孔彬，劉曉霞

(新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團醫(yī)院藥學(xué)部，烏魯木齊 830002)

尼莫地平是1，4-二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，其主要作用為抑制血管平滑肌細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流，臨床上主要用于缺血性腦血管疾病、蛛網(wǎng)膜下腔出血、突發(fā)性耳聾及輕、中度高血壓等[1]。溶出度是口服藥品固體制劑的重要質(zhì)量指標(biāo)[2]，《中華人民共和國藥典》2015年版規(guī)定，尼莫地平片溶出度測定采用普通溶出儀，按照溶出度釋放度測定法(通則0931第二法)[3]。該藥物生產(chǎn)廠家較多，當(dāng)前我國國家藥品監(jiān)督部門開展的“國家仿制藥質(zhì)量一致性評價”工作[4-5]，要求國產(chǎn)與原研藥品生物等效，因此在模擬的胃腸道環(huán)境下，在各種溶出介質(zhì)中均具有相似的溶出度曲線[6-8]，這對于控制藥品工藝將起到重要作用。筆者在本研究采用光纖藥物溶出度實時測定儀(fiber-optic medicine dissolution process monitoring system-601，F(xiàn)ODT-601)測定[9]，以德國拜耳公司原研生產(chǎn)尼莫地平片為對照，隨機選取國內(nèi)6個廠家生產(chǎn)的尼莫地平片，按一致性評價原則采用水、pH值6.8磷酸鹽緩沖液、pH值1.2鹽酸、pH值4.5醋酸鹽緩沖液4種溶出介質(zhì)模擬胃腸道環(huán)境，雙波長法扣除輔料，無需濾過，通過FODT-601直接測定該藥物的吸光度，不用稀釋溶出液，減少人工環(huán)節(jié)和誤差，并通過儀器自動測定，實現(xiàn)原位、實時、直接獲得完整的溶出度曲線，計算f2因子，對相似性進行評價[10]，為仿制藥質(zhì)量一致性評價考察藥物溶出度提供檢測手段。

1 材料

1.1藥品與試劑 尼莫地平對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100270-200002，含量：100%)；尼莫地平片(A廠，拜耳醫(yī)藥保健有限公司，規(guī)格：每片30 mg，批號：BJ18197；B廠，產(chǎn)地：山西，規(guī)格：每片20 mg，批號：131245；C廠，產(chǎn)地：西安，規(guī)格：每片20 mg，批號：E1406009；D廠，產(chǎn)地：杭州，規(guī)格：每片20 mg，批號：140311；E廠，產(chǎn)地：河北，規(guī)格：每片20 mg，批號：023140204；F廠，產(chǎn)地：天津，規(guī)格：每片20 mg，批號：140403；G廠，產(chǎn)地：鄭州，規(guī)格：每片20 mg，批號：140402)。磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、冰醋酸、醋酸鈉、濃鹽酸均為分析純，水為純化水。

1.2儀器與設(shè)備 光纖藥物溶出度實時測定儀(型號：FODT-601，上海富科思生物技術(shù)發(fā)展有限公司)、電子分析天平(型號：AB135-S，梅特勒-托利多儀器公司，感量為0.01 mg)、真空脫氣儀(型號：ZKT-18，天大天發(fā)儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1溶出介質(zhì) ①水[含0.3%十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate，SDS)]；②pH值 1.2鹽酸溶液(含0.3%SDS)③pH值4.5醋酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)④pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)。

2.1.2對照品溶液 精密稱取尼莫地平對照品6.81，6.62，6.74，6.81 mg，分別置于100 mL量瓶中，使用4種溶出介質(zhì)分別溶解、稀釋至刻度，制成對照品溶液。精密量取濃度為68.1，66.2，67.4，68.1 μg·mL-1的尼莫地平對照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0，28.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，作為系列濃度溶液。

2.2專屬性考察 取濃度為34.2 μg·mL-1尼莫地平對照溶液在FODT-601的6個通道上在220～550 nm波長范圍內(nèi)掃描光譜。結(jié)果238 nm波長處吸光度符合測定要求，確定該測定波長，采用550 nm為參比波長，用雙波長法消除輔料干擾。

