潘道葦，向紅霞，陳舒雅，付慧曉，宛蕾

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 藥理學(xué)教研室，貴州 貴陽 550025；2.貴陽市第一人民醫(yī)院，貴州 貴陽 550002)

舒肝寧注射液為貴州省本土企業(yè)自主研制的民族藥品，對肝病的治療作用得到廣泛的認(rèn)可，其衍生于傳統(tǒng)名方張仲景之《茵陳蒿湯》，由茵陳、梔子、黃芩、板藍(lán)根、靈芝等提取物和植物單體成分組合構(gòu)成，提取物中含有多種有效成分，對降酶退黃有較好的臨床療效[1-3]。在臨床使用過程中，舒肝寧注射液比較容易發(fā)生輸液反應(yīng)，輕者為皮疹、瘙癢、畏寒、發(fā)熱，嚴(yán)重的可導(dǎo)致過敏性休克[4-5]。 舒肝寧注射液說明書中溶媒使用的是10%葡萄糖注射液，溶媒單一，難以滿足臨床的多元化要求需求，同時臨床上在舒肝寧注射液溶媒的使用中出現(xiàn)越來越多的超說明現(xiàn)象[6-7]。本實驗通過臨床上使用的最大劑量和最小劑量的舒肝寧注射液與臨床上常用的溶媒配伍后主要成分含量穩(wěn)定性的考察，為舒肝寧注射液的穩(wěn)定性和臨床合理用藥提供參考[8-11]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1儀器 Agilent 1290超高效液相色譜儀(Agilent公司)、FA1004N電子天平(上海菁海儀器有限公司)、GUTEL超聲儀(上海冠特超聲儀器有限公司)、WP-UP-IV-20微量無機除熱源型超純水機(四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司)、DK-93-IIA電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)。

1.1.2試藥 黃芩苷對照品(貴州迪大科技有限責(zé)任公司，批號為GZDD-0037，規(guī)格為20 mg，UPLC法測定純度≥95.5%)、梔子苷對照品(貴州迪大科技有限責(zé)任公司，批號為GZDD-0061，規(guī)格為20 mg，UPLC法測定純度≥98%)、0.9%氯化鈉注射液(貴州科倫藥業(yè)有限公司，批號為D18070409)、5%葡萄糖注射液(山東齊都藥業(yè)有限公司，批號為4B18021105)、10%葡萄糖注射液(貴州天地藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號為H18012712)，葡萄糖氯化鈉注射液(貴州科倫藥業(yè)有限公司，批號為D18051806)、舒肝寧注射液(貴州瑞和制藥有限公司，批號為20180414)、甲醇(色譜純，德國Merck公司)、磷酸(分析純，重慶川東化工集團有限公司)、純凈水(屈臣氏集團有限公司)。

1.2 方法

1.2.1對照品溶液的制備 精密稱定對照品梔子苷2.58 mg、黃芩苷20.00 mg置于10 mL的容量瓶中，分別加入甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻；精密吸取該溶液1.00 mL置于10 mL的容量瓶中，加入甲醇稀釋定容，搖勻即得梔子苷、黃芩苷濃度分別為25.8 μg/L、200.00 μg/L混合濃度。

1.2.2成品輸液的制備 舒肝寧注射液說明書用法用量規(guī)定每次10～20 mL，用10%葡萄糖注射液250～500 mL稀釋后靜脈滴注。根據(jù)臨床劑量分為最高濃度和最低濃度，取舒肝寧注射液2.0 mL分別加入0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液等臨床常用溶媒20 mL，即得最高濃度舒肝寧注射液成品輸液。取舒肝寧注射液2.0 mL分別加入0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液(5%、0.9%)等臨床常用溶媒100 mL，即得最低濃度舒肝寧注射液成品輸液。

1.2.3陰性對照溶液的制備 取茵陳提取物、黃芩苷、板藍(lán)根提取物、靈芝提取物適量，按其處方比例和工藝，缺少梔子苷的陰性對照溶液。取茵陳提取物、梔子提取物、板藍(lán)根提取物、靈芝提取物適量，按其處方比例和工藝，缺少黃芩苷的陰性對照溶液。

1.3 舒肝寧注射液UPLC測定方法的建立

1.3.1色譜條件 采用ACE Excel 2 C18Amide柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流動相為0.1%磷酸溶液(A)-甲醇(B)，梯度洗脫(0～1.33 min，20% B；1.33～3.33 min，20%～28% B；3.33～4.33 min，28%～35% B；4.33～5 min，35%～38%B；5～8 min，38%～43% B；8～16 min，43%～60% B；16～18 min，60%～20% B；18～20 min，16%～20%)，流速為0.2 mL/min；檢測波長為238 nm，柱溫為40 ℃，進(jìn)樣量為1.0 μL。

1.3.2專屬性試驗 取陰性對照溶液按“1.3.1”項下色譜條件進(jìn)樣，考察陰性溶液時對梔子苷或黃芩苷測定是否存在干擾。

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取“1.2.1”項下混合對照品溶液取樣0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、4.0 μL，將6個不同質(zhì)量濃度的樣品溶液，按“1.3.1”項下色譜條件進(jìn)行檢測，以對照品的進(jìn)樣量(X)對峰面積積分值(Y)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

1.3.4精密度試驗 精密吸取“1.2.1”項下混合對照品溶液1.0 μL，按“1.3.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，計算梔子苷、黃芩苷的RSD值，評估儀器的精密度。

