張 洋，張磊晶，楊海波，徐 陽，侯召香，周躍明，趙 陽，趙希武*

（1.大慶市第三醫(yī)院，黑龍江 大慶 163712；2.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001；3.大慶市薩爾圖區(qū)人民醫(yī)院，黑龍江 大慶 163000*通信作者：趙希武，E-mail：zxu46019@sina.com）

抑郁癥是以持久性抑郁為主要臨床表現(xiàn)的心境障礙，是精神科的常見病，預(yù)計(jì)到2030年，抑郁障礙可能是全球疾病負(fù)擔(dān)之首［1］。2019年黃悅勤等［2］調(diào)查顯示，我國抑郁癥患者的終身患病率是3.4%。抑郁癥發(fā)病率逐年上升，故快速有效的治療顯得尤為重要，對(duì)其病因機(jī)制的研究是達(dá)到有效治療的必要途徑。既往多項(xiàng)研究表明，精神系統(tǒng)與神經(jīng)、免疫之間有著復(fù)雜的關(guān)系［3-5］，主要通過自主神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)把免疫系統(tǒng)與人體的大腦聯(lián)系起來，免疫細(xì)胞被激活后釋放出的細(xì)胞因子與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相互關(guān)聯(lián)，還與細(xì)胞間的相互作用有關(guān)，從而引起一系列情緒與行為反應(yīng)［6］。隨著免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的逐步應(yīng)用，抑郁癥的研究已經(jīng)深入到免疫細(xì)胞水平。目前，免疫學(xué)研究關(guān)注的焦點(diǎn)是CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，在維持機(jī)體免疫環(huán)境穩(wěn)定中起著至關(guān)重要的作用，如果調(diào)節(jié)性T細(xì)胞出現(xiàn)問題，就可能導(dǎo)致自身免疫性疾病，而CD127-在細(xì)胞膜表面表達(dá)過高，有研究表明，自然產(chǎn)生的Treg最高的細(xì)胞膜標(biāo)志物是CD127［7-9］。然而，目前對(duì)抑郁癥與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的研究較少，故本研究以CD4+CD25+CD127-Treg作為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的衡量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步研究抑郁癥與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的相關(guān)性，以期對(duì)了解抑郁癥與免疫功能之間相互影響有所幫助［10］。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選取2018年1月-12月在大慶市第三醫(yī)院住院治療的首發(fā)抑郁障礙患者作為病例組，入組標(biāo)準(zhǔn)：①符合《精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)（第5版）》（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，fifth edition，DSM-5）抑郁障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②漢密爾頓抑郁量表17項(xiàng)版（Hamilton Depression Scale-17 item，HAMD-17）總評(píng)分＞20分；③年齡18～60歲；④入組前3個(gè)月內(nèi)未服抗抑郁藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有其他精神疾病；②妊娠期、哺乳期婦女；③入組前1個(gè)月內(nèi)有輸血史、炎癥、發(fā)熱及移植手術(shù)史；④有嚴(yán)重的內(nèi)分泌及代謝疾??；⑤患有腦外傷及神經(jīng)系統(tǒng)疾病；⑥患有自身免疫性疾??；⑦有酒精及其他物質(zhì)濫用及依賴史；⑧半年內(nèi)服用過激素制劑和免疫抑制劑。符合入組標(biāo)準(zhǔn)且不符合排除標(biāo)準(zhǔn)共20例。同期納入大慶市第三醫(yī)院體檢中心的健康成人作為對(duì)照組，入組標(biāo)準(zhǔn)：①HAMD-17評(píng)分＜7分；②年齡18～60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有精神疾病家族史；②妊娠期、哺乳期婦女；③近1個(gè)月內(nèi)有輸血史、炎癥、發(fā)熱、移植手術(shù)史及重大創(chuàng)傷事件；④有嚴(yán)重的內(nèi)分泌及代謝疾病；⑤患有腦外傷及神經(jīng)系統(tǒng)疾?。虎藁加凶陨砻庖咝约膊。虎哂芯凭捌渌镔|(zhì)濫用及依賴史；⑧半年內(nèi)服用過激素制劑和免疫抑制劑。符合入住標(biāo)準(zhǔn)且不符合排除標(biāo)準(zhǔn)共20例。本研究經(jīng)大慶市第三醫(yī)院倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)，所有被試及其法定監(jiān)護(hù)人均對(duì)本研究知情同意。

1.2 抗抑郁治療

使用選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑（SSRIs）類藥物對(duì)患者進(jìn)行抗抑郁治療，治療藥物包括：舍曲林（50 mg/片，輝瑞制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：CR9391）、帕羅西?。?0 mg/片，浙江華海藥業(yè)股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：1354E19041）、艾司西酞普蘭（10 mg/片，西安楊森制藥有效公司，生產(chǎn)批號(hào)：2629653）等。對(duì)病例組的患者從上述藥物中選擇單藥治療，從小劑量開始應(yīng)用，逐漸加量，約1～2周內(nèi)達(dá)到有效治療劑量，堅(jiān)持治療12周。