2.3線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.1.2”項系列溶液，進樣測定，以相對百分濃度(C)為縱坐標(biāo)，吸光度(A)為橫坐標(biāo)，進行溶出度實驗。相對百分濃度(C)范圍，水：20.43%～114.32%；pH值1.2鹽酸溶液：19.86%～111.23%；pH值 4.5醋酸鹽緩沖液20.22%～113.24%；pH值6.8磷酸鹽緩沖液20.43%～114.42%。線性曲線的回歸方程見表1～4。

表1 溶出介質(zhì)為水(含0.3%SDS)時的回歸方程

表2 溶出介質(zhì)為pH值1.2鹽酸溶液(含0.3%SDS)的回歸方程

表3 溶出介質(zhì)為pH值4.5醋酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)的回歸方程

2.4精密度實驗 取“2.1.2”項的對照品溶液，在FODT-601上24 h內(nèi)連續(xù)測定6次A值，結(jié)果A值RSD=0.68%(n=6)；連續(xù)測定6 d，結(jié)果A值RSD=1.13%(n=6)，說明該方法日內(nèi)精密度及日間精密度均為良好。

表4 溶出介質(zhì)為pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)的回歸方程

2.5回收率實驗 精密稱取尼莫地平藥粉適量(相當(dāng)于尼莫地平5 mg)，置100 mL量瓶中，用溶媒溶解稀釋至刻度，分別加入尼莫地平對照品約12.0，18.0，22.0 mg，配制成低、中、高濃度供試品溶液各3份，用溶媒稀釋至刻度，搖勻。同法制備其他3種溶媒的供試品溶液。分別在FODT-601上測定A值，代入標(biāo)準(zhǔn)方程，計算方法回收率。結(jié)果4種低、中、高濃度供試品溶液平均回收率為95.4%～102.3%，RSD為2.12%～3.52%(n=3)，說明該方法的準(zhǔn)確度較好。見表5。

2.6穩(wěn)定性實驗 量取溶出實驗過程中30 min時溶出液適量，分別于室溫放置0，4，8，12，24 h，在FODT-601上238 nm波長處掃描測定A值，24 h內(nèi)連續(xù)測定5次，測得吸光度的RSD=2.60%，表明該供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7溶出曲線測定 采用FODT-601，轉(zhuǎn)籃法，2 mm的測定探頭，溶媒900 mL，轉(zhuǎn)速：100 r·min-1，溫度：(37±0.5)℃，打開溶出儀監(jiān)測系統(tǒng)輸入溶出度測定參數(shù)，掃描空白溶液之后，在經(jīng)脫氣處理的溶媒中投入藥片，開始監(jiān)測：時間30 min。在4種溶媒里測定7個不同廠家的溶出曲線結(jié)果：原位在線監(jiān)測，每分鐘采樣1次，將7個廠家每個廠家12片藥片平均值匯總后，得到30 min內(nèi)平均溶出曲線，對4種不同溶媒中不同廠家藥片平均曲線比較，見圖1。同一廠家在不同溶媒中的平均溶出曲線比較見圖2。

結(jié)果表明：參比制劑A廠在4種溶媒中的實時溶出曲線及溶出百分率均>80%，但是在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出速度較快。B、C廠在4種溶出介質(zhì)中溶出百分率均小于<65%。D廠在4種不同溶媒中溶出曲線顯示：在pH值1.2鹽酸和水中溶出百分率<60%，pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出百分率均>60%，在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出速度較慢。E廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢較一致，在水中溶出速度較快，溶出百分率均<80%。F廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢不一致，溶出百分率均<70%。G廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢較一致，但溶出百分率均<70%。綜合以上得出：在4種溶媒中，6個廠家藥品終點溶出百分率均<80%，只有原研藥廠A廠的終點溶出百分率>80%。

