芮 興，熊 波，沈 偉，董偉偉，彭 娟，曲 虹*

0 引言

鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)，是鄰苯二甲酸酯類增塑劑中使用最廣泛的品種[1]，主要應(yīng)用在PVC、PE、PET等塑料制品中，包括醫(yī)療領(lǐng)域的醫(yī)用導(dǎo)管、輸液袋、藥品包裝、中藥代煎包裝袋等。由于DEHP的分子結(jié)構(gòu)與性激素類相似，在人和動物體內(nèi)會擾亂正常的分泌系統(tǒng)，并有致癌、致畸、致突變的潛在危害[2]。中國、美國、歐盟、日本等均針對DEHP制定了一系列的法律限制[3]。中藥代煎包裝袋作為中藥煎煮液的主要載體，應(yīng)當(dāng)盡可能降低DEHP的遷移量，國家也相應(yīng)地制定了一系列的檢測標(biāo)準(zhǔn)和法律法規(guī)[4]。本研究根據(jù)GB9685-2016和GB5009.156-2016[5]中對DEHP遷移試驗(yàn)的要求，采用氣質(zhì)聯(lián)用色譜法(GC-MS)，對不同溫度下中藥代煎包裝袋中DEHP的遷移量進(jìn)行檢測，揭示中藥代煎包裝袋中塑化劑遷移的影響規(guī)律，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與樣品 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Thermo，Trace1310 ISQ)，色譜柱(TG-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm)，超聲振蕩器(昆山市超聲儀器有限公司，KQ-800DE型)，離心機(jī)(Thermo，BR4I)，恒溫水浴鍋(上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，DRHH-S6)，分析天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司，F(xiàn)A-1004)；標(biāo)準(zhǔn)品DEHP(99.5%，Dr.Ehrenstorfer)，正己烷(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，冰乙酸(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；玻璃器皿若干；中藥代煎包裝袋，來源于上海萬仕誠藥業(yè)有限公司(BOPA/LDPE，安徽金科藥品包裝材料有限公司，批號20190926048，編號a)、上海同濟(jì)堂藥業(yè)有限公司(BOPA/LDPE，安徽金科藥品包裝材料有限公司，批號20190101041，編號b)、上海虹橋中藥飲片有限公司(BOPA/LDPE，廣東美士達(dá)藥包材料股份有限公司，批號1906003A11，編號c)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 條件模擬 中藥代煎服務(wù)中，對中藥代煎的流程管理尚未形成具有約束效力的規(guī)定[6]。通過文獻(xiàn)調(diào)查[7-8]和實(shí)地走訪上海市提供中藥代煎服務(wù)的企業(yè)發(fā)現(xiàn)，在使用包裝袋對中藥煎煮液進(jìn)行最后的灌裝時(shí)，受煎液容量、操作人員經(jīng)驗(yàn)、工作時(shí)間等因素影響，中藥煎液在40～100 ℃的溫度下灌裝，稍微放冷后存放待運(yùn)。在此過程中，塑料袋與藥液的接觸溫度集中在40～90 ℃。灌裝后，根據(jù)室內(nèi)溫度的不同，在0.5～1 h內(nèi)，藥液溫度降至40 ℃以下。

根據(jù)以上條件，本試驗(yàn)針對灌裝溫度下，中藥煎液與中藥包裝袋接觸時(shí)間的長短，設(shè)計(jì)了包裝袋與模擬液梯度溫度共浴的試驗(yàn)，檢測包裝袋中遷移到中藥煎液模擬液中的DEHP含量，并分析其隨溫度的變化規(guī)律。試驗(yàn)中設(shè)計(jì)的共浴條件為30+10×n℃(n=0,1,2,3,4,5,6,7)梯度水浴，時(shí)間1 h。根據(jù)GB31604.1-2015中對遷移試驗(yàn)的相關(guān)規(guī)定，選擇的中藥煎液模擬液為蒸餾水、4%乙酸。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液 精確稱取DEHP 100 mg，溶于正己烷并定容至50 ml，濃度為2.0 mg/ml，精密量取適量用正己烷稀釋制成0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00 μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.3 樣品處理 分別稱取10 g中藥代煎包裝袋，剪碎至約1 mm2大小。準(zhǔn)確稱取1.00 g碎片于具塞錐形瓶中，分別與蒸餾水200 ml、4%乙酸溶液(臨用前配制)200 ml，在梯度溫度下(T=30+10×n℃，n=0,2,3,…,7)水浴1 h，去除包裝袋碎片，編號備用。準(zhǔn)確量取各編號溶液10 ml于玻璃試管中，加入5 ml正己烷振蕩提取10 min，4 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心5 min，取上層正己烷層，重復(fù)2次，合并正己烷層，加正己烷定容至15 ml，備用，所制得的樣品可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍進(jìn)行稀釋。

