張運輝，周小青，伍大華，楊夢琳，鄭彩杏，童天昊

1湖南中醫(yī)藥大學；22011數(shù)字中醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新，長沙 410208；3重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W校中醫(yī)學院，重慶 404120；4湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，長沙 410006

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)多發(fā)生于老年和老年前期，是一種以進行性記憶力喪失、認知功能下降、精神行為功能障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變[1]，是當今全球醫(yī)學界研究的重點之一[2]。隨著全球老齡化進程加快，AD患病數(shù)逐年增加，今后將以每20年遞增1倍的速度增加，預計到2050年全世界AD患者將達1.315億，嚴重威脅著老年人的健康與生命安全，同時給社會和家庭帶來沉重的經(jīng)濟負擔[3,4]。目前美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準上市的抗AD藥物主要是N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體阻滯劑和乙酰膽堿酯酶(ACHE)抑制劑，但由于上述兩類藥物作用靶點廣泛，雖可適度改善患者的癥狀，但仍不能根治、逆轉(zhuǎn)AD的發(fā)展，且長期服用會引起嚴重的副作用[5]。目前，越來越多的學者關(guān)注中藥及其活性成分抗AD效應(yīng)，中醫(yī)藥具有整體性和多樣性的特點，可發(fā)揮多成分、多層次、多環(huán)節(jié)、多靶點、雙向調(diào)節(jié)的綜合作用，且毒性明顯小于化學藥，與AD發(fā)病機制的復雜性和綜合性的特征非常契合。

大黃始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是蓼科植物藥用大黃、唐古特大黃、掌葉大黃的干燥根和根莖，性寒,味苦，歸脾、胃、大腸、肝、心經(jīng)。具有瀉下攻積、清熱瀉火、解毒、活血祛瘀之效。中醫(yī)對AD的病機認識，認為“腦消髓減”為疾病基礎(chǔ)，“痰瘀阻絡(luò)”為標，近年更發(fā)展AD的“毒損腦絡(luò)”的病機。Wang等[6]實驗研究發(fā)現(xiàn)，(1)AD大鼠伴有腸源性內(nèi)毒素，其腦組織及血漿中TNF-α、IL-lβ、IL-10含量明顯高于對照組(P<0.05)，說明可能腸源性內(nèi)毒素參與了AD的病理反應(yīng)過程，促成慢性炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng)；(2)AD模型大鼠血腦屏障下降，通透性增高，使得正常情況下不能通過血腦屏障的內(nèi)毒素進入腦內(nèi)，引發(fā)局部炎癥；研究結(jié)果提示腸源性內(nèi)毒素在AD形成中有重要作用。大黃具有“以通為補”的作用，并能通腑降濁、活血祛瘀、清熱解毒，有“蕩滌腸胃”、“推陳致新”的作用，減少體內(nèi)腸源性內(nèi)毒素的集聚，能針對AD“腦消髓減、痰瘀阻絡(luò)、毒損腦絡(luò)”的病機，可以很好的運用于認知功能的改善。因此，深入探討大黃的作用靶點，分析其可能抗AD的作用機制，對于闡述大黃的科學內(nèi)涵具有重要作用。

網(wǎng)絡(luò)藥理學可研究藥物、靶標和疾病之間的關(guān)系，可通過整合中藥化學成分、疾病靶標構(gòu)建“化學成分-作用靶標-疾病靶標-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)[7]”，將相互作用關(guān)系可視化為網(wǎng)絡(luò)模型，并從分子層面和整體的角度研究藥物對生物網(wǎng)絡(luò)的影響。本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學方法，構(gòu)建有效成分-靶標作用網(wǎng)絡(luò)，結(jié)合體外細胞實驗深入探討大黃治療AD的作用機制，為今后治療AD中藥研究提供方向和思路。

1 材料與方法

1.1 大黃有效成分及其靶點的篩選

以“Radix et Rhizoma Rhei”為關(guān)鍵詞，從TCMSP數(shù)據(jù)庫(中藥系統(tǒng)藥理學分析平臺，http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)查詢大黃的有效成分，本研究基于ADME(藥物吸收、分布、代謝、排泄)模型，運用OBioavail 1.1來預測有效成分的口服利用度(oral bioavailability，OB)，對大黃的化學成分進行OB和類藥性(drug likeness，DL)篩選，并設(shè)置OB≥30%及DL≥18%作為篩選條件[8]。最后，使用Uniprot數(shù)據(jù)庫并借助Perl語言，將靶點的“蛋白名(protein name)”統(tǒng)一轉(zhuǎn)換為“基因名(genename)”，得到的信息用于后續(xù)的網(wǎng)絡(luò)藥理學數(shù)據(jù)分析。

