HBV感染肝細(xì)胞后在細(xì)胞核形成共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)并以微染色體形式長(zhǎng)期存留。由于cccDNA難以被現(xiàn)有藥物有效靶向和清除，被認(rèn)為是HBV感染慢性化和乙型肝炎難治愈的核心分子基礎(chǔ)。

已有研究表明，表觀遺傳機(jī)制在調(diào)控cccDNA轉(zhuǎn)錄活性中起重要作用，但尚不清楚其對(duì)cccDNA穩(wěn)定性和清除的影響。鑒于此，來(lái)自復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院的Wang等綜合利用HBV感染模型和cccDNA體內(nèi)外模型，以IFNα處理和HBx敲除建立cccDNA轉(zhuǎn)錄活性抑制的表征，應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)、微球菌核酸酶(MNase)敏感性實(shí)驗(yàn)和ATAC-seq等技術(shù)評(píng)價(jià)cccDNA的表觀修飾特征、可及性以及與抗病毒因子的結(jié)合情況，以比較不同表觀活性的cccDNA在穩(wěn)定性和抗清除方面的差異。

與對(duì)照HBV cccDNA相比，IFNα處理或HBx敲除后cccDNA的轉(zhuǎn)錄活性低下，其組蛋白表觀修飾呈抑制性狀態(tài)，可及性廣泛降低。這致使cccDNA與RNA Pol II的結(jié)合減少，阻礙cccDNA與抗病毒因子APOBEC3A和靶向性CRISPR/Cas9分子的結(jié)合，從而顯著削弱APOBEC3A的脫氨基效應(yīng)和CRISPR/Cas9的切割編輯效應(yīng)。這些結(jié)果提示，轉(zhuǎn)錄抑制的cccDNA具備更強(qiáng)的抵抗清除損傷的特性。進(jìn)一步采用重組HBV cccDNA小鼠模型，發(fā)現(xiàn)相較正常轉(zhuǎn)錄活性的cccDNA，轉(zhuǎn)錄抑制的cccDNA在體內(nèi)的清除速率顯著更慢。基于此，提出通過(guò)提高cccDNA的可及性以促進(jìn)其清除的策略，并在細(xì)胞模型中進(jìn)行了驗(yàn)證：組蛋白去乙?；敢种苿〣elinostat能上調(diào)細(xì)胞中cccDNA上H3和H4組蛋白的總乙?；讲⒃黾觕ccDNA的可及性，由此提升APOBEC3A對(duì)cccDNA的脫氨基效率。

該研究首次揭示了表觀活性狀態(tài)對(duì)HBV cccDNA微染色體穩(wěn)定性的影響，加深了對(duì)cccDNA異質(zhì)性存留方式和清除機(jī)制的認(rèn)知，為研發(fā)靶向清除HBV基因儲(chǔ)存庫(kù)的策略提供了新視角和理論技術(shù)支撐。

摘譯自WANG Y, LI Y, ZAI W, et al. HBV covalently closed circular DNA minichromosomes in distinct epigenetic transcriptional states differ in their vulnerability to damage[J]. Hepatology, 2022, 75: 1275-1288. DOI: 10.1002/hep.32245.