桂瑩晶，錢紅波，張大發(fā)，楊 敏

炎癥介質(zhì)的反應(yīng)不僅影響組織結(jié)構(gòu)的完整性和穩(wěn)定性，還與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，因此，我們監(jiān)測炎癥相關(guān)的標(biāo)志物能早期識(shí)別急性心肌梗死(AMI)的患者。最近一種早期診斷AMI的標(biāo)志物——心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)備受關(guān)注。當(dāng)心肌組織細(xì)胞缺血或缺氧的時(shí)候，就會(huì)利用脂肪酸供能給心肌細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)H-FABP迅速升高,所以成為心肌損傷壞死的早期指標(biāo)[1-2]。本研究SD大鼠通過大鼠心肌壞死模型，監(jiān)測1、3、6、8 h時(shí)間點(diǎn)的H-FABP和肌鈣蛋白(cTnI)濃度動(dòng)態(tài)變化，討論心肌壞死發(fā)生后H-FABP濃度的變化趨勢并分析H-FABP對心肌壞死的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取雄性Sprauge Dawley(SD)大鼠(健康成年清潔級40只)，體重(220±20)g，購于南京青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場。合格證編號(hào):SCXK2009-0001。用RM6240多通道生理信號(hào)記錄大鼠的Ⅱ?qū)?lián)心電圖，并在實(shí)驗(yàn)前剔除有異常的大鼠，保留正常大鼠40只。采用上海和豐制藥公司的鹽酸異丙腎上腺素(ISO)注射液1 mg/2 mL，H-FABP試劑盒由武漢華美生物工程公司提供，cTnI試劑盒由合肥安啟生物科技有限公司提供。

1.2 方法：適應(yīng)性飼養(yǎng)SD大鼠1周，自由取水，室溫控制在25 ℃左右，每日飼料約100 g/只，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表分成2組：對照組20只，H-FABP組20只。H-FABP組大鼠多點(diǎn)一次性皮下注射ISO10 mg/kg，間隔時(shí)間為24 h，并連續(xù)3次，通過病理切片、心電圖及肌鈣蛋白證明建模成功。于最后一次給藥后1、3、6、8 h經(jīng)頸總動(dòng)脈采取約0.5 mL不抗凝的血液，室溫下靜置1 h 后析出血漿4 000 g，(15～20)min用離心機(jī)離心血液并用移液器吸出血漿裝入離心管，標(biāo)記后送入-80 ℃冰箱立即凍存，用ELISA方法測定血清中cTnI和H-FABP濃度。末次采血后取出心臟用0.9%氯化鈉沖洗，然后用4.0%的甲醛固定，采用石蠟包埋等方法制作病理切片，在光鏡下觀察心肌組織的HE染色切片。對照組給予同等劑量的0.9%氯化鈉，其余操作與H-FABP組相同。

2 結(jié)果

2.1 大鼠心電圖的變化：正常組給藥后1、5 min，給藥后1、8 h 大鼠的心電圖見圖1-圖5(目錄后)。

2.2 大鼠心肌組織的病理和HE染色結(jié)果：對照組大鼠心肌組織細(xì)胞邊界清晰，形態(tài)完整，心肌纖維的排列整齊，無炎性細(xì)胞浸潤，無出血和灶性壞死。H-FABP組大鼠心肌組織細(xì)胞可見核固縮、破碎、核溶解，心肌纖維腫脹變性甚至斷裂，橫紋不清或消失，部分區(qū)域可見片狀或點(diǎn)狀的壞死灶，與對照組相比，心肌細(xì)胞質(zhì)嗜伊紅性增強(qiáng)，血管擴(kuò)張充血，細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)大量中性粒細(xì)胞浸潤。

2.3 血清H-FABP動(dòng)態(tài)變化：重復(fù)測量因素4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的總體間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.39，P<0.05)；不同分組的總體間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=283.05，P<0.05)；2組H-FABP濃度比較在1 h 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在3、6、8 h時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；重復(fù)測量時(shí)間與不同分組有交互作用(F=17.06，P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組大鼠不同時(shí)間血清H-FABP濃度的動(dòng)態(tài)變化

2.4 cTnI重復(fù)測量結(jié)果：重復(fù)測量因素4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的總體間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=89.59，P<0.05)；不同分組的總體間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=184.89，P<0.05)；2組cTnI濃度比較在1和3 h時(shí)間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在6和8 h時(shí)間點(diǎn)兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；重復(fù)測量時(shí)間與不同分組有交互作用(F=46.17，P<0.05)，見表2。

