楊寶強

扶風(fēng)縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗科,陜西 寶雞 722200

肺結(jié)核是因結(jié)核分枝桿菌引起的肺部感染性疾病，以發(fā)熱、咳痰、咯血、胸痛等表現(xiàn)為主，具有高度的傳染性[1]。肺結(jié)核是目前全球性關(guān)注的公共衛(wèi)生問題，有數(shù)據(jù)統(tǒng)計，全球每年因肺結(jié)核死亡例數(shù)將近300萬，遠(yuǎn)超過艾滋病及瘧疾[2]。肺結(jié)核患者缺乏臨床表現(xiàn)，影像學(xué)多樣，容易與其他肺部疾病相混淆，存在較高的漏診率及誤診率，錯過最佳治療時機，危及患者生命安全。PCR技術(shù)是在上世紀(jì)90年代逐漸應(yīng)用于結(jié)核病臨床診斷，用于放大擴增特定的DNA片段分子生物學(xué)技術(shù)，作為生物體外特殊DNA復(fù)制，以此提高肺結(jié)核診斷準(zhǔn)確性。本研究特對肺結(jié)核患者采取PCR技術(shù)檢查，并與痰涂片進行比較，報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取符合本院入組條件的疑似為肺結(jié)核患者130例，來源于我院2017年6月至2019年6月期間收治的肺部疾病患者；其中男性患者72例，女性患者58例；年齡30～68歲，平均年齡(46.91±8.24)歲?；颊呒凹覍賹ρ芯烤唧w內(nèi)容知情，并自愿簽署研究同意書。

1.2診斷方法

1.2.1痰涂片檢驗：痰涂片抗酸染色鏡檢，分三次收集晨起深度咳嗽痰液，取黏痰涂抹在厚片進行抗酸染色試驗，抗酸染液(杭州天和微生物試劑有限公司提供)。抗酸染色，鹽酸乙醇分色，堿性美蘭復(fù)染，結(jié)核分枝桿菌呈紅色，而其他細(xì)菌或背景物質(zhì)屬于藍(lán)色。OLYMPUS-BX41型光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS公司生產(chǎn))，連續(xù)觀察不同的300個視野，陰性：視野內(nèi)未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；陽性：發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。

1.2.2PCR技術(shù)檢驗：收集患者晨起深咳后第一口痰液0.5mL，置入濃度為1mmol/L的氫氧化鈉溶液5μL內(nèi)，均勻混合，放置37℃環(huán)境內(nèi)，靜置40min。離心處理5min，10000r/min，對混合液進行離心，去除上清液，生理鹽水洗脫液進行洗脫。抽取胸水、血清各1mL，離心處理5min，10000r/min，再添加50μL裂解液內(nèi)，行沸水內(nèi)10min，離心處理5min，10000r/min，將15μL反應(yīng)液添加0.2μL Tap酶，混合均勻，再添加20μL石蠟油封頂，取5μL上清液進行添加，制作成TB-DNA模板。PCR擴增循環(huán)，共反復(fù)擴增35次，隨后取20mLPCR擴增液，行電泳技術(shù)檢驗。陽性：在紫外線下，PCR技術(shù)檢測存在橙黃色熒光帶160dp。

1.3觀察指標(biāo) (1)對比PCR技術(shù)與痰涂片對肺結(jié)核檢出率；(2)對比PCR技術(shù)與痰涂片檢驗敏感性、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 運用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件包處理研究數(shù)據(jù)。計數(shù)數(shù)據(jù)以百分比率(%)表示，采取2檢驗；P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1對比PCR技術(shù)與痰涂片對肺結(jié)核檢出率 經(jīng)臨床表現(xiàn)、實驗室指標(biāo)、影像學(xué)技術(shù)、細(xì)菌學(xué)檢驗等多種技術(shù)綜合診斷，102例患者確診為肺結(jié)核；PCR技術(shù)檢出率為73.85%(96/130)，痰涂片檢出率46.92%(61/130)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=18.586，P=0.000)。

2.2對比PCR技術(shù)與痰涂片檢驗敏感性、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值 PCR技術(shù)檢驗敏感性、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值高于痰涂片(P<0.05)，見表1。

表1 對比PCR技術(shù)與痰涂片檢驗敏感性、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值

3 討 論

臨床診斷肺結(jié)核時，其檢驗病理性多依賴于鏡下觀察典型結(jié)核結(jié)節(jié)，但以滲出為主的病變及典型結(jié)核結(jié)節(jié)，診斷難度較高。肺結(jié)核實驗室診斷傳統(tǒng)技術(shù)為痰培養(yǎng)，痰培養(yǎng)檢驗技術(shù)操作簡單，可在基層醫(yī)院快速開展，但難以區(qū)分結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌、死菌及活菌；同時痰培養(yǎng)檢驗對實驗室環(huán)境有較高要求，生物安全防范要求較為嚴(yán)格，培養(yǎng)周期耗費的時間長，臨床采用快速培養(yǎng)儀進行診斷，也難以滿足臨床診斷需求，漏診率及誤診率較高[3]。血清學(xué)試驗檢驗肺結(jié)核時，多是分離結(jié)核分枝桿菌特異性膜蛋白抗原，分離并發(fā)現(xiàn)血清內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌抗體，靈敏度較高，但其報道的假陽性率較高。尤其是患者多為菌陰肺結(jié)核，臨床表現(xiàn)的復(fù)雜多樣，影像學(xué)改變?nèi)狈μ禺愋裕斐煞谓Y(jié)核檢出率較低。

PCR技術(shù)的應(yīng)用，給肺結(jié)核診斷帶來新的希望。分子生物學(xué)技術(shù)作為診斷肺結(jié)核的新型技術(shù)，PCR技術(shù)作為代表性檢驗方法，結(jié)合各種分子標(biāo)記、基因擴增等多項技術(shù)以及堿基互補配對原理，可顯著提高PCR技術(shù)診斷特異性；同時利用基因擴增技術(shù)，不斷放大目標(biāo)核酸片段，能夠提高PCR技術(shù)檢驗的靈敏度[4-5]。本組研究中，PCR技術(shù)對肺結(jié)核檢出率73.85%高于痰涂片肺結(jié)核檢出率46.92，檢驗敏感性、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均高于痰涂片(P<0.05)。研究發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核患者采用PCR技術(shù)檢查，與痰涂片相比，具有較高的肺結(jié)核檢出率，更適用于肺結(jié)核早期診斷。PCR技術(shù)檢查肺結(jié)核時，且能反映患者臨床治療過程中結(jié)核分枝桿菌數(shù)量變化，可作為評估肺結(jié)核治療效果的主要手段。但PCR技術(shù)無法區(qū)別死菌與活菌，對治愈肺結(jié)核患者肺內(nèi)殘留結(jié)核桿菌，PCR技術(shù)檢驗仍存在陽性率，因此臨床檢驗時需結(jié)合其他技術(shù)進行判斷。

綜上所述，在肺結(jié)核患者早期診斷中，采取PCR檢驗，具有較高的檢測準(zhǔn)確性，靈敏度、特異度較高，操作簡單、快速準(zhǔn)確，值得臨床推廣應(yīng)用。