韓磊 王書(shū)平

【摘 要】目的：探討下呼吸道病原體檢測(cè)中行恒溫核酸擴(kuò)增芯片法的應(yīng)用價(jià)值。方法：收集我院2019年6月至2021年6月108例下呼吸道感染患兒的病原體樣本，所有樣本病原體均給予恒溫核酸擴(kuò)增芯片法與細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)，痰涂片抗酸染色、RNA恒溫?cái)U(kuò)增，結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)運(yùn)用靜脈血γ干擾素釋放試驗(yàn)。結(jié)果：在108例樣本中，恒溫?cái)U(kuò)增芯片法檢出陽(yáng)性47例（占43.52%），其中32例僅有1種病原體，6例有2種病原體，4例有3種病原體，1例有4種病原體，1例有5種病原體。在10例結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本中，恒溫?cái)U(kuò)增芯片法均檢出陽(yáng)性，SAT-TB檢出陽(yáng)性7例，A·TB檢出陽(yáng)性3例，抗酸染色檢出陽(yáng)性4例。結(jié)論：恒溫核酸擴(kuò)增芯片法可同時(shí)檢出13種病原體，在流感嗜血桿菌與肺炎鏈球菌中恒溫核酸擴(kuò)增芯片法的檢出率顯著高于細(xì)菌培養(yǎng)，在結(jié)核分枝桿菌中恒溫核酸擴(kuò)增芯片法的陽(yáng)性檢出率顯著高于γ干擾素釋放試驗(yàn)與痰涂片抗酸染色，且恒溫核酸擴(kuò)增芯片法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果快速，在小兒下呼吸道感染診斷及指導(dǎo)臨床治療方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

【關(guān)鍵詞】下呼吸道感染；病原體檢測(cè)；恒溫核酸擴(kuò)增芯片法；陽(yáng)性檢出率

The application value of constant temperature nucleic acid amplification chip method in the detection of lower respiratory tract pathogens

Han Lei1， Wang Shuping2

1. Yinchuan maternal and child Health care Hospital， Yinchuan Ningxia 750001， China； 2. Maternal and child health care Hospital of Ningxia Autonomous Region， Yinchuan Ningxia 750001， China

【Abstract】Objective：To explore the application value of constant temperature nucleic acid amplification chip method in the detection of lower respiratory tract pathogens. Methods： Collecting pathogen samples from 108 children with lower respiratory tract infections in our hospital from June 2019 to June 2021. The pathogens in all samples were tested by constant temperature nucleic acid amplification chip method and bacterial culture method， acid-fast staining of sputum smear， constant temperature amplification of RNA， and venous blood interferon-gamma release test for detection of mycobacterium tuberculosis. Results： Among the 108 samples， 47 cases （43.52%） were positive by the constant temperature amplification chip method， of which 32 cases had only one pathogen， 6 cases had two pathogens， 4 cases had three pathogens， and 1 case had four pathogens， and 1 case has five pathogens. Among the 10 samples of Mycobacterium tuberculosis， the thermostatic nucleic acid amplification chip method was positive， 7 were positive for SAT-TB， 3 were positive for A？TB， and 4 were positive for acid-fast staining. Conclusions： The constant temperature nucleic acid amplification chip method can simultaneously detect 13 pathogens at the same time， the detection rate of the constant temperature nucleic acid amplification chip method in haemophilus influenzae and streptococcus pneumoniae is significantly higher than that of bacterial culture， and the positive detection rate of the constant temperature nucleic acid amplification chip method in mycobacterium tuberculosis is significantly higher than that of γ interferon release test and acid-fast staining of sputum smear，and the constant temperature nucleic acid amplification chip method has the advantages of simple operation and fast results， have unique advantages in the diagnosis of children’s lower respiratory tract infections and the guidance of clinical treatment.

【Key？Words】Lower respiratory tract infection； Pathogen detection； constant temperature nucleic acid amplification chip method； Positive detection rate

下呼吸道感染是兒科臨床較為常見(jiàn)的疾病類(lèi)型，也是導(dǎo)致患兒死亡的主要原因，早期確診并給予對(duì)癥治療是改善預(yù)后的關(guān)鍵所在。以往臨床常采用細(xì)菌培養(yǎng)法來(lái)明確病原菌感染類(lèi)型并指導(dǎo)臨床治療，但敏感性較低，且耗時(shí)長(zhǎng)，常會(huì)耽擱患者最佳治療時(shí)間而導(dǎo)致病情加重[1]。恒溫核酸擴(kuò)增芯片法是利用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增原理，可同時(shí)檢測(cè)多種病原菌，在下呼吸道感染診斷中具有敏感度高的特點(diǎn)[2]。鑒于此，本研究收集我院108例下呼吸道感染患兒的病原體樣本，探討恒溫核酸擴(kuò)增芯片法的應(yīng)用價(jià)值。

1.1 一般資料

收集我院2019年6月至2021年6月108例下呼吸道感染患兒的病原體樣本，所有患兒均經(jīng)臨床相關(guān)檢查確診，取痰液標(biāo)本且均滿足鱗狀上皮細(xì)胞在10/LP（低倍鏡視野）以?xún)?nèi)，多形核白細(xì)胞在25/LP以上，樣本量在6mL以上[3]，患兒家長(zhǎng)充分知情后自愿簽訂同意書(shū)，且排除合并其它感染性疾病、近2周內(nèi)應(yīng)用藥物治療及不愿配合本次研究者。其中男58例，女50例，年齡32天～8歲，平均年齡（4.32±0.57）歲。

