趙先亮 劉茜英 許俊博 張 娜▲

1.華潤雙鶴利民藥業(yè)（濟(jì)南）有限公司質(zhì)量技術(shù)部，山東濟(jì)南 250200；2.華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品發(fā)展中心，北京 100102

硝苯地平臨床適用于預(yù)防和治療冠心病心絞痛、高血壓，對頑固性、重度高血壓也有較好治療效果[1-7]。硝苯地平緩釋片由德國拜耳首次研發(fā)應(yīng)用于臨床，相對于普通片，緩釋片可使患者的血藥濃度保持穩(wěn)定，同時(shí)減少了服藥頻率，增加順應(yīng)性[8]；相對于控釋片，緩釋片的性價(jià)比更高[9]。但由于硝苯地平原料的難溶性、高滲透性和光不穩(wěn)定性[10]，造成該產(chǎn)品生產(chǎn)過程質(zhì)量不穩(wěn)定的因素較多，體外溶出曲線的研究可以為口服固體制劑在體內(nèi)作用的一致性提供評價(jià)依據(jù)，并可為產(chǎn)品處方工藝的改進(jìn)提高提供支持和幫助[11-12]。使該產(chǎn)品與德國拜耳原研制劑Adalat-L 具有一致的溶出行為是保證其質(zhì)量與療效一致性的關(guān)鍵，如何參照原研制劑處方工藝，進(jìn)行篩選優(yōu)化，生產(chǎn)過程中如何控制影響其釋放度的因素，從而保證質(zhì)量及療效與原研制劑一致，是仿制藥企業(yè)面對的難題。目前，國內(nèi)仿制藥體內(nèi)外的等效性不盡如人意[13-14]。本研究通過對硝苯地平緩釋片（Ⅱ）處方工藝中影響制劑釋放度的各種因素進(jìn)行考察，得出了用于指導(dǎo)生產(chǎn)的關(guān)鍵參數(shù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GZP-55 高速旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)（上海天和制藥機(jī)械有限公司）；BGB-150D 高效包衣機(jī)（浙江小倫制藥機(jī)械有限公司）；安捷倫1100 型高效液相色譜儀，包括G1322A 型真空脫氣機(jī)、G1312A 兩元泵、G1329A 型自動進(jìn)樣器、G1316A 型柱溫箱和G1315B 型紫外檢測器（安捷倫科技有限公司）；ZRS-8G 智能溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；FADT-1206 自動取樣溶出系統(tǒng)（上海富科思分析儀器有限公司）；XS105DU型電子天平（瑞士Mettler 公司）；KQ-600DV 型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試藥

乙腈（色譜純，美國天地）；甲醇（色譜純，美國天地）；吐溫-80（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；磷酸（分析純，萊陽康德化工有限公司）；異丙醇（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；原研制劑Adalat-L（規(guī)格：20 mg，批號：JPS0089，日本BAYER）；硝苯地平對照品（純度為99.8%，批號：100338-201605，中國藥品生物制品檢定所）；硝苯地平雜質(zhì)Ⅰ對照品（純度為100%，批號：100339-201604，中國藥品生物制品檢定所）；硝苯地平雜質(zhì)Ⅱ?qū)φ掌罚兌葹?00%，批號：100340-201604，中國藥品生物制品檢定所）；硝苯地平原料（批號：02-20180304，上海玉瑞生物科技有限公司）；玉米淀粉（山東聊城阿華制藥股份有限公司）；硬脂酸鎂（山東聊城阿華制藥股份有限公司）；乳糖（江蘇道寧藥業(yè)有限公司）；微晶纖維素（江西益普生藥業(yè)有限公司）；薄膜包衣預(yù)混劑（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 硝苯地平緩釋片（Ⅱ）的制備

參照硝苯地平緩釋片原研專利處方工藝[15]，處方中原輔料經(jīng)預(yù)處理、混合后，濕法制粒、壓片，然后進(jìn)行包衣。

2.2 溶出曲線的繪制

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（4.6×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.01 mol/L 磷酸氫二鈉溶液（11∶9，磷酸調(diào)節(jié)pH 值至6.1）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：230 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：50 μL。理論塔板數(shù)按硝苯地平峰計(jì)算不低于4000。

