尹 磊，朱月健，李冬梅，段體斌，葛德助

(1.安徽普仁中藥飲片有限公司，安徽 亳州 236800；2.中藥提取安徽省技術(shù)創(chuàng)新中心，安徽 亳州 236800；3.安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司，安徽 亳州 236800)

六神曲為面粉(麥粉)和其他藥物混合后，經(jīng)發(fā)酵而成的加工品，其一般制法為取面粉(麥粉)，與杏仁、赤小豆以及青蒿、蒼耳、辣蓼汁或煎煮液混合均勻后發(fā)酵、切丁、干燥而成，其性溫，味甘、辛，歸脾、胃經(jīng)，具有健脾和胃、消食調(diào)中等功效[1]。六神曲臨床應(yīng)用廣泛，但主要化學(xué)成分尚不清晰，各省地方炮制規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)也具有一定差異性，歷版中國(guó)藥典至今未收載該品[2]。本研究主要對(duì)六神曲的古代文獻(xiàn)記載內(nèi)容以及現(xiàn)代炮制工藝、化學(xué)成分、藥理作用和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等文獻(xiàn)資料進(jìn)行綜述分析，為制定統(tǒng)一的炮制加工標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 六神曲炮制工藝歷史沿革

1.1 古代炮制工藝

“曲”最早載于南北朝《雷公炮炙論》：“曲，凡使，搗作末后，掘地坑深二尺，用物裹，內(nèi)坑中至一宿，明出，焙干用?！备鶕?jù)歷代古籍記載，最早在宋代已記載“六神曲陳久者良，炒用”，雖然各個(gè)朝代所記載的炮制方法和組分比較相似，但其配方物料比例和發(fā)酵方法出入很大。具體內(nèi)容見(jiàn)表1。

表1 六神曲古代炮制工藝

續(xù)表1

通過(guò)對(duì)歷代古籍的搜集整理發(fā)現(xiàn)，不同朝代的制曲工藝都不盡相同，元代制神曲是用白面、生姜等，組方較少比較單一；到了明代則用白面、青蒿、赤小豆、杏仁、蒼耳、野蓼等，雖然制曲的工藝各有出入，但其基本組方物料種類(lèi)已和現(xiàn)代六神曲組方物料種類(lèi)基本相同，并且發(fā)酵時(shí)間和發(fā)酵溫度均提出在六月進(jìn)行高溫發(fā)酵，至表面生黃白衣，與當(dāng)前發(fā)酵條件、發(fā)酵終點(diǎn)判斷類(lèi)似。

1.2 現(xiàn)代各省地方炮制方法

六神曲是發(fā)酵類(lèi)中藥的代表之一，各個(gè)地區(qū)的炮制工藝和標(biāo)準(zhǔn)不盡相同。北方地區(qū)多使用面粉，而南方地區(qū)麥麩用量較大，各原料比例也不同[3]，且包括辣蓼、青蒿和蒼耳草鮮藥與干品，直接榨汁和煎煮取汁混勻發(fā)酵，赤小豆與苦杏仁煮熟后發(fā)酵與生品粉碎直接發(fā)酵等。具體情況，見(jiàn)表2。

表2 六神曲現(xiàn)代炮制工藝

通過(guò)對(duì)各省份炮制標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)各省標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范中六神曲的組方雖有一定區(qū)別，但均主要由面粉(麥麩)、赤豆、苦杏仁和青蒿、蒼耳草、辣蓼組成。主要區(qū)別在于物料的鮮用與干用以及赤小豆、苦杏仁的生熟制用及軟材發(fā)酵形態(tài)等，浙江省制定的炮制規(guī)范15版限定單一發(fā)酵菌種，生產(chǎn)的成品相對(duì)品質(zhì)穩(wěn)定。同時(shí)根據(jù)以上炮制工藝方法記載，很多工藝方法較為簡(jiǎn)單，且不適合飲片企業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)，需要進(jìn)一步的優(yōu)化。