1.2 儀器與試劑

RTisochipTM-A恒溫?cái)U(kuò)增微流控芯片核酸分析儀，博奧晶典芯片呼吸道病原菌核酸檢測(cè)試劑盒，血平板，VITEK2-Com-pact細(xì)菌鑒定藥敏儀，巧克力平板，微量移液器，離心管，麥康凱培養(yǎng)基，RNA恒溫?cái)U(kuò)增結(jié)核分枝桿菌核酸試劑盒（SATTB），抗酸染色試劑，革蘭染色試劑，結(jié)核分枝桿菌特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測(cè)試劑盒（A·TB）。

1.3 方法

痰標(biāo)本進(jìn)行初篩確保合格后接種血平板、巧克力平板培養(yǎng)24h或48h，培養(yǎng)條件：溫度控制在35℃，CO2濃度為5%，分純后鑒定致病菌。按照博奧晶典芯片呼吸道病原菌核酸檢測(cè)試劑盒提取核酸，完成加樣、檢測(cè)，最后判斷結(jié)果。根據(jù)SAT-TB說(shuō)明書(shū)完成SAT-TB檢測(cè)，根據(jù)A·TB說(shuō)明書(shū)完成結(jié)核分枝桿菌γ干擾素釋放試驗(yàn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（χ±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1 恒溫核酸擴(kuò)增芯片法檢測(cè)結(jié)果分析

在108例樣本中，檢出陽(yáng)性47例（占43.52%），其中32例僅有1種病原體，6例有2種病原體，4例有3種病原體，1例有4種病原體，1例有5種病原體。病原菌種類(lèi)：流感嗜血桿菌（16株），肺炎鏈球菌（13株），銅綠假單胞菌（12株），結(jié)核分枝桿菌（13株），肺炎克雷伯菌（12株），金黃色葡萄球菌（8株），嗜麥芽窄食單胞菌（5株），大腸埃希菌（5株），鮑曼不動(dòng)桿菌（1株），衣原體（1株）。

2.2 細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果分析

在108例樣本中，檢出陽(yáng)性12例（占11.11%），病原菌種類(lèi)：流感嗜血桿菌（4株），肺炎鏈球菌（1株），銅綠假單胞菌（5株），大腸埃希菌（1株），鮑曼不動(dòng)桿菌（1株）。

2.3 不同檢測(cè)方法在結(jié)核分枝桿菌中的檢測(cè)情況分析

在10例結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本中，恒溫?cái)U(kuò)增芯片法均檢出陽(yáng)性，SAT-TB檢出陽(yáng)性7例，A·TB檢出陽(yáng)性3例，抗酸染色檢出陽(yáng)性4例，見(jiàn)表1。

細(xì)菌培養(yǎng)法是感染性疾病常用的檢測(cè)方法，但其敏感性低，檢測(cè)周期長(zhǎng)，常難以滿足肺部感染治療的要求。恒溫?cái)U(kuò)增芯片是基于環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增原理檢測(cè)常見(jiàn)肺炎病原體，該芯片可同時(shí)檢測(cè)13種病原體并可篩選耐甲氧西林葡萄球菌的mecA基因，且檢測(cè)周期短，從痰標(biāo)本處理到出檢測(cè)結(jié)果僅需2h，且敏感度高，顯著彌補(bǔ)了常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)法的不足[4]。本研究結(jié)果表明，在108例樣本中，恒溫?cái)U(kuò)增芯片法檢出陽(yáng)性47例（占43.52%），共檢出病原菌10種，而細(xì)菌培養(yǎng)法檢出陽(yáng)性12例（占11.11%），共檢出病原菌5種。提示恒溫?cái)U(kuò)增芯片法在病原菌分布與陽(yáng)性檢出率方面也存在明顯差異性。檢測(cè)結(jié)果可能與痰標(biāo)本被口腔污染或?qū)嶒?yàn)室檢測(cè)條件有限有關(guān)，而恒溫?cái)U(kuò)增芯片法更能反映呼吸感染的真實(shí)病原[5]。結(jié)果還表明，在10例結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本中，恒溫?cái)U(kuò)增芯片法均檢出陽(yáng)性，SAT-TB檢出陽(yáng)性7例，A·TB檢出陽(yáng)性3例，抗酸染色檢出陽(yáng)性4例。恒溫?cái)U(kuò)增芯片法與SAT-TB檢測(cè)能力相當(dāng)，A·TB檢測(cè)能力較低。淋巴細(xì)胞不足或活性降低將影響干擾素能力而導(dǎo)致假陰性[6]。恒溫?cái)U(kuò)增芯片法還可檢測(cè)衣原體、肺炎支原體及軍團(tuán)菌，但病程滿足2周左右才可在血清中出現(xiàn)相應(yīng)抗體，診治價(jià)值有限[7]。

綜上所述，恒溫核酸擴(kuò)增芯片法可同時(shí)檢出13種病原體，在流感嗜血桿菌與肺炎鏈球菌中恒溫核酸擴(kuò)增芯片法的檢出率顯著高于細(xì)菌培養(yǎng)，在結(jié)核分枝桿菌中恒溫核酸擴(kuò)增芯片法的陽(yáng)性檢出率顯著高于γ干擾素釋放試驗(yàn)與涂片抗酸染色，且恒溫核酸擴(kuò)增芯片法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果快速，在小兒下呼吸道感染診斷及指導(dǎo)臨床治療方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

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