1.2 AD疾病相關(guān)基因檢索

在Drugbank數(shù)據(jù)庫(https//www.drugbank.ca/)、Dis Ge NET數(shù)據(jù)庫(http//www.disgenet.org/)和TTD數(shù)據(jù)庫(https//bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/)中篩選治療阿爾茨海默病的相關(guān)靶點，以“Alzheimer”為檢索關(guān)鍵詞，并對檢索到的靶點進行處理，之后將三個數(shù)據(jù)庫重復項去除從而獲得最終的疾病靶點。

1.3 大黃有效成分與AD共同靶點篩選及PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將大黃有效成分的相關(guān)靶點和AD的靶點導入OmicShare平臺(https://www.omicshare.com/)找出大黃有效成分與AD的交集靶點，再將這些交集靶點導入到STRING數(shù)據(jù)庫，選擇物種為“Homo sapiens”(人源)進行操作，最小相互作用閥值設(shè)為“medium confidence=0.4”，得到蛋白互作PPI網(wǎng)絡(luò)，即“大黃-靶點-阿爾茨海默病”網(wǎng)絡(luò)。

1.4 關(guān)鍵靶基因的篩選

應(yīng)用Cytoscape 3.7.1軟件對PPI網(wǎng)絡(luò)進行拓撲屬性分析，計算PPI網(wǎng)絡(luò)整體的點度中心性(degree centrality，DC)、接近中心性(closeness centrality，CC)和中介中心性(betweenness centrality，BC)”，以betweenness、closeness和degree的均數(shù)為“閾值”，選取betweenness、closeness和degree同時在閾值之上的靶點為“關(guān)鍵靶基因”，明確PPI網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵靶基因。

1.5 關(guān)鍵靶基因的代謝通路與生物過程分析

為進一步研究大黃抗AD的作用情況，采用Metascape平臺對大黃的AD靶點群進行KEGG代謝通路富集分析，研究大黃靶點的主要抗AD代謝通路；再進行GO生物過程富集分析，詮釋大黃靶點的抗AD生物過程，Metascape的平臺列表與背景均選擇“Homo Sapiens”(人源)進行操作。篩選出AD與大黃有效成分相關(guān)性前20的分子功能和前10的信號通路。

1.6 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將大黃有效成分、對應(yīng)靶點導入Cytoscape 3.7.1構(gòu)建大黃有效成分-基因靶點網(wǎng)絡(luò)。

1.7 體外驗證實驗

1.7.1 細胞與試劑

大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜絡(luò)細胞瘤細胞株P(guān)C12細胞(長沙贏潤生物技術(shù)有限公司)；Aβ25-35(美國Sigma公司)；谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(均購自南京建成生物研究所)；ELISA測定試劑盒、生化試劑(南京建成生物研究所)；Annexin-V/PI凋亡檢測試劑盒(晶美公司)；PI3K、Akt、Nrf2、HO-1、NF-κBp65引物合成(由上海生工生物工程有限公司提供)；TB Green Premix Ex Taq PCR試劑盒(TAKARA公司);總RNA抽提試劑(Trizol)(寶生物工程(大連)有限公司)；DMEM細胞培養(yǎng)液(默飛世爾生物化學制品(北京)有限公司)；10%新生小牛血清(Hyclone Lab)；PBS(北京索萊寶科技有限公司)；FBS(吉泰遠成生物科技有限公司)。大黃，購自湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，經(jīng)鑒定為蓼科植物大黃的干燥塊根，取100 g經(jīng)水提、蒸發(fā)、濃縮至不流動的清膏，使用時稱取適量，溶解，過濾膜除菌后于-20 ℃保存。

1.7.2 細胞培養(yǎng)及分組干預

PC12細胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)基(含10% FBS、1% P/S)，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，細胞貼壁后取對數(shù)生長期細胞，分為5組。對照組：加入不含 FBS、P/S的DMEM中孵育24 h；模型組：予Aβ25-35(20 μmol/L)孵育24 h[9]；大黃低劑量組(1 mg/mL)、大黃中劑量組(2 mg/mL)、大黃高劑量組(4 mg/mL)孵育24 h。

1.7.3 MTT比色法檢測細胞存活率

將5×MTT用稀釋液稀釋成1×MTT溶液；每孔加50 μL 1×MTT溶液，37 ℃孵育4 h；棄上清液，每個孔加入200 μLDMSO，在平板搖床上搖2～3分鐘使其均勻。酶標儀在570 nm波長處檢測每個孔PC12細胞的吸光度值。

