徐明霞，于 玲

（煙臺(tái)職業(yè)學(xué)院，山東煙臺(tái) 264670）

比目魚(yú)生長(zhǎng)速度快，抗病能力強(qiáng)，是韓國(guó)、日本、中國(guó)等東亞地區(qū)重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)之一。因此，許多飼養(yǎng)試驗(yàn)旨在確定其日糧營(yíng)養(yǎng)需求、飼喂頻率、魚(yú)粉替代蛋白來(lái)源及最佳喂養(yǎng)策略等（Cho 等，2007；Lee 等，2002）。Kim 等（2000）報(bào)道了改善比目魚(yú)生存、生長(zhǎng)、免疫抵抗和肌肉質(zhì)量的飼料添加劑，同時(shí)其他添加劑如乳酸菌、小球藻粉、蘑菇提取物、綠茶和殼聚糖等也在比目魚(yú)身上進(jìn)行了評(píng)估。此外，Yin等（2009）報(bào)道了中草藥添加劑添混合物對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能及疾病感染后的改善作用。但由于商業(yè)養(yǎng)殖的比目魚(yú)在全年養(yǎng)殖過(guò)程中疾病導(dǎo)致的死亡給養(yǎng)魚(yú)戶(hù)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，因此，開(kāi)發(fā)一種新的抗病添加劑非常必要。天然中草藥作為一種食品添加劑，具有食用魚(yú)類(lèi)食品安全等諸多優(yōu)點(diǎn)。黃芩提取物中黃芩苷為主要活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎和抗氧化活性。因此，本研究旨在確定日糧中黃芪提取物添加水平對(duì)比目魚(yú)生長(zhǎng)性能和飼料效率的影響，同時(shí)對(duì)比目魚(yú)進(jìn)行愛(ài)德華氏菌攻毒試驗(yàn)，評(píng)估黃芪提取物對(duì)死亡率的改善作用。

1 材料與方法

1.1 飼養(yǎng)試驗(yàn) 幼比目魚(yú)轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室，在開(kāi)始飼養(yǎng)試驗(yàn)前先適應(yīng)2周。在馴化期間，魚(yú)飼喂含有54%粗蛋白質(zhì)和11%粗脂肪的商品飼料，每天兩次，投喂量為體重的2%～3%。選擇平均體重為5.0 g的比目魚(yú)630條，隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)35條魚(yú)，共18個(gè)水箱。每個(gè)水箱的水流速度為6.8 L/min，對(duì)每個(gè)水箱充氣，水溫范圍為18.4～24.1℃。各組分別飼喂的基礎(chǔ)日糧分別添加0、0.5%、1%、2%、3%和5%黃芪提取物，試驗(yàn)日糧見(jiàn)表1。每天人工喂魚(yú)2次，試驗(yàn)共開(kāi)展8周。

在飼養(yǎng)試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)選取體重接近的10條魚(yú)，在飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)從每個(gè)魚(yú)缸抽取5條魚(yú)，并對(duì)試驗(yàn)日糧進(jìn)行化學(xué)分析。對(duì)每個(gè)魚(yú)缸里的5條魚(yú)分別稱(chēng)重，然后解剖收集肝臟。肝指數(shù)和外形指數(shù)計(jì)算公式如下：

肝指數(shù)=肝重量×100/魚(yú)重；

外型指數(shù)=魚(yú)重×100/總長(zhǎng)度的三次方。

在8周飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從每個(gè)魚(yú)缸中隨機(jī)選擇3條魚(yú)，從它們的尾靜脈提取血液樣本。魚(yú)在采血前饑餓24 h。血液收集后3500 r/min離心10 min，血清樣品保存在-80℃。用試劑盒測(cè)定總蛋白、葡萄糖、膽固醇、甘油三酯含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和溶菌酶活性。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 感染試驗(yàn) 在飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)從每個(gè)魚(yú)缸中挑選出10條魚(yú)，它們沒(méi)有細(xì)菌感染。在不換水的情況下，魚(yú)被放在與飼養(yǎng)試驗(yàn)相同的水槽中。攻毒試驗(yàn)用菌為標(biāo)準(zhǔn)致病菌（愛(ài)德華氏菌），用瓊脂培養(yǎng)懸浮液培養(yǎng)24 h，收集、洗滌、懸浮于無(wú)菌的0.85%生理鹽水中計(jì)數(shù)。然后用含4×108菌/mL的致病性愛(ài)德華氏菌懸液，腹腔注射0.1 mL。在感染愛(ài)德華氏菌后的96 h內(nèi)監(jiān)測(cè)死亡率。

1.3 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì) 采用SPSS單因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncan’s多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芪提取物對(duì)比目魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，各組比目魚(yú)的存活率均超過(guò)98%，且體增重在545%～637%，均無(wú)顯著差異（P＞0.05）飲食SBE濃度（表2）。日糧添加2%黃芪提取物較其他組顯著提高了比目魚(yú)的比生長(zhǎng)率（P＜0.05），但與0.5%黃芪提取物組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。我們也分析了比目魚(yú)愛(ài)德華氏菌感染后60 h的死亡率（數(shù)據(jù)未給出），對(duì)照組在感染96 h后表現(xiàn)出100%的死亡，而0.5%～5%黃芪提取物組死亡率在77%～87%，但各組日糧無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表2 黃芪提取物添加水平對(duì)比目魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

