長沙市第一醫(yī)院普通外科 湖南 長沙 410005

據(jù)最新數(shù)據(jù)顯示[1],2018年,全球乳腺癌發(fā)病患者新增約208.9萬人,發(fā)病率約11.6%。乳腺癌的主要治療方法有手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療、內(nèi)分泌治療、放療、靶向藥物等[2]。但部分病人全身情況差不能耐受化療,因此開發(fā)新型中藥對治療乳腺癌具有重要的意義[3-6]。而牛蒡子苷元作為一種中藥對乳腺癌具有一定的抗癌作用,同時對人體細(xì)胞的影響較小,能夠減少化療并發(fā)癥對患者的傷害[7-11],本文主要討論明牛蒡子苷元對乳腺癌細(xì)胞MCF-7的生長抑制作用,為牛蒡子苷元抗癌提供了一定的實驗及理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備 超低溫冰箱(-80℃)(Thermo Scientific Forma公司);冰箱(4℃)、低溫冰箱(-20℃)(海爾公司);制冰機(Scotsman公司);牛蒡子苷元、RPMI1640培養(yǎng)基(Gibcobrl公司);乳腺癌細(xì)胞MCF-7(ATCC公司);DMEM/F12培養(yǎng)基(Invirtrogen公司);胎牛血清FBS(Gibco公司)。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)方式

1.培養(yǎng)液環(huán)境如下:溫度37℃,二氧化碳濃度為5%,濕度飽和,10%胎牛血清FBS(Fetal Bovine Serum)抗生素(100U/ml青霉素及100ug/ml鏈霉素)。

2.生長方式:貼壁生長,傳代周期(2～3天)。

3.試驗方式:制成乳腺癌細(xì)胞MCF-7懸液

1.2.2 用藥組與對照組 取乳腺癌細(xì)胞MCF-7懸液,統(tǒng)計懸液乳腺癌細(xì)胞濃度(1×107個/ml)。利用96孔板將懸液分成4組(每組包含6孔),隨機分配對照組和用藥組,并將其編碼處理,對照組(1組),用藥組(2～3組)。其中1組加入0.02%二甲亞砜溶液。2～3組分別加入濃度為0.5、1.0、1.5mg/ml牛蒡子苷元溶液(采用0.02%二甲亞砜進行溶解)。4組均培養(yǎng)72小時。

1.2.3 光吸值A(chǔ)和增值抑癌率的檢測 為了定量描述牛蒡子苷元對乳腺癌細(xì)胞的生長作用,在此可以用乳腺癌細(xì)胞MCF-7的光吸收值A(chǔ)以及其增值抑癌率ZMCF-7對其作用進行定量表述,其中光吸收值A(chǔ)越小表明乳腺癌細(xì)胞活性越低而牛蒡子苷元對乳腺癌細(xì)胞的生長抑制作用越明顯。反之則作用越小。光吸收值A(chǔ)的測定方法:選擇濃度為5mg/ml的MTT溶液;波長選擇在570nm處測定光吸收值A(chǔ);每隔24小時測定一次;所有數(shù)值測定3次取平均值記錄。

2 結(jié)果

2.1 牛蒡子苷元對乳腺癌細(xì)胞生長影響的定量描述 下表3記錄了1～4組每24小時測定的吸收光值A(chǔ)。

表1 每24小時MTT法檢測1～4組的光吸收值A(chǔ)(A570,±s)

表1 每24小時MTT法檢測1～4組的光吸收值A(chǔ)(A570,±s)

組別 24h 48h 72h F值 P值對照組(1組)1.332±0.345 1.251±0.258 0.998±0.055 137.75 0.000 0.5 mg/l(2組)0.812±0.055#0.778±0.053#0.596±0.049#206.64 0.000 1.0mg/l(3組)0.762±0.044#0.678±0.043#0.488±0.039#170.97 0.000 5.0mg/l(4組)0.484±0.023#0.457±0.022#0.397±0.021#538.95 0.000

注:#vs對照組,P<0.05

2.2 不同濃度的牛蒡子苷元對乳腺癌細(xì)胞的生長作用 表4可以通過表3的光吸收值A(chǔ)以及計算公式(1)計算得來,表4定量的表述不同濃度的牛蒡子苷元對于乳腺癌細(xì)胞MCF-7生長的抑制作用。即隨著牛蒡子苷元濃度的增加,其抑癌增值率值增加,即抑制效果越明顯。

表2 不同濃度牛蒡子苷元的抑癌增值率

3 討論

根據(jù)現(xiàn)有的研究及臨床經(jīng)驗表明,治療乳腺癌最有效的方式是進行手術(shù)切除。但是對于年老體弱或癌細(xì)胞已經(jīng)擴散的病人來說,手術(shù)治療的風(fēng)險及費用都是極高,因此使用藥物治療才是最合適這類人群的選擇。從生物學(xué)的角度來說,乳腺癌細(xì)胞的生長和擴散本質(zhì)上都依賴于外界的營養(yǎng)輸入。而這些營養(yǎng)輸送的通道就是乳腺癌腫瘤表面分布著的血管。而關(guān)于血管的生長機制有研究表明存在多種因子共同作用。根據(jù)以上癌細(xì)胞生長機制,有臨床實驗表明,目前存在一種很好的化療方案,即使用VEGF配體和VEGF受體來阻斷癌細(xì)胞血管生成的大分子靶向藥物貝伐單抗聯(lián)合化療。治療效果較好[12-15],但是抑制血管內(nèi)皮因子VEGF藥物的研發(fā)和生產(chǎn)成本極高[16]。普通病人無法承受使用該藥物的經(jīng)濟壓力。而本文采用的牛蒡子苷元為一種中藥,具有成本低廉,副作用較小,抗癌效果有一定的優(yōu)勢。

綜上所述,牛蒡子苷元在乳腺癌細(xì)胞MCF-7的生長過程中起到抑制作用,且濃度的越大而抑制效果越好。本研究不足之處對照組較少,還需要進一步增加對照組以證實本研究結(jié)論。