根據(jù)公式計算PC12細胞的存活率：

100%

1.7.4 ELISA檢測PC12細胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量

PC12細胞以1×107接種于96孔板中，100 μL/孔，當80%融合時，分別給予各組處理因素，每組3個復孔。按實驗要求處理完成后，收集上清液留作待測標本。采用酶聯(lián)免疫吸附測定進行檢測，按照 ELISA測定試劑盒的說明進行操作。

1.7.5 比色法檢測PC12細胞培養(yǎng)上清SOD、GSH-Px和MDA

冰上裂解細胞，離心，取上清，制成樣品溶液，按谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒說明書操作，檢測各項指標。

1.7.6 流式細胞儀檢測PC12細胞凋亡率

按凋亡檢測試劑盒說明操作，培養(yǎng)的PC12細胞經(jīng)不含乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)的胰酶消化處理,冰上裂解、離心收集細胞,沉淀加入結(jié)合緩沖液后加入FITC-AnnexinV和PI,室內(nèi)避光孵15 min后流式細胞儀檢測10 000個細胞,用凋亡分析軟件計算PC12細胞凋亡率,每一時相點重復檢測5次。

1.7.7 熒光定量法檢測PC12細胞上清PI3K、Akt、Nrf2、HO-1、NF-κB p65 mRNA表達

采用Trizol抽提各組總RNA，超微量核酸檢測儀測定總RNA濃度，利用Ta Ka Ra試劑盒根據(jù)說明書逆轉(zhuǎn)為cDNA，SYBR Premix Ex Taq II 10 μL、上下游引物各1μL、DNA模板2 μL、雙蒸水6 μL，共20 μL，混合均勻，進行逆轉(zhuǎn)錄，將得到的c DNA產(chǎn)物根據(jù)試劑盒說明書配制如下反應(yīng)體系：預變性95 ℃、30 s；PCR反應(yīng)95 ℃、5 s，60 ℃、30 s，72 ℃、15 s，反應(yīng)重復35個循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法分析基因表達量。引物序列見表1。

1.7.8 統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，采用SPSS 24.0軟件做統(tǒng)計分析，組間差異比較用單因素方差分析統(tǒng)計，方差齊者用LSD檢驗(方差不齊者先將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后使之方差齊)，P<0.05有統(tǒng)計學意義。

表1 引物序列

2 結(jié)果

2.1 大黃有效成分的篩選

如表2所示，本研究共篩選出大黃中含有的17個有效成分(M1～M17)。

表2 大黃有效成分

2.2 有效成分-基因靶點網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將篩選后的17個有效成分及276個相關(guān)靶點導入 Cytoscape 3.7.1構(gòu)建“大黃有效成分-基因靶點網(wǎng)絡(luò)”(圖1)。17個紅色菱形表示大黃的活性成分，276個綠色三角形為活性成分作用靶點，共有1 211條邊代表靶點和化學成分之間的相互作用， 體現(xiàn)了大黃多成分、多靶點的特點。

圖1 大黃有效成分-基因靶點網(wǎng)絡(luò)Fig.1 The gene target network of the effective components of Radix et Rhizoma Rhei注：紅色菱形：大黃活性成分；綠色三角形：靶基因。Note:Red diamond:Active components of Radix et Rhizoma Rhei;Green triangle:Target gene.

2.3 阿爾茨海默病相關(guān)基因

在Drugbank、Dis Ge NET和TTD數(shù)據(jù)庫檢索AD的靶基因，共得到2 245個基因。

2.4 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建圖

在Drugbank、Dis Ge NET和TTD數(shù)據(jù)庫檢索AD的靶基因與大黃作用的靶基因有107個重復，這107個靶基因可能為大黃抗阿爾茨海默病的靶點。為研究各靶點在體內(nèi)的相互作用關(guān)系，尋找核靶點，將潛在靶點蛋白群進行PPI網(wǎng)絡(luò)分析(見圖2)，結(jié)果共發(fā)現(xiàn)107個靶蛋白發(fā)生相互作用，產(chǎn)生786條代表蛋白之間相互作用的邊。

圖2 靶蛋白 PPI 網(wǎng)絡(luò)圖Fig.2 PPI network diagram of target protein

2.5 核心靶點分析結(jié)果

Cytoscape 3.7.1計算得到，PPI網(wǎng)絡(luò)平均度值為14.32，平均介數(shù)為3.72×10-2，平均緊密度為0.67，度值、介數(shù)和緊密度均超過平均值的靶蛋白共8個，依次為APP、TNF、SOD2、CASP3、CASP7、BAX、Bcl-2、IL2，說明以上8個靶點在PPI網(wǎng)絡(luò)中處于關(guān)鍵位置，很可能是大黃抗AD的關(guān)鍵靶點。