1.3 評(píng)定工具及方法

采用HAMD-17評(píng)定患者抑郁癥狀［11］，由Hamilton于1960年編制，目前為臨床評(píng)定抑郁狀態(tài)時(shí)應(yīng)用得最為普遍的量表。總評(píng)分＜7分為正常，7～17分為存在輕度抑郁癥狀，17～24分為存在中度抑郁癥狀，＞24分為存在重度抑郁癥狀。HAMD-17評(píng)分減分率=（治療前評(píng)分-治療后評(píng)分）/治療前評(píng)分×100%；HAMD-17評(píng)分減分率＜25%為無效，25%～50%為好轉(zhuǎn)，≥50%為顯效；本研究將顯效定為顯效組，無效、好轉(zhuǎn)定為非顯效組。

量表的評(píng)定由一名中級(jí)職稱的精神醫(yī)學(xué)科專業(yè)醫(yī)師獨(dú)立完成，且評(píng)定前該醫(yī)師經(jīng)過系統(tǒng)的HAMD-17使用培訓(xùn)。分別在抑郁癥患者入院第一天及治療12周后進(jìn)行評(píng)定。量表評(píng)定均在病房訪談室內(nèi)完成，耗時(shí)約20 min。

1.4 標(biāo)本采集與檢測(cè)

病例組及健康對(duì)照組均于入組后次日8：00-9：00（患者在接受藥物及物理治療之前），采空腹肘靜脈血2 mL，置于干燥管中。用反向加樣法將肝素抗凝的50 uL外周全血加入流式管底部；分別加入10 uL CD4，5 uL CD25，5 uL CD127，渦動(dòng)儀混勻，室溫避光反應(yīng)20 min，再加入1 mL流式細(xì)胞儀用溶血?jiǎng)ㄏ♂屩?倍）；渦動(dòng)儀混勻，室溫避光反應(yīng)15 min；加入staining buffer至4 mL，離心機(jī)500 g離心5 min，棄去上清，加入staining buffer至4 mL，按照以上步驟再洗滌一次。洗滌完畢后，加入適量staining buffer上機(jī)檢測(cè)。以同樣的方法對(duì)治療12周后病例組再次進(jìn)行檢測(cè)。CD4、CD25、CD127試劑盒由Biolegend公司提供，紅細(xì)胞裂解液由BD Biosciences公司提供。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 24.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，本研究所得數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，用（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，三組間比較采用單因素方差分析，相關(guān)性采用一元線性回歸分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組一般資料比較

病例組共20例，其中男性8例，女性12例，年齡18～60歲［（42.80±9.45）歲］，病程（29.10±18.22）月；對(duì)照組20例，其中男性8例，女性12例，年齡18～60歲［（42.65±9.44）歲］。兩組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 病例組和對(duì)照組HAMD-17評(píng)分、CD4+CD2 5+CD127-/淋巴、CD4+CD25+CD127-/CD4+比較

抑郁癥患者治療前HAMD-17評(píng)分高于治療后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；病例組治療前和治療后CD4+CD25+CD127-/CD4+均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），三組間CD4+CD25+CD127-/淋巴細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 病例組CD4+CD25+CD127-/CD4+的流式細(xì)胞圖檢測(cè)

對(duì)病例組CD4+CD25+CD127-/CD4+進(jìn)行了流式細(xì)胞圖檢測(cè)。見圖1、圖2、圖3。

表1 病例組與對(duì)照組HAMD-17評(píng)分、CD4+CD25+CD127-/淋巴、CD4+CD25+CD127-/CD4+比較

圖1 淋巴細(xì)胞

圖2 CD4+T淋巴細(xì)胞

圖3 CD4+CD25+CD127-/CD4+

2.4 顯效組與非顯效組CD4+CD25+CD127-/CD4+變化率與HAMD-17評(píng)分減分率的線性回歸分析

把“CD4+CD25+CD127-/CD4+的變化率（變化率=治療前后 CD4+CD25+CD127-/CD4+差值/治療前CD4+CD25+CD127-/CD4+）×100%”作為自變量 ；“HAMD-17評(píng)分減分率”作為因變量進(jìn)行一元線性回歸分析，同時(shí)按“HAMD-17評(píng)分減分率”將病例組分為顯效組和非顯效組，回歸分析結(jié)果顯示顯效組CD4+CD25+CD127-/CD4+變化率和HAMD-17評(píng)分減分率呈正相關(guān)（r=0.716，P＜0.05）。見表2。