2.2.2 釋放度測定 查閱相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)報(bào)道的該類品種釋放度測定方法不少，使用的釋放介質(zhì)有0.1 mol/L氯化氫溶液[16]、磷酸鹽緩沖溶液[17]、蒸餾水[18]、0.5%十二烷基硫酸鈉（SDS）水溶液[19]、0.25% SDS 水溶液[20]、0.4%吐溫-80 磷酸鹽緩沖液[21]、0.5%吐溫-80 氯化鈣溶液[22]等。本研究采用日本橙皮書[23]中硝苯地平緩釋片的釋放度測定方法（同原研制劑一致），以0.3%吐溫80 水溶液900 mL 為溶出介質(zhì)。測定全程避光，取樣品6 片，照溶出度與釋放度測定法（《中華人民共和國藥典》[24]2015 年版四部通則0931 第二法） 漿法，將片劑同時(shí)放入溶出杯內(nèi)，轉(zhuǎn)速為75 r/min，溫度37℃，依法操作，分別于0.5、1、2、4、8、12 h 取溶液10 mL，濾過，棄去初濾液5 mL，并即時(shí)補(bǔ)充相同溫度、相同體積的溶出介質(zhì)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取硝苯地平對照品約15 mg，精密稱定，置10 mL 量瓶中，加甲醇適量超聲使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋制成每1 mL約含硝苯地平20 μg 的溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（《中華人民共和國藥典》[25]2015 版三部通則0512），精密量取供試品溶液和對照品溶液各50 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算每片溶出量，并計(jì)算相應(yīng)時(shí)間的藥物累積釋放度。

以取樣時(shí)間為橫坐標(biāo)、以累計(jì)溶出量為縱坐標(biāo)繪制溶出曲線，并采用相似性f2因子法評價(jià)不同供試品與參比制劑溶出曲線的相似性，如果f2≥50，則表示兩種制劑在所評價(jià)的時(shí)間內(nèi)溶出度相似[26]。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

按照《中華人民共和國藥典》[24]2015 年版“藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”對該方法進(jìn)行了全面的驗(yàn)證，驗(yàn)證項(xiàng)目及結(jié)果見表1，結(jié)果顯示分析方法準(zhǔn)確可靠。

2.4 影響因素考察

硝苯地平緩釋片釋藥機(jī)制是利用硝苯地平幾乎不溶于水的特點(diǎn)，對硝苯地平原料進(jìn)行微粉化處理，使其粒徑成微細(xì)分布，在介質(zhì)中緩慢逐步溶解，達(dá)到緩釋的結(jié)果[13]。原研制劑專利處方選用的輔料包括乳糖、微晶纖維素、淀粉、吐溫-80 及硬脂酸鎂等，均為口服固體制劑常用輔料。基于硝苯地平緩釋片制劑釋放機(jī)制分析，影響藥物釋放行為的主要因素有原料粒徑、填充劑、黏合劑、表面活性劑、包衣層用量等處方及其工藝參數(shù)。

2.4.1 原料粒徑 硝苯地平緩釋片原研專利[15]中，限定了硝苯地平的比表面積范圍（0.5～6 m2/g），提示硝苯地平的粒徑D90會影響藥物的釋放曲線。因此，需考察不同粒徑硝苯地平原料對緩釋片釋放度的影響。本研究使用三種不同粒徑原料：原料1（D90：65 μm）、原料2（D90：35 μm）、原料3（D90：5 μm）分別制備硝苯地平緩釋片。體外釋放度測定結(jié)果見表2 及圖1A。結(jié)果顯示，原料粒度越小，體外釋放速度越快，與緩釋機(jī)制相吻合。當(dāng)硝苯地平原料粒徑D90達(dá)到35 μm 時(shí)，制劑體外釋放曲線與原研制劑一致。

2.4.2 填充劑 原研制劑Adalat-L 采用了乳糖和微晶纖維素兩種填充劑，乳糖為水溶性填充劑，微晶纖維素不溶于水兼具有崩解劑的作用，這兩種輔料用量比可能對硝苯地平緩釋片（Ⅱ）的體外釋放有影響。因此，對兩種輔料的用量進(jìn)行了研究，乳糖∶微晶纖維素用量分別為1∶2、1∶1 和2∶1。體外釋放度測定結(jié)果見表2及圖1B。結(jié)果顯示，乳糖的比例增加對硝苯地平釋放有一定的促進(jìn)作用，這可能與親水性輔料乳糖在一定程度上減小了疏水性藥物的接觸角，改善了硝苯地平的潤濕性有關(guān)。當(dāng)乳糖用量與微晶纖維素用量比例相等或低于微晶纖維素比例用量時(shí)，制劑體外釋放曲線與原研制劑一致。