2.6 Metascape分析的KEGG和GO結(jié)果

通過GO數(shù)據(jù)庫分析，大黃有效成分靶標與AD疾病靶標基因功能有炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)的負調(diào)節(jié)、MAPK活性的正調(diào)控、老化、記憶、調(diào)亡過程、神經(jīng)元凋亡過程的正調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導、cAMP生物合成過程、調(diào)節(jié)活性氧代謝過程、細胞內(nèi)受體信號通路、缺氧反應(yīng)等條目(見圖3)，說明大黃治療AD的機制可能與炎癥反應(yīng)、細胞凋亡、氧化應(yīng)激反應(yīng)、細胞內(nèi)受體信號通路、cAMP生物合成過程等密切相關(guān)。

圖3 有效組分-基因靶點-分子功能的GO富集氣泡圖Fig.3 Bubble chart of GO enrichment of effective components-gene targets-molecular functions

通過KEGG數(shù)據(jù)庫富集大黃治療AD關(guān)鍵靶標所參與的通路主要涉及PI3K-Akt信號通路、Nrf2/HO-1信號通路、NF-κB信號通路、MAPK信號通路、IL-17信號通路、TNF信號通路、mTOR信號通路、TLR4信號通路、Wnt信號通路、阿爾茨海默病等(見圖4)，說明大黃可能主要通過調(diào)控炎癥反應(yīng)、細胞凋亡、氧化應(yīng)激反應(yīng)來防治AD。

圖4 前10個代表性的通路Fig.4 Top 10 representative pathways

2.7 MTT法檢測各組PC12細胞的細胞存活率比較

采用MTT法檢測各組細胞存活率，統(tǒng)計分析結(jié)果如表3所示：與對照組比較，模型組的PC12細胞的存活率明顯減低，有顯著性差異(P<0.01)；與模型組相比，隨著大黃濃度增加，PC12細胞存活率顯著上升(P<0.05，P<0.01)，表明大黃對PC12細胞具有明顯保護作用。

表3 各組細胞存活率的比較

2.8 ELISA檢測PC12細胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量

結(jié)果見表4，大黃作用PC12細胞24 h后，與對照組比較模型組PC12細胞IL-6、IL-1β和TNF-α含量均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，大黃中、高劑量組的PC12細胞IL-6、IL-1β和TNF-α含量均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，表明大黃對PC12細胞的炎癥反應(yīng)具有明顯的抑制作用。

表4 各組PC12細胞上清液中IL-1β、 IL-6和TNF-ɑ 含量比較

2.9 各組PC12細胞培養(yǎng)上清SOD、GSH-Px和MDA比較

結(jié)果見表5，與對照組比較，模型組SOD、GSH-Px活力下降，MDA含量增高(P<0.01)。與模型組比較，大黃各組SOD、GSH-Px活力均明顯升高，MDA含量減少(P< 0.05，P< 0.01)，表明大黃對PC12細胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有明顯的抑制作用。

表5 各組PC12細胞上清液中SOD、GSH-Px和MDA比較

2.10 流式細胞儀檢測各組PC12細胞的凋亡率比較

結(jié)果見表6，正常PC12細胞也有一定比例的凋亡率,與對照組比較，模型組PC12細胞凋亡率明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，隨著大黃濃度增加，PC12細胞凋亡率顯著降低(P<0.05，P<0.01)，表明大黃對PC12細胞的凋亡具有明顯的抑制作用。

表6 各組PC12細胞凋亡率的比較

2.11 各組PC12細胞上清液PI3K、Akt、Nrf2、HO-1、NF-κB p65 mRNA的表達

結(jié)果見表7，與對照組比較，模型組細胞NF-κB p65 mRNA表達水平顯著升高(P<0.01)，PI3K、Akt、Nrf2、HO-1mRNA表達水平顯著降低(P<0.05)。與模型組比較，大黃各組能夠顯著降低NF-κB p65 mRNA表達水平(P<0.05，P<0.01)，顯著提高PI3K、Akt、Nrf2、HO-1 mRNA表達水平(P<0.05，P<0.01)。說明大黃能夠明顯抑制NF-κB p65基因的表達，促進PI3K、Akt、Nrf2、HO-1基因的表達。