2 六神曲現(xiàn)代研究

2.1 炮制工藝研究

目前六神曲的炮制用料種類(lèi)基本固定，工藝相關(guān)的研究主要集中在物料配比、發(fā)酵條件和發(fā)酵菌種研究等。高慧[4]比較蒼耳草、辣蓼與青蒿鮮品、干品以及直接干品粉碎投料發(fā)酵后成品的色譜圖和酶活性，發(fā)現(xiàn)三種結(jié)果沒(méi)有顯著性差異，同時(shí)也比較了苦杏仁生品和煮后拌料發(fā)酵薄層圖和酶活性，二者之間也沒(méi)有顯著性差異。程亦雄[5]通過(guò)篩選單一純化菌種賽氏曲霉進(jìn)行六神曲深層次液態(tài)發(fā)酵研究，并確定其工藝：面粉麥麩量12 g(比例為1∶6)，苦杏仁與赤小豆各0.48 g，青蒿、蒼耳草、辣蓼各0.28 g，KH2PO40.20 g，150 mL清水混勻，發(fā)酵溫度28 ℃，搖床轉(zhuǎn)速180 r/min，發(fā)酵7 d，濃縮干燥。賈丹丹[6]通過(guò)分析六神曲發(fā)酵過(guò)程中的微生物種類(lèi)，發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，并且最終分離鑒別的菌種包括細(xì)菌、真菌和酵母菌，對(duì)于六神曲物料的耐受性較強(qiáng)且均產(chǎn)生酶解活性，該項(xiàng)發(fā)現(xiàn)也證實(shí)了六神曲發(fā)酵時(shí)混合菌種的共同作用。相較于傳統(tǒng)發(fā)酵工藝，當(dāng)前關(guān)于六神曲的炮制工藝逐步延伸到單一菌種發(fā)酵或優(yōu)勢(shì)種群發(fā)酵，規(guī)范物料組方配比和發(fā)酵條件逐步固定，形成的產(chǎn)品質(zhì)量也不斷提升和可控。

2.2 化學(xué)成分研究

有關(guān)六神曲化學(xué)成分的研究較少，并且其發(fā)酵物料種類(lèi)較多，發(fā)酵過(guò)程中的內(nèi)在成分轉(zhuǎn)化也較為復(fù)雜。練晶軍[7]研究發(fā)現(xiàn)六神曲主要成分為揮發(fā)油、維生素B族、麥角固醇、苷類(lèi)、淀粉酶和蛋白酶等。陳繽[8]分析發(fā)現(xiàn)，神曲發(fā)酵后青篙素和苦杏仁普色譜峰均消失，推測(cè)其在發(fā)酵過(guò)程中成分結(jié)構(gòu)發(fā)生轉(zhuǎn)化，并分離到發(fā)酵后新化合物，初步推斷為十八碳烯酸。王麗芳等[9]比較分析六神曲發(fā)酵過(guò)程中使用青蒿等鮮品與干品的藥效物質(zhì)，結(jié)果顯示鮮品組發(fā)酵槲皮苷等成分均顯著高于基本組及干品組。張慧茹等[10]從六神曲氯仿提取物中分離得到11個(gè)長(zhǎng)鏈烯酸類(lèi)化合物，其中部分化合物具有抗炎活性。徐云等[11]通過(guò)分析六神曲發(fā)酵過(guò)程中多種消化酶活性動(dòng)態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)糖化酶、淀粉酶、纖維素酶、脂肪酶在發(fā)酵4天后達(dá)到高峰，隨后逐步穩(wěn)定，蛋白酶在發(fā)酵前4天變化不大，隨后逐步增加并穩(wěn)定。練晶軍[7]分析發(fā)現(xiàn)，市場(chǎng)上六神曲淀粉酶活性及指紋圖譜等均顯示出較大差異，通過(guò)分析發(fā)酵過(guò)程中淀粉酶活性和指紋圖譜變化，發(fā)現(xiàn)淀粉酶活性隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)而增加，并于7天后趨于穩(wěn)定，指紋圖譜顯示信息組成在發(fā)酵3天后基本穩(wěn)定。綜上所示，六神曲作為多組分藥物發(fā)酵品，其成分較為復(fù)雜，且發(fā)酵前后變化較大，并產(chǎn)生新化合物，需要對(duì)其發(fā)酵過(guò)程進(jìn)一步分析，以明確其能夠反映六神曲發(fā)酵程度的優(yōu)劣。

2.3 藥理作用研究

作為健胃消食要藥，六神曲自古代即被臨床使用，尤善消米面食。張紅玲等[12]分析食積小鼠灌服六神曲后的胃泌素、膽堿酯酶以及血清中NO等的含量變化，發(fā)現(xiàn)小鼠胃泌素、膽堿酯酶的分泌增加，血清中NO的含量降低。王秋紅等[13]研究麩炒六神曲乙酸乙酯提取部位的抗菌效果，發(fā)現(xiàn)最低抑菌濃度為0.64 g·L-1，最低殺菌濃度為0.65 g·L-1。郭麗雙等[14]通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，破壞小鼠腸道微生物菌群，形成腸道組織潰瘍，并灌服六神曲液，以自然恢復(fù)為對(duì)照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組腸道潰瘍恢復(fù)速度較快，也證實(shí)了六神曲對(duì)于小鼠腸道潰瘍的修復(fù)作用。劉峰等[15]通過(guò)分析六神曲對(duì)大鼠腸平滑肌收縮作用，發(fā)現(xiàn)六神曲能夠增強(qiáng)對(duì)大鼠腸平滑肌的收縮作用。莊彥華等[16]通過(guò)比較患有腸易激綜合征(IBS)患者服用六神曲煎液前后糞便乳酸桿菌和雙歧桿菌以及腸桿菌的數(shù)量變化，結(jié)果顯示服藥后患者糞便中有益菌群數(shù)量增加，腸桿菌的生長(zhǎng)受到抑制。六神曲中含有豐富的消化酶，發(fā)酵過(guò)程中因特種微生物或微生物群分解發(fā)酵基質(zhì)產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶等，進(jìn)而達(dá)到健胃消食的作用。

