李石化，楊建龍

（長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心，吉林 長(zhǎng)春 130000）

復(fù)方丹參片是中醫(yī)常用的理血方劑，主要由丹參，三七，冰片組成[1-2]。復(fù)方丹參片具有活血化瘀，理氣止痛的功效，被收入中國(guó)藥典2015年版[3-4]。臨床研究顯示復(fù)方丹參片在氣滯血瘀所致的胸痹、心痛等病癥應(yīng)用廣泛[5]。冰片可芳香開(kāi)竅，行氣止痛，是復(fù)方丹參片中的主要成分之一。但是由于冰片性質(zhì)的特殊性，易揮發(fā)，且生產(chǎn)時(shí)投料較少，因此含量容易下降[6-7]。本次研究應(yīng)用氣相色譜法建立復(fù)方丹參片中冰片含量，考查復(fù)方丹參片中冰片提取方法的效果，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫的GC-4890D型氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器以及杭州普惠的SePu 3000色譜工作站。

1.2 試藥

復(fù)方丹參片由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供，（批號(hào)19040513，19051106，19062205）。異龍腦對(duì)照品、龍腦對(duì)照品均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供（批號(hào)111512-201904、110881-201902）。無(wú)水乙醇為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選用DB-WAX色譜柱（30mm，0.32mm，0.25μm），柱溫初始100℃，后以7.0℃/min的升溫速度將柱溫升至160℃。檢測(cè)器的溫度設(shè)置為230℃，載氣流速設(shè)定為2.0mL/min。

采用分流進(jìn)樣，分流比為15:1。進(jìn)樣量為1μL，用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)標(biāo)物選用水楊酸甲酯。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

量取適量的水楊酸甲酯，加入含有無(wú)水乙醇的量瓶中，制成0.20mg/ mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2 供試液的制備

取復(fù)方丹參片10片，細(xì)細(xì)研磨后。精密稱定0.3g樣品將其加入燒瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液8mL，進(jìn)行超聲溶解20min，待其冷卻后再加內(nèi)標(biāo)溶液定標(biāo)10mL。

2.2.3 對(duì)照溶液的制備

分別取適量的龍腦、異龍腦對(duì)照品0.3g，加入適量的內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻制備成龍腦0.15mg/ mL、異龍腦0.10mg/ mL的混合對(duì)照溶液。

2.2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備

取不含龍腦、異龍腦的復(fù)方丹參片，研磨后稱定適量，按同法制定成陰性對(duì)照品溶液。

3 方法學(xué)考察

3.1 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照溶液，在2.1色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果可見(jiàn)龍腦、異龍腦和水楊酸甲酯三峰能夠有效分離，且陰性對(duì)照品溶液中在龍腦、異龍腦的相同位置沒(méi)有色譜峰，專屬性良好，干擾小。

3.2 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、1.2、2.4mL放入10mL 量瓶中，經(jīng)內(nèi)標(biāo)溶液稀釋定容。依次取樣1μL注入氣相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以龍腦、異龍腦與內(nèi)標(biāo)物比值峰面積為縱坐標(biāo)，濃度的比值為橫坐標(biāo)，繪制其回歸方程為：①異龍腦Y =6.7912X-2.4605 ；②龍腦Y =7.1395X-3.9138。結(jié)果顯示異龍腦、龍腦分別在65.2～84.9ng、55.8～98.1ng 范目?jī)?nèi)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系（r=0.9982、0.9993）。

3.3 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，稀釋定容后取樣按上述色譜條件進(jìn)行重復(fù)測(cè)定6次。測(cè)定結(jié)果顯示異龍腦,龍腦與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值較為穩(wěn)定，其RSD分別為0.93%,0.98%.

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取批號(hào)19040513的供試品溶液，稀釋定容后，在室溫下放置，每間隔2h進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果顯示龍腦、異龍腦與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值的RSD分別為0.93%、0.90%，顯示供試品溶液在12h內(nèi)可保持穩(wěn)定.

3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)19040513的復(fù)方丹參片供試品溶液6 份，按之前的色譜條件進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，結(jié)果顯示龍腦和異龍腦的RSD分別為0.92%, 0.89%(n=6)。

3.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取批號(hào)19040513的樣品制成供試品溶液，分別加入樣品含量50%，100%，150%的異龍腦,龍腦對(duì)照品，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算異龍腦,龍腦的含量,結(jié)果顯示異龍腦、龍腦的回收率分別為98.4%、99.1%,RSD分別為1.14%，0.97%。

3.7 樣品含量測(cè)定

對(duì)于三個(gè)批號(hào)的復(fù)方丹參片供試品分別制備供試品溶液，均進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果可見(jiàn)三批的龍腦含量分別為1.523、1.518、1.530mg/片，異龍腦分別為0.913、0.891、0.930mg/片，詳見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方丹參片樣品的龍腦、異龍腦含量測(cè)定

4 討 論

冰片也稱為合成龍腦，由龍腦和異龍腦構(gòu)成，其揮發(fā)性較強(qiáng)，對(duì)于復(fù)方丹參片的質(zhì)量也一定的影響[8-9]。本次研究建立氣相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參片的冰片含量，內(nèi)標(biāo)物選用水楊酸甲酯，其出峰時(shí)間與龍腦相近[10]，而柱溫選擇，我們考量了不同溫度下的色譜圖，結(jié)果顯示在150-160時(shí)，色譜圖最佳。結(jié)果顯示應(yīng)用氣相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參片中冰片含量，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，可用于其質(zhì)量控制。