表7 各組PC12細胞PI3K、Akt、Nrf2、HO-1、NF-κB p65 mRNA表達比較

3 討論與結(jié)論

AD是老年癡呆中最常見的一種類型，是神經(jīng)系統(tǒng)至今仍未解決的重大難題，目前仍缺乏有效的治療方法。隨著全球人口老齡化進程加快，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，對老年人健康和生活質(zhì)量造成巨大威脅，并給全世界帶來沉重的經(jīng)濟負擔。Su等[10]研究發(fā)現(xiàn)，“毒損腦絡(luò)”己經(jīng)成為AD發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵，貫穿于整個AD的病理演變過程。大黃始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歸脾、胃、大腸、肝、心經(jīng)。具有瀉下攻積、清熱瀉火、解毒、活血祛瘀之功。Tian[11]認為大黃有以通為補的功效，促進胃腸系統(tǒng)降濁受納，并認為“濁”是腸道內(nèi)毒素，可能損傷機體，大黃能夠促進補益藥物的補益作用，更好的發(fā)揮“補腎填精”的作用，而且大黃具有活血化瘀的功效，能消痰濁瘀血通絡(luò)，能通腑降濁，解火熱毒邪，對應(yīng)中醫(yī)“腦消髓減、痰瘀阻絡(luò)、毒損腦絡(luò)”的AD病機。

本研究通過TCMSP平臺的OB和DL篩選，共篩選出大黃17個有效成分，涉及107個AD 靶點及相關(guān)信號通路162個。網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果表明大黃可能通過作用于APP、TNF、SOD2、CASP3、CASP7、BAX、Bcl-2等關(guān)鍵靶點。

在本研究篩選出的信號通路中，與大黃有效靶點的關(guān)聯(lián)度最高的是PI3K-Akt信號通路，其次是Nrf2/HO-1信號通路和NF-κB信號通路。PI3K/Akt通路是一條經(jīng)典且重要的信號途徑，參與了包括細胞增殖、細胞調(diào)亡、炎癥反應(yīng)等重要的細胞活動。許多研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)元的氧化損傷是AD發(fā)病極早期的重要病理事件，AD患者腦內(nèi)PI3K/Akt 通路抑制，并且促進細胞凋亡[12,13]，而激活PI3K/Akt信號通路可抑制細胞凋亡和氧化應(yīng)激反應(yīng)[14,15]。Qi等[16]研究發(fā)現(xiàn)，激活PI3K/Akt 信號途徑可降低AD模型小鼠tau蛋白磷酸化水平，提高其學習記憶能力。Nrf2/HO-1信號通路是調(diào)控AD過程中炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激的重要信號通路，Nrf2/HO-1信號通路的激活可以顯著增加大腦皮質(zhì)和海馬組織的抗炎和抗氧化應(yīng)激反應(yīng)能力，抑制神經(jīng)元凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護作用[17-20]。近年來關(guān)于PI3K/Akt信號通路的多項研究發(fā)現(xiàn)其信號通路途徑與HO-1的表達存在密切關(guān)系，PI3K/Akt信號通路的激活能明顯促進Nrf2、HO-1基因表達上調(diào)，激活Nrf2/HO-1信號通路，從而發(fā)揮抑制細胞凋亡、氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)的作用[21-24]。NF-κB信號通路不僅參與學習記憶、機體免疫、神經(jīng)元可塑性調(diào)節(jié)，還參與神經(jīng)系統(tǒng)中多種基因的調(diào)控、細胞凋亡的信號傳導過程[25,26]，在一定程度上影響AD的發(fā)生和發(fā)展。近年來研究發(fā)現(xiàn)Nrf2/HO-1與NF-κB介導的炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，Nrf2和NF-κB在保持細胞氧化還原平衡及對抗氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)中是兩條關(guān)鍵的信號通路，兩條信號通路借由一序列復雜的分子間作用互相影響[27]。NF-κB與Nrf2負性相關(guān)，Nrf2的增多會致使NF-κB表達下調(diào)，從而拮抗炎癥反應(yīng)。

為了驗證網(wǎng)絡(luò)藥理學的分析結(jié)果，本研究選擇了大黃對Aβ25-35誘導的PC12細胞的細胞存活率、凋亡率、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信號通路及NF-κB信號通路的調(diào)控作用進行了實驗驗證。驗證結(jié)果表明大黃能有效抑制Aβ25-35誘導的PC12細胞的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、細胞凋亡和提高其細胞存活率，上調(diào)PI3K、Akt、Nrf2、HO-1基因，下調(diào)NF-κB基因。

綜上，大黃具有多成分、多靶點協(xié)同治療阿爾茨海默病的作用。本文基于系統(tǒng)藥理學研究大黃對阿爾茨海默病的具體作用靶點及機制，對今后臨床運用大黃治療阿爾茨海默病具有重要指導意義。