1.2.4 色譜條件[5，9-10]GC條件為色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm；TG-5MS)；進(jìn)樣口溫度：260 ℃；載氣：高純氦氣，流速1 ml/min；進(jìn)樣方式：自動進(jìn)樣，不分流；進(jìn)樣量：1 μl；升溫程序：初始柱溫60 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升溫至220 ℃，保持1 min，以5 ℃/min升溫至250 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升溫至290 ℃，保持7.5 min。

MS條件為接口溫度：290 ℃；分流比：不分流；電離方式：電子轟擊電離源(EI)；電子轟擊能：70 eV；離子源溫度：280 ℃；溶劑延遲：7 min；監(jiān)測方式：離子檢測模式(SIM)。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測限及標(biāo)準(zhǔn)圖譜 將標(biāo)準(zhǔn)溶液按照本 “1.2.4”項(xiàng)條件進(jìn)行測定，DEHP的特征離子見表1，DEHP的GC-MS色譜圖見圖1。用DEHP的峰面積對DEHP含量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=8.24×107X-3.93×106(R2=0.998 5)，見圖2，DEHP在0.05～5.00 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。取DEHP 0.05 μg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，用正己烷逐步稀釋后進(jìn)樣檢測。按信噪比(S/N)=3，計(jì)算檢出限為0.002 mg/L；按信噪比(S/N)=10，計(jì)算定量限為0.006 mg/L，表明試驗(yàn)方法滿足GB9685 2016中DEHP特定遷移限量(1.5 mg/kg)的檢測需要。

2.2 精密度、穩(wěn)定性試驗(yàn) 取0.50 μg/ml DEHP標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.2.4”項(xiàng)條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，峰面積的RSD值為1.26%(n=6)；按“1.2.4”項(xiàng)條件在0、1、6、12、18、24 h分別進(jìn)樣，測定峰面積，峰面積的RSD值為2.08%(n=6)。說明該方法精密度較好，且樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表1 DEHP的特征離子

圖1 DEHP標(biāo)準(zhǔn)品離子流色譜、質(zhì)譜圖

圖2 響應(yīng)度與濃度回歸曲線Y=8.24×107X-3.93×106 (R2=0.998 5)

2.3 加樣回收率 采用加樣回收試驗(yàn)方法，量取1.00 μg/ml DEHP標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 ml，加至其中一份溶液中，按“1.2.3”和“1.2.4”項(xiàng)條件進(jìn)行處理和測定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為97.9%，RSD=2.1%(n=6)。

2.4 樣品的測定 將3個(gè)批次的樣品分別按“1.2.4”項(xiàng)條件檢測并計(jì)算DEHP含量，以水浴溫度為橫坐標(biāo)，DEHP遷移量為縱坐標(biāo)作圖，如圖3、圖4所示，隨著水浴溫度從30 ℃上升到100 ℃，遷移到蒸餾水中DEHP的含量從0.051～0.114 mg/kg上升到0.499～0.881 mg/kg，遷移到4%乙酸溶液中的DEHP的含量從0.002～0.006 mg/kg上升到0.098～0.125 mg/kg。