2.4.3 黏合劑 硝苯地平緩釋片（Ⅱ）依靠原料在水中難溶特性實(shí)現(xiàn)緩釋，加入黏合劑后制得顆粒硬度及崩解性能對該品的釋放有較大影響。因此，考察不同濃度的淀粉漿對其釋放度和穩(wěn)定性的影響，淀粉漿濃度分別為8%、10%、15%。體外釋放度測定結(jié)果見表2及圖1C。結(jié)果顯示，黏合劑濃度增加，制劑釋放速率減慢，黏合劑的濃度是影響制劑釋放速率的關(guān)鍵因素之一。

2.4.4 表面活性劑 吐溫80 作為一種表面活性劑，可以增加難溶性原料藥的釋放速率。因此，考察不同吐溫80 加入量對緩釋制劑釋放速率和穩(wěn)定性的影響，吐溫80 的用量分別為0.5%、1%、1.5%時(shí)，制劑釋放度測定結(jié)果見表2 及圖1D。結(jié)果顯示，吐溫80 的用量在0.5%～1.5%范圍內(nèi)，對制劑釋放速率相近。這可能與表面活性劑加入量少，在固體制劑中僅起到增加藥物潤濕性的作用，而不是增溶的作用有關(guān)。

2.4.5 包衣層 硝苯地平是高光敏感藥物，遇光易發(fā)生化學(xué)歧化作用，降解為雜質(zhì)Ⅰ及雜質(zhì)Ⅱ[27-28]，所以具有遮光作用的薄膜衣將對該產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性具有較大影響。薄膜包衣不僅避免了制劑有關(guān)物質(zhì)的增加，也會影響藥物的釋放，因此，考察不同包衣增重對其釋放速率的影響。包衣增重分別為1%、3%、5%。體外釋放度測定結(jié)果見表2 及圖1E。結(jié)果顯示，一定范圍內(nèi)的包衣厚度對本品體外釋放度相近。

表2 各影響因素對硝苯地平緩釋片（Ⅱ）釋放度的影響

3 討論

目前我國硝苯地平緩釋制劑多為骨架型緩釋片，采用親水硅膠材料如羥丙甲纖維素及羥丙纖維素等為骨架材料，存在緩釋骨架溶散過快或崩塌導(dǎo)致突釋現(xiàn)象弊端[13]，而且該基質(zhì)緩釋系統(tǒng)釋藥速度與外部環(huán)境變量有較大關(guān)系，易受如pH、溶出介質(zhì)及攪拌速率的影響[29]，很難做到與原研制劑釋放行為完全一致[11-12，30]。本研究參照原研制劑處方工藝，研究制劑的緩釋作用機(jī)制與原研制劑相同，避免了大量高分子骨架輔料導(dǎo)致的人體代謝負(fù)擔(dān)，通過研究最終確定控制硝苯地平緩釋片（Ⅱ）釋放度的關(guān)鍵處方工藝參數(shù)包括原料粒徑D90：10～40 μm，乳糖與微晶纖維素用量比例相等，淀粉漿濃度為10%，吐溫80 的用量為0.5%，包衣增重為3%。

圖1 各種影響因素下溶出曲線（n=6）

研究過程中發(fā)現(xiàn)原輔料的質(zhì)量波動是影響該產(chǎn)品批量生產(chǎn)質(zhì)量穩(wěn)定性的重要因素。原料D90限度制定應(yīng)基于原料粒徑的正態(tài)分布，這對原料的粉碎及混合提出了更加嚴(yán)苛的要求，應(yīng)對原料制定粒度內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，保證不同批次硝苯地平原料粒徑分布的一致性是保障制劑釋放行為一致性的關(guān)鍵；國產(chǎn)玉米淀粉、乳糖及微晶纖維素批間差異較大，未從分子聚集狀態(tài)、粒徑等方面進(jìn)行細(xì)化分型，特定型號的輔料使用是保障所生產(chǎn)制劑質(zhì)量穩(wěn)定的關(guān)鍵因素，需要生產(chǎn)企業(yè)密切關(guān)注原輔料生產(chǎn)企業(yè)的處方工藝穩(wěn)定性，并研究制訂適當(dāng)?shù)娜霃S內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)防控質(zhì)量波動。

因硝苯地平具有光敏性，為保證產(chǎn)品的質(zhì)量，生產(chǎn)和儲存過程中應(yīng)采用適當(dāng)?shù)谋芄獯胧?，產(chǎn)品增加了薄膜包衣在一定程度上降低了其見光降解速度，為進(jìn)一步保證產(chǎn)品穩(wěn)定性，應(yīng)采用避光的上市包裝。