，置于-20 ℃冰箱保存待測。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法定量測定血清中NPY和ET-1的含量，檢測方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書的操作步驟進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠血壓比較 治療前各組大鼠血壓比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療2周時(shí)天麻鉤藤飲組、針刺+天麻鉤藤飲組血壓較治療前下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療2周時(shí)針刺組血壓與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療4周時(shí)針刺組、天麻鉤藤飲組和針刺+天麻鉤藤飲組血壓較治療前均下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療2周時(shí)，天麻鉤藤飲組和針刺+天麻鉤藤飲組血壓均較模型組下降明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；針刺組血壓與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；針刺+天麻鉤藤飲組血壓較針刺組和天麻鉤藤飲組下降明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療4周時(shí)，針刺組、天麻鉤藤飲組和針刺+天麻鉤藤飲組血壓較模型組下降明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；天麻鉤藤飲組較針刺組血壓下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；針刺+天麻鉤藤飲組血壓較針刺組和天麻鉤藤飲組下降明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠血壓比較 (±s) 單位：mmHg

2.2 各組大鼠血漿NPY和ET-1水平比較 針刺組、天麻鉤藤飲組和針刺+天麻鉤藤飲組NPY水平較模型組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；天麻鉤藤飲組NPY水平低于針刺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；針刺+天麻鉤藤飲組NPY水平低于針刺組、天麻鉤藤飲組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。天麻鉤藤飲組和針刺+天麻鉤藤飲組ET-1水平低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；針刺組ET-1水平與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；天麻鉤藤飲組ET-1水平低于針刺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；針刺+天麻鉤藤飲組ET-1水平低于針刺組和天麻鉤藤飲組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 各組大鼠血漿NPY、ET-1水平比較 (±s) 單位：pmol/L

3 討 論

高血壓在中醫(yī)學(xué)中可歸于“眩暈”“頭痛”范疇。天麻鉤藤飲出自《中醫(yī)內(nèi)科雜病證治新義》，是治療肝陽上亢型高血壓的代表方劑，全方組合有補(bǔ)有瀉，上能平肝清熱，下能補(bǔ)腎活血，方中天麻、鉤藤等也具有直接降壓的作用。經(jīng)絡(luò)辨證分析，高血壓病多屬陽明經(jīng)證、厥陰經(jīng)證，通過調(diào)節(jié)陰陽、疏經(jīng)通絡(luò)可達(dá)到降壓目的。針刺可通過抑制交感神經(jīng)活動(dòng)、調(diào)控炎癥及免疫反應(yīng)、調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)等來發(fā)揮降壓作用[7]。本研究結(jié)果表明，天麻鉤藤飲和針刺均可以降低SHR的血壓水平，兩者聯(lián)合應(yīng)用降壓效果更加顯著。該兩種中醫(yī)治療方法聯(lián)合應(yīng)用相比于西藥，具有不良反應(yīng)較少、無明顯的藥物依賴性等優(yōu)勢。兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)降壓效果更加明顯，考慮兩者同時(shí)使用可能存在一定的協(xié)同作用。

本研究結(jié)果顯示，天麻鉤藤飲和針刺在降低血壓的同時(shí)降低了大鼠NPY和ET-1的水平，兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)NPY和ET-1的降低更加明顯。NPY是一種高效縮血管物質(zhì)，可直接作用于血管平滑肌細(xì)胞使血管收縮，對(duì)小動(dòng)脈有強(qiáng)烈收縮作用，并可加強(qiáng)其他縮血管物質(zhì)(如去甲腎上腺素等)的縮血管作用[8]，進(jìn)而引起血壓增高。ET-1也是一種強(qiáng)效的內(nèi)皮源性血管收縮劑，可以強(qiáng)烈地促進(jìn)細(xì)胞增殖的啟動(dòng)及推動(dòng)因子，可使血管平滑肌增生肥厚，促進(jìn)血管壁的增生和狹窄，進(jìn)而導(dǎo)致血壓增高[9-10]。

已有研究表明，通過針刺SHR大鼠的耳甲區(qū)，可以降低大鼠平均動(dòng)脈血壓和心率，抑制交感神經(jīng)活性[11]。當(dāng)交感神經(jīng)興奮后可通過節(jié)后神經(jīng)纖維釋放神經(jīng)遞質(zhì)使NPY釋放增加，進(jìn)而引起血管收縮的效應(yīng)[12]。ET-1在交感神經(jīng)系統(tǒng)中的調(diào)控不僅是通過局部神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，而且與神經(jīng)元的活動(dòng)有關(guān)[13]。提示如果抑制交感神經(jīng)的興奮性可使血清中NPY和ET-1的含量減少。天麻鉤藤飲能夠顯著降低高血壓病人的血壓，可能是通過降低NPY和ET-1而發(fā)揮作用[14-15]。因此，兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)降壓效果更加顯著，可能是因?yàn)樵诮档腕w內(nèi)NPY和ET-1的水平中產(chǎn)生了協(xié)同作用。

治療2周時(shí)針刺組血壓及ET-1水平與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療4周時(shí)血壓及NPY水平與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示針刺降壓達(dá)到一定效果需要時(shí)間的累積，NPY的變化在針刺降壓中起著更加重要的作用。單獨(dú)運(yùn)用針刺治療時(shí)ET-1水平的變化不明顯，但是針刺聯(lián)合天麻鉤藤飲比單獨(dú)運(yùn)用天麻鉤藤飲時(shí)ET-1水平下降更明顯，這也說明兩者之間存在協(xié)同作用。

綜上所述，天麻鉤藤飲聯(lián)合針刺治療原發(fā)性高血壓具有協(xié)同效應(yīng)，降壓效果顯著，其降壓機(jī)制與降低血清NPY和ET-1水平有關(guān)，交感神經(jīng)興奮性的改變可能參與了這一過程的調(diào)節(jié)。但是高血壓的病變涉及多器官、多系統(tǒng)的損害，血壓的調(diào)節(jié)也是一個(gè)復(fù)雜的過程，所以在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，有關(guān)天麻鉤藤飲聯(lián)合針刺對(duì)于靶器官的保護(hù)作用以及血壓調(diào)節(jié)與交感神經(jīng)的聯(lián)系等，仍是需要進(jìn)一步研究的方向。