朱 鳳，劉與進(jìn)，吳 慧，楚 思，范 恒

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院，湖北 武漢 430022)

潰瘍性結(jié)腸炎是一種反復(fù)發(fā)作的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，臨床表現(xiàn)主要為腹痛、腹瀉、黏液膿血便，纏綿難愈，嚴(yán)重影響患者日常工作和生活[1]。該病西藥治療效果有限，且長(zhǎng)期治療多伴有嚴(yán)重副作用。復(fù)方苦參合劑是由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院中醫(yī)科研制的能有效治療潰瘍性結(jié)腸炎的院內(nèi)制劑，具有清熱解毒、涼血燥濕的功效，臨床研究數(shù)據(jù)表明中西醫(yī)結(jié)合治療潰瘍性結(jié)腸炎的效果明顯優(yōu)于單純西藥治療[2]，可以顯著改善患者生活質(zhì)量。雖然與西藥相比，中藥復(fù)方具有毒副作用小、價(jià)格便宜的優(yōu)點(diǎn)。但是，近年來(lái)隨著對(duì)中藥及其制劑的廣泛應(yīng)用和毒性研究的深入，某些補(bǔ)益中藥和許多被認(rèn)為無(wú)毒的中藥也被證實(shí)具有一定的毒副作用[3]。本研究依據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究指導(dǎo)原則》的要求[4]，探討了復(fù)方苦參合劑灌胃給藥對(duì)小鼠的急性毒性，報(bào)告如下。

1 材料與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

復(fù)方苦參合劑濃縮液：由湖北省中醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)：20181023。復(fù)方苦參合劑組成：苦參300 g、地榆炭300 g、白及200 g、青黛60 g、甘草200 g、三七粉60 g，加水煎煮2次，濃縮至800 mL，無(wú)菌分裝4瓶，藥物濃度為1.40 g/mL，成人每日用量為56 g生藥/60 kg。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4～5周(18～22 g)SPF級(jí)昆明(KM)小鼠60只，雌雄各半，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào)為SCXK(鄂)2016-0009。實(shí)驗(yàn)環(huán)境為華中科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，室溫：(22±3)℃，相對(duì)濕度：55%～60%，無(wú)對(duì)流風(fēng)，人工晝夜(12 h白晝、12 h黑夜)。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)

正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，取SPF級(jí)KM小鼠20只，隨機(jī)分為2組，每組10只，雌雄各半。分為實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2。分別予以1.40 g/mL(可供灌胃最大濃度)、0.70 g/mL復(fù)方苦參合劑灌胃。灌胃體積均為0.4 mL/10 g(小鼠一次可承受的最大給藥容積)，24 h內(nèi)給藥2次，給藥后觀察小鼠外觀、活動(dòng)、飲食均無(wú)明顯變化，連續(xù)觀察7天，小鼠無(wú)毒性反應(yīng)及死亡。因復(fù)方苦參合劑毒性低，動(dòng)物灌胃給藥受藥物濃度和體積限制，測(cè)定不出LD50，故正式實(shí)驗(yàn)進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)。

2.2 正式實(shí)驗(yàn)(最大給藥量實(shí)驗(yàn))

取SPF級(jí)KM小鼠40只，隨機(jī)分為2組，每組20只，雌雄各半，分為正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。正常對(duì)照組予以生理鹽水，按0.4 mL/10 g灌胃；實(shí)驗(yàn)組予以等體積1.40 g/mL復(fù)方苦參合劑灌胃。

2.3 給藥方法及觀察指標(biāo)