1.3.5重復(fù)性試驗 按“1.2.2”項成品輸液配制方法配制低濃度舒肝寧注射液5%葡萄糖注射液成品輸液，各6份，測定峰面積，計算梔子苷、黃芩苷的平均含量及RSD值，評估方法的重復(fù)性。

1.3.6回收率試驗 分別精密量取已知含量舒肝寧注射液各1.0 mL(梔子苷546.44 μg/L，黃芩苷17.996 g/L)置于50 mL容量瓶中，各精密加入“1.2.1 ”項下混合對照品溶液2.0 mL，加實驗用水至刻度，搖勻，用0.22 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，按“1.3.1”項下的色譜分析條件，測定其待測成分的含量，計算回收率。

1.3.7不同濃度配伍溶液中梔子苷、黃芩苷的含量測定 取“1.2.2”項下的成品輸液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，在上述色譜條件下，分別在0、3、6、9 h時自動進(jìn)樣1.0 μL，測定其峰面積。計算梔子苷、黃芩苷的含量。

2 結(jié)果

2.1 配伍溶液中的梔子苷、黃芩苷的穩(wěn)定性考察

2.1.1色譜條件 舒肝寧注射液中梔子苷、黃芩苷色譜圖見圖1，其主峰分離度好，色譜條件良好，適用于梔子苷、黃芩苷的測定。

注：A為混合對照品，B為樣品；1為梔子苷對照品，2為黃芩苷對照品。

2.1.2專屬性試驗 在梔子苷、黃芩苷對照品色譜相應(yīng)的位置上無峰，表明陰性對照試驗無干擾。見圖2。

注：A為缺黃芩苷陰性樣品；B為缺梔子苷陰性樣品；1為梔子苷，2為黃芩苷。

2.1.3線性關(guān)系考察 以對照品的濃度X(mg/L)為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到梔子苷、黃芩苷回歸線方程分別為Y=6 829.7X+5.029(r=0.999 4)、Y=6 822X-22.38(r=0.999 9)，結(jié)果表明兩種待測成分在各自線性范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性范圍分別為2.58～103.20 mg/L、20.00～800.00 mg/L。

2.1.4精密度試驗 以峰面積計算梔子苷、黃芩苷含量，RSD分別為1.82%和2.06%，表明儀器精密度良好。

2.1.5重復(fù)性試驗 根據(jù)峰面積，測得梔子苷質(zhì)量濃度RSD為1.32%，黃芩苷質(zhì)量濃度RSD分別為1.68%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.6回收率試驗 梔子苷平均回收率為98.43%、RSD為1.48%。黃芩苷平均回收率為101.53%、RSD為2.88，均符合試驗要求。

2.1.7不同濃度配伍溶液中梔子苷、黃芩苷的含量 舒肝寧注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液(5%、0.9%)根據(jù)臨床用藥最高用藥濃度與最低用藥濃度進(jìn)行配伍，在室溫、室內(nèi)光條件下放置0、3、6、9 h，從表1可見，主要成分梔子苷、黃芩苷含量下降均不超過10%，所以舒肝寧注射液與0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液可以配伍，配伍較為穩(wěn)定。

表1 低濃度成品液梔子苷、黃芩苷的含量變化(n=3)

3 討論

本文利用UPLC測定舒肝寧注射液配伍液主要成分含量情況，參照相關(guān)文獻(xiàn)，采用甲醇-0.4%磷酸溶液的流動相系統(tǒng)，對不同的梯度洗脫條件下待測成分色譜峰的分離度、對稱性、拖尾因子、出峰時間以及色譜峰純度等多方面進(jìn)行了綜合比較，最終選用文中所用的梯度洗脫程序，在該條件下，供試品溶液中各成分的分離獲得較好效果。與傳統(tǒng)高效液相色譜法(HPLC)相比[12-13]，分析速度更快，靈敏度更高，更準(zhǔn)確，且消耗的溶媒更少，能更好的節(jié)約資源及成本，具有較大的應(yīng)用價值，為舒肝寧注射液的質(zhì)量控制提供依據(jù)[14-16]。

表2 高濃度成品液梔子苷、黃芩苷的含量變化(n=3)

舒肝寧注射液說明書中提及的溶媒僅為10%葡萄糖注射液，溶媒單一選擇受限，特別是對于糖尿病患者，一般不推薦使用葡萄糖注射液，所以一定程度上會限制舒肝寧注射液品種的使用[17-20]。本論文通過超高效液相測定高濃度、低濃度舒肝寧注射液在不同溶媒中置放9 h內(nèi)的黃芩苷、梔子苷的含量變化，并且對比成品液體的澄明液體，均表示有效成分含量、澄明度無明顯差異。對于普通患者，舒肝寧注射液選擇5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液作為溶媒在9 h內(nèi)均顯示穩(wěn)定狀態(tài)，但是為了避免超說明書用藥帶來的醫(yī)療風(fēng)險，還是建議盡可能的選擇10%葡萄糖注射液。對于糖尿病患者在使用舒肝寧注射液溶媒需要慎重選擇0.9%氯化鈉注射液，即使本試驗顯示此劑量范圍在4種溶媒中9 h內(nèi)主要有效成分含量變化較小。

近年來，中成藥注射液直接或者間接引起的藥物不良事件頻頻出現(xiàn)，中成藥注射液的靜脈配置液穩(wěn)定性的研究越來越成為熱點[21-25]。本文試驗通過對舒肝寧注射液配置液主要含量的穩(wěn)定性研究，為該藥的臨床用藥安全提供了一定的參考依據(jù)。