李苑瑛 薛 艷 黃雪梅

細(xì)胞凋亡抑制蛋白(cIAP-1)能夠參與到上皮細(xì)胞的凋亡調(diào)控過程中，顯著促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性擴(kuò)增[1]；組蛋白去甲基化酶(NDY-1)是甲基化的修飾因子，通過對(duì)癌細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄基因的甲基化修飾作用，影響癌細(xì)胞的增殖速度，使癌細(xì)胞的分化成熟發(fā)生障礙[2]。有研究指出cIAP-1或者NDY-1與乳腺癌或者甲狀腺癌等惡性腫瘤有著密切的關(guān)系[3]，但是與卵巢癌的相關(guān)性研究卻不多。本文主要研究cIAP-1、NDY-1與卵巢癌的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集我院在2017年1月至2020年2月期間保存的上皮性卵巢癌組織標(biāo)本67例，患者年齡34～63歲，平均年齡(52.0±0.4)歲，其中漿液性上皮癌32例、黏液性上皮癌21例、子宮內(nèi)膜樣上皮癌14例；同時(shí)選取36例卵巢良性腫瘤組織，年齡31～67歲，平均年齡為(51.5±1.0)歲；40例正常卵巢組織，年齡30～66歲，平均年齡為(52.1±0.5)歲。研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理組織學(xué)確診；②術(shù)前未經(jīng)放化療等手段進(jìn)行治療；③患者本人及家屬知情并同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床病歷資料不全者。

1.2 檢驗(yàn)方法

將所有組織標(biāo)本切片處理，用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法(strep avidin-biotin complex，SABC法) 染色法進(jìn)行染色，用二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)進(jìn)行顯色。cIAP-1、NDY-1蛋白則采用通用型二抗、SP試劑盒以及DAB顯色盒(由北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn))。陽性及陰性對(duì)照則以陽性片及PBS代替一抗，并在高倍顯微鏡下觀察cIAP-1、NDY-1蛋白的表達(dá)情況，同時(shí)嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書嚴(yán)格操作。

1.3 療效判定

cIAP-1主要在胞質(zhì)中表達(dá)，NDY-1主要在細(xì)胞核中表達(dá)，為淡藍(lán)色背景下黃色或棕黃色團(tuán)塊樣染色物質(zhì)；采用半定量積分法對(duì)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：0分為無著色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；陽性細(xì)胞比例評(píng)分為：1分為≤25%，2分為>25%～50%，3分為>50%～75%，4分為>75%。其中染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例得分之積，陽性表達(dá)為≥4分，陰性表達(dá)為<4分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究所得數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0軟件包，得到的計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearson秩相關(guān)，當(dāng)P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各卵巢組織cIAP-1、NDY-1表達(dá)比較

上皮性卵巢癌組織cIAP-1、NDY-1陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織和卵巢良性腫瘤組織(χ2=62.363、43.919，35.179、20.541，P均<0.05)；卵巢良性腫瘤組織cIAP-1、NDY-1陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織(χ2=4.736和4.133，P均<0.05)。見表1。

表1 各卵巢組織cIAP-1、NDY-1表達(dá)比較(例，%)

2.2 cIAP-1、NDY-1表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理關(guān)系

中低分化患者cIAP-1和NDY-1陽性表達(dá)率明顯高于高分化患者(P<0.05)；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者NDY-1陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)。見表2。

表2 cIAP-1、NDY-1表達(dá)上皮性卵巢癌臨床病理關(guān)系(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