給藥前小鼠禁食不禁水12 h，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別灌胃給予濃度為1.40 g/mL的復(fù)方苦參合劑和生理鹽水，灌胃體積為0.4 mL/10g，24 h內(nèi)給藥2次，間隔期間不進(jìn)食，第二次給藥2 h后恢復(fù)正常飲食，觀察并記錄給藥后30 min、2 h及其后14 d小鼠毛發(fā)色澤、活動(dòng)、飲食、排泄物、體質(zhì)量變化、毒性反應(yīng)及死亡數(shù)。若有死亡小鼠，立即解剖，觀察其內(nèi)臟病理變化，若存在肉眼可見(jiàn)的異常變化則進(jìn)行病理學(xué)檢查。所有小鼠于實(shí)驗(yàn)第15天脫頸處死，解剖心肝脾肺腎結(jié)腸并觀察病理變化，每組各取雌雄小鼠一只，內(nèi)臟組織標(biāo)本經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋、切片、HE染色后，光鏡下觀察藥物對(duì)各臟器的影響。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組小鼠死亡率及一般情況變化

實(shí)驗(yàn)14 d內(nèi)兩組小鼠死亡率(見(jiàn)表1)及臨床變化如下：實(shí)驗(yàn)組及正常對(duì)照組小鼠在兩次灌胃30 min內(nèi)活動(dòng)稍減緩，飲食稍減少，精神狀態(tài)、毛發(fā)色澤、排泄物等均正常，2 h后活動(dòng)自如、飲食正常，口鼻無(wú)異常分泌物，無(wú)毒性反應(yīng)，連續(xù)觀察14天，動(dòng)物一般情況良好，活動(dòng)自如，皮毛光滑，飲食及二便未見(jiàn)明顯異常。無(wú)死亡小鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死所有小鼠，大體解剖肉眼觀察小鼠心、肝、脾、肺、腎、結(jié)腸等主要臟器無(wú)明顯異常變化。

表1 小鼠死亡情況

3.2 各組小鼠體質(zhì)量變化

灌胃復(fù)方苦參合劑及生理鹽水后，連續(xù)觀察并記錄14 d小鼠體質(zhì)量變化情況(見(jiàn)表2及圖1)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩組小鼠在給藥后體質(zhì)量均較前增加，給藥后實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 復(fù)方苦參合劑急性毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

圖1 給藥后小鼠體質(zhì)量變化情況

3.3 各組小鼠內(nèi)臟組織病理學(xué)變化

兩組小鼠心、肝、脾、肺、腎及結(jié)腸組織病理染色結(jié)果見(jiàn)圖2。兩組小鼠結(jié)腸組織黏膜完整，腺體排列整齊，可見(jiàn)杯狀細(xì)胞；心臟組織心肌纖維呈不規(guī)則短圓柱狀，心肌細(xì)胞排列有序；肝臟細(xì)胞形態(tài)正常，排列緊密，肝小葉結(jié)構(gòu)正常；脾組織形態(tài)正常，無(wú)瘀血、梗死等特征；肺組織肺泡間隔正常，結(jié)構(gòu)清晰；腎組織結(jié)構(gòu)正常，兩組各個(gè)臟器均無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化等病理變化。小鼠實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。

注：A、C、E、G、M、Q為實(shí)驗(yàn)組的結(jié)腸、心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟病理染色結(jié)果；

4 討論

急性毒性實(shí)驗(yàn)是一次給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物某種受試物后，觀察藥物在短時(shí)間內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)的試驗(yàn)方法[5]。復(fù)方苦參合劑成人每日臨床給藥劑量為56 g/60 kg，小鼠灌胃一次最大給藥量為3 360 g/60 kg，本研究對(duì)小鼠進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，以最高濃度1.40 g/mL每日灌胃給藥2次(相當(dāng)于臨床劑量的120倍)，連續(xù)觀察14天，未見(jiàn)動(dòng)物出現(xiàn)毒性反應(yīng)，因此本品小鼠灌胃最大耐受劑量大于3 360 g/60 kg。一般認(rèn)為，按體質(zhì)量計(jì)算，小鼠1天內(nèi)最大給藥量相當(dāng)于成人臨床日用量的100倍以上較為安全[6]。該實(shí)驗(yàn)表明復(fù)方苦參合劑在最大給藥量時(shí)對(duì)小鼠內(nèi)臟無(wú)急性毒副作用，故臨床擬用灌胃劑量是安全的。