2.2 黃芪提取物對(duì)比目魚(yú)飼料和蛋白效率的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比，5%黃芪提取物組采食量顯著提高（P＜0.05），但與其他黃芪提取物組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。日糧黃芪提取物添加水平對(duì)比目魚(yú)飼料效率和蛋白沉積均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。但5%黃芪提取物組較1%～3%黃芪提取物組顯著提高了蛋白效率（P＜0.05），但與對(duì)照組和0.5%黃芪提取物組對(duì)蛋白效率的影響無(wú)顯著差異（P＞0.05）。日糧處理對(duì)比目魚(yú)肝臟指數(shù)和外型指數(shù)的影響均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.3 黃芪提取物對(duì)比目魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響由表4可知，血清中蛋白濃度在2.6～3.1 g/dL，血清葡萄糖濃度在46.3～74.0 mg/dL，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性分別在7.7～27.7 IU/L和27.3～56.7 IU/L，血清膽固醇水平在149～190 mg/d，血清甘油三酯濃度在218～459 mg/dL，各組對(duì)上述指標(biāo)的影響均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。此外，整個(gè)試驗(yàn)期間，日糧黃芪提取物添加水平對(duì)血清溶菌酶活性的影響也無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3 黃芪提取物添加水平對(duì)比目魚(yú)飼料和蛋白效率的影響

表4 黃芪提取物添加水平對(duì)比目魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

Galina等（2009）綜述了使用中草藥提取物作為免疫刺激物來(lái)增強(qiáng)魚(yú)的非特異性免疫反應(yīng)。魚(yú)類(lèi)先天免疫系統(tǒng)的主要成分是巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和體液成分，如溶菌酶或補(bǔ)體系統(tǒng)。草本植物由于其食用安全，常被用于商業(yè)水產(chǎn)養(yǎng)殖中作為促進(jìn)生長(zhǎng)的物質(zhì)。同樣，由于本研究中2%黃芪提取物組比目魚(yú)的比生長(zhǎng)率食高于其他組，提示黃芪提取物具有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。此外，食用菌菌絲體提取物可以改善橄欖比目魚(yú)的增重（Kim等，2006）。但與這些研究不同的是，日糧中添加幾丁質(zhì)和殼聚糖抑制了雜交羅非魚(yú)的生長(zhǎng)（Shiau和Yu，1999）。因此，應(yīng)慎重考慮日糧添加劑的應(yīng)用，因?yàn)樗鼈冊(cè)隰~(yú)類(lèi)中的有利作用取決于魚(yú)類(lèi)的種類(lèi)、添加劑的靶向性、給藥方法、劑量、魚(yú)的生理營(yíng)養(yǎng)狀況和日糧營(yíng)養(yǎng)成分等。

在本研究中，日糧黃芪提取物的添加水平對(duì)比目魚(yú)的飼料效率和蛋白效率無(wú)顯著影響。但由于魚(yú)體重增加，添加添加劑的日糧可以提高魚(yú)的飼料效率（Seo等，2009）。本研究發(fā)現(xiàn)，血清總蛋白、葡萄糖、膽固醇和甘油三酯含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性未受日糧中黃芪提取物水平的顯著影響。但也有研究表明，添加中草藥提取物（如蘑菇菌絲體提取物、綠茶提取物和乳酸菌）分別降低了血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性和低密度脂蛋白膽固醇含量（Kim等，2006）。

此外，各處理組對(duì)溶菌酶活性也無(wú)顯著影響。中藥合劑可以刺激鯉魚(yú)的呼吸爆發(fā)活性、吞噬細(xì)胞的吞噬作用和溶菌酶活性（Yin等，2009）。溶菌酶是非特異性免疫系統(tǒng)的一部分，其活性水平受應(yīng)激影響，盡管急性或長(zhǎng)期應(yīng)激后的反應(yīng)不明確。溶菌酶的使用活性作為選擇標(biāo)準(zhǔn)，但其提高抗病性是復(fù)雜的過(guò)程，溶菌酶活性與抗病性之間的聯(lián)系似乎大大影響了魚(yú)的免疫狀態(tài)。本研究未發(fā)現(xiàn)以不同濃度黃芪提取物作為試驗(yàn)飼料的魚(yú)的累積死亡率有顯著差異。但飼喂黃芪提取物的日糧組魚(yú)的累積死亡率有下降趨勢(shì)，這可能表明黃芩提取物有降低魚(yú)死亡率的潛力。但本研究中用于魚(yú)感染的病原菌濃度（4×108個(gè)/mL）似乎過(guò)高，因?yàn)樗恤~(yú)組的死亡率都很高。此外，將在草本植物提取物中培養(yǎng)的乳酸菌添加到日糧可以提高魚(yú)在感染鰻弧菌或海豚鏈球菌后的存活率（Jhon等，2009）。

4 結(jié)論

綜上所述，日糧添加添加2%黃芩提取物可改善比目魚(yú)的比生長(zhǎng)率，黃芩提取物有降低比目魚(yú)感染愛(ài)德華氏菌死亡率的作用。