表2 顯效組與非顯效組CD4+CD25+CD127-/CD4+的變化率與HAMD-17評(píng)分減分率的線性回歸分析

3 討 論

Treg細(xì)胞免疫表型為CD4+CD25+CD127，通過多種機(jī)制參與機(jī)體的免疫調(diào)控，在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用，降低了機(jī)體對(duì)炎癥細(xì)胞的免疫監(jiān)視和免疫攻擊能力，深入研究調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和抑郁癥免疫之間的關(guān)系有助于進(jìn)一步揭示抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展及發(fā)病機(jī)制［12］。本研究結(jié)果顯示，抑郁癥患者治療前外周血中CD4+CD25+CD127-/CD4+的比例明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），冀德才等［13］研究顯示，抑郁癥自殺未遂患者治療前外周血及血漿中CD4+、CD25+均增高，與本研究結(jié)果一致。經(jīng)過12周治療后，CD4+CD25+CD127-/CD4+較治療前低，提示免疫細(xì)胞可能參與了抑郁癥的發(fā)病過程。在實(shí)際臨床中存在抑郁癥患者未經(jīng)治療，癥狀逐漸改善，但經(jīng)過病情平復(fù)期后，抑郁癥狀會(huì)再次出現(xiàn)的現(xiàn)象。據(jù)此可推斷，當(dāng)機(jī)體受到外界病原侵襲時(shí)，在免疫應(yīng)答沒有開啟時(shí)，機(jī)體發(fā)生自身免疫反應(yīng)是由自身抗體產(chǎn)生的結(jié)果，導(dǎo)致抑郁癥出現(xiàn)。若完全啟動(dòng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答和固有免疫應(yīng)答時(shí)，病原微生物會(huì)很快地被清除，出現(xiàn)自愈。若又有新的微生物感染時(shí)，抑郁癥狀會(huì)再次出現(xiàn)，就像“流感”一樣［14］。既往研究也表明，抑郁癥患者存在著廣泛的免疫功能低下［15］，更易發(fā)生自身免疫性疾病。提示治療前對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)及評(píng)估，可能有助于抑郁癥的早期診斷及治療。

本研究發(fā)現(xiàn)，顯效組CD4+CD25+CD127-/CD4+的變化率與HAMD-17評(píng)分減分率呈正相關(guān)，提示抑郁癥患者經(jīng)過12周的SSRIs類藥物治療，外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+水平下降與抑郁癥狀的改善存在正向關(guān)聯(lián)，或者說CD4+CD25+CD127-/CD4+的有效降低可能預(yù)示抑郁癥的治療效果較好。申永輝等［16］也發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者經(jīng)治療后，其血清炎癥細(xì)胞因子水平及HAMD-17評(píng)分均明顯下降，且血清炎癥細(xì)胞因子水平與抑郁癥狀的改善有關(guān)。也有許多研究顯示，抑郁癥治療抵抗與許多細(xì)胞因子，如IL-6、TNF-α水平有關(guān)［17-18］。因此，有必要深入探討更多的免疫細(xì)胞因子水平與抗抑郁療效的關(guān)系，為臨床抗抑郁治療尋求療效指標(biāo)。

抑郁癥炎癥理論與T細(xì)胞有一定相關(guān)性早在20多年前就被提出，許多研究開始探討抑郁癥與免疫功能之間的關(guān)系［19］。近年來細(xì)胞免疫因子已被證明可能進(jìn)入大腦并參與到與抑郁癥有關(guān)的病理生理，包括神經(jīng)遞質(zhì)代謝，神經(jīng)內(nèi)分泌功能和神經(jīng)可塑性。如果細(xì)胞免疫因子信號(hào)到達(dá)大腦，這些炎癥因子可以對(duì)單胺類遞質(zhì)的合成及再攝取產(chǎn)生影響，如IL-1、IL-6等細(xì)胞因子可激活吲哚胺2，3-雙加氧酶（IDO），并通過IDO將5-HT的前體色氨酸轉(zhuǎn)化為犬尿氨酸，從而使5-HT的合成顯著下降［20］；另一方面促炎癥因子也可以影響糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致丘腦和垂體對(duì)皮質(zhì)醇變化敏感性增強(qiáng)，由此使HPA軸的負(fù)反饋減少，HPA過度激活，從而誘導(dǎo)抑郁的發(fā)生。越來越多證據(jù)表明，經(jīng)過抗抑郁藥物治療后，抑郁癥狀明顯改善，腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)達(dá)到平衡，同時(shí)細(xì)胞免疫因子水平明顯降低［21-22］。許多研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥和免疫炎癥之間存在雙向聯(lián)系，有效的抗抑郁治療可能會(huì)緩解患者的抑郁情緒，改善調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能，來輔助緩解自身免疫性疾病的病情發(fā)展，進(jìn)而對(duì)健康產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響［23］。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示抑郁癥患者經(jīng)SSRIs類藥物治療12周，其外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+水平及HAMD-17評(píng)分均明顯下降，且外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+水平的降低可能與抗抑郁治療的療效有相關(guān)性，進(jìn)一步解釋了抑郁癥患者體內(nèi)存在免疫失衡的現(xiàn)象。本研究部分證實(shí)了抑郁癥的免疫細(xì)胞因子假說，但由于本研究樣本量較少，以后進(jìn)一步增加樣本量，并希望通過免疫細(xì)胞靶點(diǎn)的研究對(duì)抗抑郁藥物的研發(fā)提供新思路。