馬 梅

鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院病理科，鄭州 450000

宮頸病變是女性常見宮頸疾病，高發(fā)于45歲以上女性，患者發(fā)病后，病程遷延可發(fā)展為宮頸癌。人乳頭瘤病毒（HPV）感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌致病的主要因素，HPV E6E7致癌基因的過度表達(dá)是宮頸病變發(fā)展的主要因素［1-2］。近年來，臨床醫(yī)學(xué)對(duì)宮頸病變進(jìn)行早期篩查，已不再局限于細(xì)胞形態(tài)學(xué)，而轉(zhuǎn)向了病毒分子學(xué)，即對(duì)癌基因及其蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。第一代檢測(cè)技術(shù)主要檢測(cè)HPV DNA，其運(yùn)用具有一定局限性，而第二代檢測(cè)技術(shù)變?yōu)闄z測(cè)HPV E6E7信使核糖核酸（mRNA），對(duì)預(yù)測(cè)機(jī)體感染后病變、反應(yīng)病毒感染、癌基因整合及轉(zhuǎn)錄翻譯情況有一定優(yōu)勢(shì)［3］。鑒于此，本研究選取了70例疑似宮頸病變患者，進(jìn)一步探討HPV E6E7 mRNA表達(dá)水平與宮頸病變病理級(jí)別的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月—2019年1月間于鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院收治的70例可疑宮頸病變患者的臨床資料，患者年齡20～77歲，平均年齡（48.26±5.15）歲；已婚59例，未婚11例，文化程度：小學(xué)及以下13例，初中19例，高中18例，大學(xué)及以上20例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者因接觸性出血、性交痛、白帶增多或有腥臭味、異常陰道流血或排液等癥狀到我院就診；（2）均于本院擇期行HPV E6E7 mRNA定量檢測(cè)及病理學(xué)診斷；（3）患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠及哺乳期婦女；（2）合并子宮惡性腫瘤；（3）3 d內(nèi)進(jìn)行過陰道用藥或沖洗；（4）表達(dá)障礙或精神疾病者。

1.3 方法

HPV E6E7 mRNA定量檢測(cè)：消毒，患者取膀胱截石位，用無菌棉球擦拭宮頸分泌物，用HPV取樣管收集宮頸口及宮頸管脫落細(xì)胞，裝入保存液中。采用科蒂亞生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的QuantiVirusTM冷光儀及配套試劑盒定量測(cè)量HPV E6E7 mRNA。判定標(biāo)準(zhǔn)為拷貝數(shù)，拷貝數(shù)≥1copies/mL為陽性，拷貝數(shù)＜1copy/mL為陰性。病理學(xué)檢查：在患者移行帶3、6、9、12處采用宮頸管搔刮術(shù)取樣，送至病理科醫(yī)師處進(jìn)行標(biāo)本制片及閱片診斷。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)

（1）比較不同病理級(jí)別患者HPV E6E7 mRNA表達(dá)量的分布情況。（2）評(píng)估病理級(jí)別與HPV E6E7 mRNA表達(dá)量的相關(guān)性。病理級(jí)別包括：宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)及Ⅲ級(jí)、宮頸癌Ⅰ期及Ⅱ期。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

宮頸病變病理級(jí)別與HPV E6E7 mRNA表達(dá)水平相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病理級(jí)別HPV E6E7 mRNA表達(dá)量分布

隨病理分級(jí)增加，HPV E6E7 mRNA表達(dá)量升高，不同病理級(jí)別HPV E6E7 mRNA表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 相關(guān)性

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，宮頸病變病理級(jí)別與HPV E6E7 mRNA總表達(dá)水平呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=0.651，P=0.035）。

3 討論

宮頸病變?cè)诮?jīng)歷宮頸上皮增生、宮頸上皮不典型增生、原位癌等階段后，演變成宮頸癌。該病起初由HPV感染導(dǎo)致，HPV具有宿主特異性，可感染人體特異部位的皮膚及粘膜使上皮細(xì)胞排列紊亂、分化不良、異常增殖、核大深染，因此導(dǎo)致惡變［4-5］。HPV主要通過性接觸傳播，因此宮頸病變患者的年齡、機(jī)體免疫力、性伴侶個(gè)數(shù)、生育情況等均與宮頸病變有關(guān)。研究表明，在我國(guó)，超過半數(shù)女性有感染HPV可能，因此對(duì)HPV進(jìn)行早期發(fā)現(xiàn)、病毒載量測(cè)定及疾病準(zhǔn)確分型，對(duì)控制患者病情進(jìn)展，預(yù)防宮頸癌發(fā)病有重要意義［6-7］。

表1 不同病理級(jí)別HPV E6E7 mRNA表達(dá)量分布（±s） copies/mL

表1 不同病理級(jí)別HPV E6E7 mRNA表達(dá)量分布（±s） copies/mL

病理級(jí)別表達(dá)量CINⅠ級(jí)11 672.35±243.61 CINⅡ級(jí)26 391.56±1253.78 CINⅢ級(jí)28 640.59±1463.21宮頸癌Ⅰ期49 218.63±2683.25宮頸癌Ⅱ期95 638.49±2842.65 F P 3 086.906 0.000

過往臨床常用的檢測(cè)方式為HPV DNA，其原理為觀察宮頸上皮細(xì)胞形態(tài)及測(cè)定細(xì)胞內(nèi)HPV DNA病毒載量，該方法具有操作方便、檢測(cè)用時(shí)較短、成本低的優(yōu)勢(shì)。但在臨床實(shí)踐中，該方法誤診率較高。由于大部分患者感染HPV后臨床癥狀輕，存在亞臨床感染，HPV DNA檢查僅可用于確定病因，而不能判斷病毒的活動(dòng)程度，導(dǎo)致該方法逐漸被淘汰。而HPV E6E7 mRNA作為一種新型檢測(cè)方法，被證實(shí)有一定優(yōu)勢(shì)。本研究結(jié)果顯示，隨病理分級(jí)增加，P25、P50、P75、QR的HPV E6E7 mRNA表達(dá)量均升高，宮頸病變病理級(jí)別與HPV E6E7 mRNA表達(dá)水平呈正相關(guān)，表明HPV E6E7 mRNA表達(dá)水平可作為評(píng)估宮頸病變病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，具有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。分析其原因在于，HPV病毒由多種基因組成，E6和E7是其中兩種癌基因，其過度表達(dá)可驅(qū)動(dòng)宮頸細(xì)胞持續(xù)惡性轉(zhuǎn)化。HPV E6E7 mRNA檢測(cè)的是有轉(zhuǎn)錄活性的病毒，可檢測(cè)E6及E7兩種癌基因的表達(dá)量，若HPV E6E7 mRNA拷貝值越高，表明基因表達(dá)相對(duì)活躍，疾病進(jìn)展可能性大［8］。因此，通過HPV E6E7 mRNA檢測(cè)，可有效判斷病毒有無整合到宿主細(xì)胞中，準(zhǔn)確反應(yīng)病毒感染狀態(tài)及患者病理狀態(tài)，便于預(yù)測(cè)宮頸病變發(fā)展為宮頸癌的危險(xiǎn)程度。

綜上所述，HPV E6E7 mRNA表達(dá)水平可作為評(píng)估宮頸病變病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，具有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。