表5 尼莫地平回收率實驗結(jié)果

A：水溶液；B.pH值6.8磷酸鹽緩沖液；C.pH值4.5醋酸鹽緩沖液；D.pH值1.2鹽酸溶液。

本研究用A廠作為參比制劑，將A廠溶出85%時間為Ta，取樣時間為1/4Ta，2/4Ta，3/4Ta，Ta，且溶出量超過85%取樣點不超過一個，第一個取樣時間點溶出量的(n=12)不超過20%，其余取樣點的RSD不超過10%。f2值見表6。

表6顯示，只有在水中，E、F與原研藥(參比制劑)比較后f2值大于50，與參比制劑A廠溶出曲線具有相似性，其余藥廠在4種溶出介質(zhì)中相似因子比較f2值均低于50，曲線與參比制劑無相似性。

圖2 不同廠家產(chǎn)品在不同溶媒的溶出曲線

表6 6個廠家與參比制劑比較的f2值

3 討論

描繪完整的溶出曲線可以反映藥物體外溶出行為，進一步判斷生產(chǎn)工藝是否符合規(guī)定。人體消化道體液的pH值全范圍(pH值1.2～6.8)差異較大，在不同pH值條件下藥物溶出不同會導(dǎo)致吸收效果有較大差異，仿制藥與原研藥多條特征溶出曲線對比后，盡可能一致，才能確?？诜腆w制劑對于不同患者均有較高的生物利用度[10]。本研究參照日本橙皮書及國家“仿制藥質(zhì)量一致性評價工作方案”指導(dǎo)原則中規(guī)定，在4種不同pH值模擬胃腸液中測定尼莫地平片的溶出曲線，用f2法進行相似性比較，在水中只有E、F兩廠f2值>50，與A廠溶出曲線相似，其余均無相似性。從結(jié)果可以看出，本研究實驗7個廠家藥品在4種溶出介質(zhì)中4溶出曲線的一致性較差，受試制劑與A廠參比制劑比較，在模擬人體各種胃腸液環(huán)境中體外溶出曲線相似性較低，還需引起注意，改善制劑工藝水平。

《中華人民共和國藥典》2015年版中規(guī)定[3]，在尼莫地平片測定溶出度時，普通溶出儀測定過程中，手工取液后濾過并稀釋，紫外分光光度計測定吸光度后再計算累積溶出百分率，當(dāng)終點結(jié)果符合要求后，還需手動擬合曲線。步驟復(fù)雜，并產(chǎn)生較多不必要人為實驗誤差。本研究采用“光纖藥物溶出度實時測定方法”測定溶出曲線[9]，采用雙波長法自動扣除輔料對測定的干擾，調(diào)節(jié)光程探頭測定吸光度，不需要稀釋，節(jié)省人工時間，減少人為誤差，實現(xiàn)原位、實時、測定獲得溶出曲線，軟件進行f2計算，獲得曲線相似性結(jié)果。數(shù)據(jù)來源真實、方便、準(zhǔn)確。

目前《中華人民共和國藥典》溶出度標(biāo)準(zhǔn)是單一介質(zhì)、測定終點溶出度及溶出限度來質(zhì)控藥品溶出度，很難全面評價一種劑型的仿制藥品的溶出曲線。為使患者服用不同廠家藥物的臨床療效一致，仿制藥必須與原研藥進行質(zhì)量對比和生物等效性研究[4]。仿制藥一致性評價不僅包括體內(nèi)生物等效性評價，也包括系統(tǒng)的藥學(xué)質(zhì)量評價[5]，多種溶出介質(zhì)下的溶出曲線測定能夠模擬口服制劑的體內(nèi)藥動學(xué)過程，是藥學(xué)質(zhì)量評價的重要過程。我國正在開展“仿制藥質(zhì)量一致性評價”工作，并規(guī)定指導(dǎo)原則及實施細(xì)則與方案，溶出度實驗的重要性已深入人心，且國家藥品審評中心也已制定強制性要求，目的就在于提升藥品的質(zhì)量與品質(zhì)。本研究采用的實驗方法以仿制藥一致性評價指導(dǎo)原則為根據(jù)，對仿制藥溶出曲線進行全面的研究，為提高我國藥品制劑水平提供新的技術(shù)方法。