郝東敏，鐘洪義，高 斌，馬有全，許傳寶，程冰花

(安徽強(qiáng)英鴨業(yè)集團(tuán)有限公司動(dòng)保中心，安徽 碭山 235300)

鴨坦布蘇病于2010年4月在我國江浙地區(qū)養(yǎng)鴨業(yè)比較集中的地區(qū)暴發(fā)，造成蛋鴨產(chǎn)蛋量大幅下降，雛鴨發(fā)生神經(jīng)癥狀甚至死亡[1]。該病傳播迅速，蔓延范圍廣，可導(dǎo)致蛋鴨產(chǎn)蛋率從90%左右下降至10%以下，給國內(nèi)的養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

目前，疫苗免疫是預(yù)防鴨坦布蘇病毒感染的主要途徑，國內(nèi)市場上已有多家疫苗公司在進(jìn)行鴨坦布蘇病毒疫苗的生產(chǎn)和銷售，為該病的預(yù)防提供了強(qiáng)有力的保障。但在坦布蘇病毒活疫苗免疫過程中，為避免鴨注射部位的感染，很多養(yǎng)殖戶選擇在疫苗中添加頭孢類抗生素，抗生素在避免感染的同時(shí)，是否會(huì)降低免疫效果卻未經(jīng)過驗(yàn)證，本試驗(yàn)選擇了國內(nèi)2個(gè)廠家生產(chǎn)的坦布蘇病毒活疫苗和頭孢噻呋鈉進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)，鴨坦布蘇病毒活疫苗中添加頭孢噻呋鈉會(huì)降低免疫抗體滴度，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 1日齡櫻桃谷肉鴨由安徽強(qiáng)英鴨業(yè)集團(tuán)有限公司提供。

1.2 其他材料 鴨坦布蘇病毒活疫苗，購自國內(nèi)2個(gè)疫苗生產(chǎn)廠家(分別標(biāo)記為疫苗1、疫苗2)；頭孢噻呋鈉，購自魯抗醫(yī)藥；坦布蘇病毒抗體ELISA檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所；10日齡SPF雞胚,購自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 母源抗體的檢測 選擇1日齡櫻桃谷商品鴨苗50只，分別于1、4、7、10、15日齡和20日齡隨機(jī)選擇12只于頸靜脈采血，按照中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所研發(fā)的坦布蘇病毒抗體檢測試劑盒說明書，檢測坦布蘇病毒母源抗體水平。

1.3.2 試驗(yàn)用溶液的配置 分別配置A、B、C、D四種溶液，具體配置方法如表1。

表1 各溶液的成分及配置方法

1.3.3 溶液pH及ELD50的測定 用pH計(jì)對稀釋好的A、B、C、D四種溶液及普通生理鹽水進(jìn)行pH的測定，同時(shí)用7日齡SPF雞胚對其進(jìn)行ELD50測定。

1.3.4 試驗(yàn)動(dòng)物的免疫及抗體檢測 取1.3.1中飼養(yǎng)的無母源抗體櫻桃谷肉鴨40只，平均分為4組，分別標(biāo)記為A、B、C、D組，隔離飼養(yǎng)，按照表2所示進(jìn)行免疫。免疫后3、7、14 d和21 d，每組隨機(jī)選取6只試驗(yàn)鴨采血，分離血清，按試劑盒說明書進(jìn)行坦布蘇病毒抗體水平檢測。

表2 試驗(yàn)鴨分組

2 結(jié)果

2.1 雛鴨坦布蘇病毒母源抗體變化 坦布蘇病毒抗體檢測樣品平均阻斷率(PI)及抗體陽性率隨著雛鴨日齡的增大，呈逐步下降的趨勢。至雛鴨20日齡時(shí)，僅檢測到1只鴨坦布蘇病毒抗體陽性，陽性率僅8.33%，鴨群整體的PI值也降到了10%以下(圖1)，因此免疫時(shí)間定在雛鴨20日齡之后。

圖1 雛鴨坦布蘇病毒母源抗體變化趨勢注：PI≥18.4判定為抗體陽性

2.2 溶液pH及ELD50經(jīng)過檢測，加頭孢噻呋鈉的2個(gè)疫苗溶液(A、B)均偏酸性，其pH在4.8左右，未加入頭孢噻呋鈉的疫苗溶液(C、D)pH接近中性，與生理鹽水酸度相近。2種疫苗加入頭孢噻呋鈉后其ELD50均有不同程度的降低，疫苗效價(jià)損失接近1倍(表3)。