圖3 蒸餾水與3批次中藥代煎包裝袋共浴后DEHP的 遷移量與水浴溫度的關(guān)系

圖4 4%乙酸溶液與3批次中藥代煎包裝袋共浴后DEHP的 遷移量與水浴溫度的關(guān)系

3 討論

3.1 試驗(yàn)操作注意事項(xiàng) 由于PAEs普遍存在于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中[11-12]，為防止樣品受污染而造成假陽性的結(jié)果，本試驗(yàn)禁止使用和接觸塑料、橡膠材質(zhì)的器皿，使用的玻璃器皿也需要經(jīng)蒸餾水洗、丙酮洗、然后用正己烷淋洗2次、氮吹后使用。水浴采用具玻璃塞的錐形瓶，減少空氣中顆粒粉塵污染。水浴后，包裝袋碎片采用離心的方式去除。

為降低灌裝機(jī)和中藥對DEHP遷移量的干擾，試驗(yàn)根據(jù)《食品接觸材料及制品遷移試驗(yàn)通則》(GB31604.1-2015)中DEHP遷移量的相關(guān)規(guī)范，選擇中藥代煎包裝袋與模擬液梯度溫度水浴的方式開展試驗(yàn)，以水、4%乙酸模擬中藥煎液。這樣可以減少灌裝時(shí)灌裝機(jī)內(nèi)部材料及中藥組方復(fù)雜化學(xué)成分的干擾，便于規(guī)范和簡化DEHP遷移量的檢測流程，有利于試驗(yàn)的操作性和重復(fù)性。

3.2 對中藥代煎的指導(dǎo)意義

3.2.1 本研究檢出的3個(gè)批次的中藥代煎包材中DEHP的遷移量均符合國標(biāo)規(guī)定(小于1.5 mg/kg)，說明LDPE/BOPA材質(zhì)的包裝膜可以用作中藥代煎包裝袋。在良好質(zhì)量控制的前提下，該材料DEHP的暴露風(fēng)險(xiǎn)較小。值得說明的是，試驗(yàn)中抽取的中藥代煎包裝袋來自于上海市幾家較大規(guī)模的中藥飲片公司，材料均為LDPE/BOPA材質(zhì)，且存放周期較短。但是，目前仍有其他材質(zhì)(PE、PET、PVC等)的中藥代煎包裝袋流通于小藥店、中藥代煎加工門店等，可能存在DEHP暴露風(fēng)險(xiǎn)。

3.2.2 試驗(yàn)表明，中藥代煎包裝袋中DEHP的遷移與接觸溶液的溫度、酸堿度存在一定的相關(guān)性。隨著溫度的升高，DEHP的遷移量也隨之升高，其中100 ℃水浴溫度下，水溶液中DEHP的遷移量相對30 ℃平均提高了9倍，4%乙酸溶液中平均提高了30倍；偏酸性環(huán)境相對抑制了DEHP的遷移，如圖5各值均小于圖4中同溫度下水中的遷移量。

3.2.3 在中藥代煎服務(wù)中，采取低溫灌裝的方式有利于降低DEHP遷移量，而且灌裝溫度在30～60 ℃時(shí)，DEHP的遷移量隨溫度升高，增長緩慢，當(dāng)水浴溫度超過60 ℃，隨著溫度的上升，遷移到兩種中藥煎液模擬液中DEHP含量呈顯著增加的趨勢。因此，中藥代煎的灌裝溫度控制在60 ℃以下有利于降低中藥代煎包裝袋中DEHP的遷移量。

綜上，GC-MS法在檢測由煎液包裝袋遷移而引入的DEHP具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確性。試驗(yàn)結(jié)果表明，灌裝溫度和灌裝液PH值對中藥代煎包裝袋中DEHP的遷移具有一定的影響規(guī)律。當(dāng)然，影響中藥煎液中塑化劑的含量還有中藥代煎包裝袋質(zhì)量、水質(zhì)、中藥質(zhì)量、代煎機(jī)器塑化劑暴露等因素，如果僅從減小中藥代煎包裝中DEHP遷移量的角度來看，將中藥代煎的灌裝溫度控制在60 ℃以下為宜。