上皮性卵巢癌組織cIAP-1和NDY-1表達(dá)呈正相關(guān)(γs=0.724，P<0.05)，見表3。

表3 相關(guān)性分析

3 討論

臨床上卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞的持續(xù)性惡變，能夠?qū)е侣殉舶┑陌l(fā)生，特別是在合并有雌激素受體敏感性改變的群體中，卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)可進(jìn)一步上升，遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)率和病死率也明顯提高[4-5]。臨床上手術(shù)治療或者綜合性的放化療均對(duì)卵巢癌的治療有著重要的作用，但是生存時(shí)間仍然較短，3年內(nèi)的病死率仍然較高[6-7]，預(yù)后極差。卵巢癌的高侵襲性是預(yù)后較差的原因之一。惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中，有多種因素的參與，抑癌與促癌基因的失衡導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生，而與細(xì)胞增殖、遷徙能力有關(guān)的多種細(xì)胞因子的表達(dá)及協(xié)同作用共同決定了腫瘤的生物學(xué)特性。不同的腫瘤相關(guān)蛋白均能夠通過對(duì)于癌細(xì)胞的生物學(xué)特征的影響，進(jìn)而促進(jìn)早期惡性腫瘤的發(fā)生。cIAP-1是細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白，具有穩(wěn)定癌細(xì)胞染色體末端端粒結(jié)構(gòu)的功能，可以抑制癌細(xì)胞的凋亡，促使癌細(xì)胞的侵襲和浸潤能力的明顯增強(qiáng)。同時(shí)cIAP-1的表達(dá)上升能夠提高癌細(xì)胞G1/S期的細(xì)胞比例，促進(jìn)癌細(xì)胞快速跨越G0期[8]；NDY-1是甲基化的修飾因子，能夠通過對(duì)癌轉(zhuǎn)錄基因的修飾作用，促進(jìn)癌細(xì)胞上游轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的激活，導(dǎo)致癌細(xì)胞DNA持續(xù)性擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)增加[9]。此外NDY-1對(duì)于卵巢上皮細(xì)胞有一定的修飾作用，還可以提高癌細(xì)胞的變形能力，促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散[10]。

本次研究通過免疫組化方法檢測了cIAP-1、NDY-1在卵巢癌患者中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在卵巢良性腫瘤或者卵巢癌患者中，cIAP-1、NDY-1的表達(dá)陽性率均明顯的上升，其中卵巢癌患者中的cIAP-1、NDY-1表達(dá)上升更為明顯，提示cIAP-1、NDY-1能夠顯著影響卵巢上皮病變過程。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要與cIAP-1、NDY-1的下列幾個(gè)作用有關(guān)[11-12]：①cIAP-1的上升可以抑制癌細(xì)胞的凋亡速度，同時(shí)提高了癌細(xì)胞對(duì)患者基膜組織的浸潤能力，還能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞浸潤臨近正常盆腔組織；②NDY-1的上升能夠?qū)е掳┘?xì)胞轉(zhuǎn)錄活性的上升，增強(qiáng)癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換的能力。此外黃華藝[13]的研究也發(fā)現(xiàn)，cIAP-1的表達(dá)濃度在卵巢癌患者中可平均上升30%以上，尤其是在那些合并有明顯高腫瘤負(fù)荷表現(xiàn)或者遠(yuǎn)期病死率較高的患者中表達(dá)的更加明顯。采用免疫組化染色分析發(fā)現(xiàn)，cIAP-1、NDY-1主要表達(dá)于癌細(xì)胞的細(xì)胞間質(zhì)中，尤其是在細(xì)胞異型性較為明顯的區(qū)域，cIAP-1、NDY-1的染色強(qiáng)度更深。在探討cIAP-1、NDY-1的表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征的相關(guān)性研究中，可以發(fā)現(xiàn)在癌細(xì)胞分化程度較差的患者中，cIAP-1、NDY-1的表達(dá)陽性率較高，其中NDY-1的表達(dá)還能夠進(jìn)一步提高患者的臨床分期，提示了cIAP-1、NDY-1對(duì)于卵巢癌臨床病理特征的影響，這主要由于cIAP-1、NDY-1能夠?qū)е侣殉舶┘?xì)胞分化成熟障礙；同時(shí)NDY-1的表達(dá)還能夠促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)于盆腔內(nèi)其他組織器官的侵襲，增加了卵巢癌的臨床分期。此外本次研究中并未發(fā)現(xiàn)cIAP-1、NDY-1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，因此推測cIAP-1、NDY-1的表達(dá)并不能影響癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)的粘附能力。相關(guān)關(guān)系分析也可見，cIAP-1、NDY-1的表達(dá)呈現(xiàn)出顯著的正性相關(guān)關(guān)系，提示了cIAP-1、NDY-1可能在促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生過程中具有一定的內(nèi)在關(guān)聯(lián)。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了cIAP-1、NDY-1的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系。綜上所述，cIAP-1、NDY-1在卵巢癌中的呈高表達(dá)，與癌細(xì)胞分化和腫瘤分期具有一定相關(guān)性，其可能通過某種機(jī)制相互調(diào)節(jié)，共同促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生及腫瘤的進(jìn)展。