表3 溶液pH及ELD50檢測結(jié)果

2.3 抗體檢測 如圖2所示，免疫后3 d四個(gè)組的抗體陽性率均為0，但疫苗2的平均PI值較疫苗1要稍高，說明其產(chǎn)生免疫應(yīng)答更快。免疫后7 d，添加頭孢噻呋鈉組與未添加頭孢噻呋鈉組的差異開始出現(xiàn)，疫苗1未添加頭孢噻呋鈉組(A組)的抗體陽性率已達(dá)66.67%，而添加過頭孢噻呋鈉的C組仍然為0，平均PI值顯示A組更高；疫苗2未添加頭孢噻呋鈉組(B組)的抗體陽性率達(dá)到100%，采樣的雛鴨抗體全部轉(zhuǎn)陽，而添加過頭孢噻呋鈉的D組僅有50%；免疫后14、21 d各組抗體陽性率變化不大，平均PI值仍呈上升趨勢，但添加頭孢噻呋鈉的組各項(xiàng)指標(biāo)一直低于未添加組，在觀測期內(nèi)未達(dá)到或超過未添加組。

3 討論

通過本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，2個(gè)不同廠家生產(chǎn)的鴨坦布蘇病毒活疫苗在添加頭孢噻呋鈉進(jìn)行免疫時(shí)，其疫苗溶液均偏酸性、效價(jià)降低，免疫后抗體滴度明顯低于不添加頭孢噻呋鈉免疫組的水平。

圖2 各試驗(yàn)組抗體陽性率及平均PI值變化趨勢A:A組與C組免疫后抗體陽性率變化； B:B組與D組免疫后抗體陽性率變化；C:A組與C組免疫后平均PI值變化； D:B組與D組免疫后平均PI值變化

鴨坦布蘇病毒對酸較敏感，在pH 3～5的條件下不穩(wěn)定。刁有祥等[3]用0.1 mol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)病毒尿囊液的pH為2.0、3.0、4.0、5.0，對照組加入等同于酸量的滅菌生理鹽水，置4 ℃作用12 h后，調(diào)pH至8.0左右，分別測定ELD50。發(fā)現(xiàn)pH降至5以下時(shí)接種的鴨胚均不死亡，而對照組ELD50為10-3.17/0.2 mL。馬秀麗等[4]也對分離到的鴨坦布蘇病毒BZ株進(jìn)行了耐酸性試驗(yàn)，pH=5.0條件下病毒滴度由105.6TCID50/0.2 mL下降至103.41TCID50/0.2 mL，pH越低，病毒滴度下降越明顯。本試驗(yàn)按照臨床使用量向疫苗溶液中加入頭孢噻呋鈉后，疫苗溶液的pH降至5以下，其疫苗效價(jià)損失約1倍，免疫后其抗體滴度也不理想，初步證實(shí)免疫坦布蘇病毒活疫苗時(shí)，不應(yīng)添加頭孢噻呋鈉及其他可使溶液酸化的藥物。

根據(jù)對機(jī)體免疫功能的影響可將抗生素分為促進(jìn)機(jī)體免疫功能抗生素、與機(jī)體免疫協(xié)同作用抗生素、可能抑制機(jī)體免疫功能抗生素、不影響機(jī)體免疫功能抗生素等四大類?，F(xiàn)有研究結(jié)果證實(shí)，大多數(shù)β內(nèi)酰胺類抗生素、多黏素類等均屬于不影響機(jī)體防御功能的抗生素[5]。頭孢噻呋鈉屬于β內(nèi)酰胺類抗生素，其不會(huì)影響機(jī)體的免疫功能，但由于其溶解后可導(dǎo)致溶液酸化，造成疫苗效價(jià)降低，因此在與活疫苗聯(lián)用時(shí)應(yīng)慎重。

畜禽免疫接種是預(yù)防和控制畜禽傳染病的一種有效手段，然而因免疫效果不理想，仍不能有效預(yù)防疫病的暴發(fā)和流行，不但影響當(dāng)?shù)匦竽翗I(yè)健康發(fā)展，也給養(yǎng)殖場戶造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。只有認(rèn)真做好動(dòng)物免疫，選擇正確的免疫方法，確保免疫效果，才能起到有效預(yù)防疫病的作用[6]。