2.4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

現(xiàn)有各省地方炮制規(guī)范關(guān)于六神曲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)多是性狀描述，部分增加了顯微鑒別，對(duì)于六神曲發(fā)酵層度的優(yōu)劣性無(wú)法評(píng)價(jià)。而文獻(xiàn)資料針對(duì)六神曲的成分含量測(cè)定、指紋圖譜以及酶活性等質(zhì)量控制已有大量記載，尤其酶活性的檢測(cè)更能反映出其臨床療效。黃國(guó)能[17]研究發(fā)現(xiàn)消化酶是曲劑發(fā)酵過(guò)程中的代謝產(chǎn)物和重要的藥效物質(zhì)，其含量變化可作為判斷質(zhì)量?jī)?yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)。王云庭等[18]以麥芽低聚糖酶的活力作為分析評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察不同產(chǎn)地、不同樣品六神曲的品質(zhì)差異。王麗芳等[9]比較各組六神曲樣品間發(fā)酵前后化學(xué)成分的差異，建立15個(gè)共有指紋峰，確定槲皮苷、木犀草素、槲皮素3種成分并檢測(cè)其含量，以槲皮素為參照峰，計(jì)算15個(gè)共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，能夠有效反映出六神曲的質(zhì)量。謝彥博[19]對(duì)六神曲HPLC指紋圖譜進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)根據(jù)組方物料中有效峰的數(shù)量，可以在配方中調(diào)整物料的配比，通過(guò)加大蒼耳草和青蒿的比重，可有效調(diào)節(jié)六神曲的產(chǎn)品質(zhì)量。朱德全等[20]研究發(fā)現(xiàn)利用六神曲的乙醇提取物的紅外光譜鑒別能快速鑒別六神曲飲片，并用于指導(dǎo)六神曲的真?zhèn)舞b別工藝，可以有效控制六神曲的質(zhì)量。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，六神曲主要包括面粉(麥麩)、杏仁、赤小豆和蒼耳草、辣蓼、青蒿六種物料，但各地配比和發(fā)酵方式有所差異，北方地區(qū)發(fā)酵基質(zhì)多采用面粉，南方多采用麥麩與面粉混合物，對(duì)于杏仁和赤小豆，處理方式多采用粉碎后直接混合發(fā)酵，蒼耳草等三種草藥鮮品榨汁與干品煎煮對(duì)于六神曲質(zhì)量影響不大，對(duì)于發(fā)酵時(shí)間多以發(fā)酵7天左右為優(yōu)，其酶活性和指紋圖譜等也均趨于穩(wěn)定；同時(shí)對(duì)于發(fā)酵菌種目前多采用自然發(fā)酵，部分省市采用單一米曲霉孢子發(fā)酵，成品質(zhì)量也符合傳統(tǒng)要求，并且對(duì)于發(fā)酵菌種或菌群的分離鑒別也先后分離出多種菌種，包括細(xì)菌、真菌、酵母菌等，類(lèi)似傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)，考慮是否能夠采用六神曲自然干燥后的成品進(jìn)行優(yōu)勢(shì)菌種群進(jìn)行后期添加發(fā)酵，一方面逐步純化優(yōu)勢(shì)菌種群，便于企業(yè)內(nèi)菌種的不斷繁殖、保存，并且也能夠確保菌種群同時(shí)起到發(fā)酵作用，提升成品質(zhì)量；最后對(duì)于發(fā)酵方式目前主要分為物料混勻整體發(fā)酵后切丁和制丁后發(fā)酵，結(jié)合目前行業(yè)生產(chǎn)實(shí)際，制丁后發(fā)酵便于行業(yè)規(guī)?；a(chǎn)且發(fā)酵程度較整體發(fā)酵高。

通過(guò)比較六神曲傳統(tǒng)發(fā)酵工藝、當(dāng)前研究文獻(xiàn)與行業(yè)實(shí)際，工業(yè)化和規(guī)?；a(chǎn)需求迫切需要對(duì)當(dāng)前生產(chǎn)水平進(jìn)行轉(zhuǎn)變，其統(tǒng)一的炮制方法和標(biāo)準(zhǔn)也急需制定，以適應(yīng)六神曲現(xiàn)代智能調(diào)控生產(chǎn)，提升其產(chǎn)能和質(zhì)量的穩(wěn)定性。