表2 2組大鼠不同時(shí)間血清cTnI濃度的動(dòng)態(tài)變化

3 討論

急性心肌梗死是指在冠狀動(dòng)脈病變的基礎(chǔ)上，發(fā)生冠狀動(dòng)脈血供急劇減少或中斷，使相應(yīng)的心肌嚴(yán)重而持久地急性缺血導(dǎo)致心肌壞死。急性心肌梗死的病理基礎(chǔ)是易損斑塊的形成，與冠狀動(dòng)脈病變范圍和狹窄程度相比較，更能反映急性冠狀動(dòng)脈事件發(fā)生的可能性[3-6]。非缺血性或缺血性損傷因素都會(huì)使心肌特異性標(biāo)記物濃度升高，所以早期預(yù)測急性心肌梗死預(yù)后的可靠度和準(zhǔn)確度差，臨床價(jià)值低。以前評估急性心肌梗死病情預(yù)后和嚴(yán)重程度的主要方法是肌鈣蛋白，可是臨床工作中發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)記物不但血清濃度上升比較慢，特異性還不高[5-7]，因此需要尋找能動(dòng)態(tài)反映心肌損傷程度的指標(biāo)并具有心臟敏感性特異性的標(biāo)記物。這些指標(biāo)和標(biāo)記物能早期預(yù)測預(yù)后和結(jié)局[8-9]。

最近H-FABP作為一種心肌特異性的血清指標(biāo)，濃度的增加可能是急性心肌梗死的獨(dú)立預(yù)測因子[10-11]。H-FABP主要是和心肌細(xì)胞內(nèi)的難溶性長鏈脂肪酸結(jié)合并向酯化和氧化部位運(yùn)輸，用來調(diào)節(jié)脂肪酸代謝，保護(hù)酶和細(xì)胞膜不受影響，并能在脂蛋白酯酶的作用下分解出脂肪酸，為心肌的收縮提供能量[12-13]。H-FABP在正常的尿液和血液中含量極低且被迅速清除，很難被檢測出來[14]。如果心肌細(xì)胞出現(xiàn)損傷或脂肪酸代謝增強(qiáng)，會(huì)引起心肌細(xì)胞的H-FABP濃度迅速升高。H-FABP的細(xì)胞膜通透性高且相對分子量低，可快速從心肌細(xì)胞釋放到血液，并從尿液中排出。Bank[15]等在研究中用ELISA法檢測結(jié)扎大鼠的冠狀動(dòng)脈時(shí)H-FABP的濃度時(shí)發(fā)現(xiàn)：當(dāng)心肌細(xì)胞缺血達(dá)到15min時(shí)，血漿中H-FABP含量是正常組大鼠的7倍，且濃度的動(dòng)態(tài)變化與心肌細(xì)胞的損傷嚴(yán)重程度密切相關(guān)；與經(jīng)典的心肌損傷壞死標(biāo)志物CK或CK-MB相比，漏出到血液中的速率超過任何心肌酶,同時(shí)血漿中H-FABP的濃度隨著缺血時(shí)間的延長動(dòng)態(tài)變化：4小時(shí)左右會(huì)達(dá)到高峰，隨后逐漸下降，可作為診斷急性心肌梗死的早期指標(biāo)。

本研究顯示，通過采用異丙腎上腺素制作的心肌損傷壞死模型，以最后一次誘導(dǎo)心肌壞死事件的發(fā)生為起始點(diǎn)，通過重復(fù)測量的方差分析，在模型中發(fā)現(xiàn)H-FABP指標(biāo)與肌鈣蛋白作用類似，H-FABP組濃度與對照組比較明顯升高，在術(shù)后3 h 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這個(gè)結(jié)果與Young[16]研究指出外周血液中H-FABP在急性心肌梗死中2～3 h 內(nèi)可以快速上升，8 h左右可達(dá)到高峰，24 h 內(nèi)可恢復(fù)正常，且含量遠(yuǎn)高于心絞痛和無冠心病的結(jié)果一致，可作為這個(gè)模型的重要診斷指標(biāo)。鹽酸異丙腎上腺素與不同的時(shí)間點(diǎn)有交互作用，時(shí)間點(diǎn)越長，鹽酸異丙腎上腺素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞壞死的作用越來越顯著，H-FABP的濃度也在不斷升高。本組結(jié)果顯示，2組肌鈣蛋白濃度在6、8 h 時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是在該模型末次給藥后3 h 與對照組相比未見明顯升高。由此可見,在以異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷壞死模型中，H-FABP能診斷心肌細(xì)胞的壞死。

但是此次研究無法判斷心肌細(xì)胞發(fā)生壞死的具體時(shí)間，還需要大量的臨床和實(shí)驗(yàn)研究。可以確定的是在給藥3 h 時(shí)間點(diǎn)H-FABP已經(jīng)升高但肌鈣蛋白差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可作為比肌鈣蛋白檢測心肌細(xì)胞壞死更早的指標(biāo)應(yīng)用于臨床工作中。