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        菌種活化操作方法

        2021-01-21 05:46:32孫葳
        食品安全導(dǎo)刊 2020年35期

        菌種是我國重要的生物資源,保藏適當(dāng)?shù)木N需要正確的活化方法來獲得純培養(yǎng)物,本文結(jié)合多年從事食品微生物檢驗的工作經(jīng)歷,簡要介紹常規(guī)的菌種活化操作方法。

        菌種活化就是將保藏狀態(tài)的微生物菌種放入適合其生長繁殖的的培養(yǎng)物中進(jìn)行培養(yǎng),通過逐級擴(kuò)大培養(yǎng)進(jìn)而獲得活力旺盛、數(shù)量足夠的純培養(yǎng)物。通常我們工作中使用的工作菌種需經(jīng)過要2-3代的復(fù)壯過程,因為菌種的保存條件以及培養(yǎng)條件不盡相同,所以需要活化讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境[1]。

        一般菌種臨時存放及活化方法

        采用低溫保存管保存菌種,應(yīng)存放于-20℃ ~ -80℃的低溫條件下。準(zhǔn)備36±1℃的70-75%酒精浴槽(若以水浴取代,應(yīng)確保所用水中微生物污染得到控制),事先應(yīng)在浴槽放置小試管架或保存管架等,液面要低于管塞或管蓋。將低溫保存管從低溫保存條件中取出,置于36±1℃的浴槽內(nèi)的管架上。不斷輕微搖動低溫保存管,液面不可高至管塞,直至冰完全溶解(大概需要2min左右)。

        無菌培養(yǎng)操作方法

        用無菌微量吸管,從已溶解的低溫保存管中吸取1-2 滴菌液,滴入指定的固態(tài)培養(yǎng)基一邊緣附近,以劃線或涂布法接種于培養(yǎng)基。也可用滅菌金屬環(huán)蘸取菌液后,以劃線或涂布法接種于培養(yǎng)基。

        待菌液吸收完全后,將接種好的培養(yǎng)基倒置放于指定溫度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

        平板劃線分離操作方法

        平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線稀釋,經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落,通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。有時這種單菌落并非都由單個細(xì)胞繁殖而來的,所以要反復(fù)分離多次才可得到純菌種。

        手持金屬接種環(huán),將接種環(huán)(共約5 公分)置于酒精燈外焰燒至火紅,并不斷來回?zé)窘饘俟潭U之前約10 公分,等待幾秒鐘后,將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊緣凝膠,待接種環(huán)徹底冷卻后,沾黏菌滴,由培養(yǎng)基邊緣向中央輕輕橫劃,直到涵蓋1/3培養(yǎng)基為止。

        灼燒接種環(huán),冷卻后,旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自1 區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到未接種的區(qū)域。

        重復(fù)2的動作完成。

        灼燒接種環(huán),將接種環(huán)歸位。

        一般操作過程

        以無菌操作,用無菌微量吸管,從已溶解的管中吸取50μL(或1-2 滴)的菌液,滴入固態(tài)指定培養(yǎng)基某一邊緣附近,以劃線法接種于培養(yǎng)基。

        將接種好的培養(yǎng)基置于指定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

        對于常規(guī)細(xì)菌應(yīng)用無菌吸管,吸取0.3-0.5mL 指定的液體培養(yǎng)基,滴入內(nèi)管中,并輕微震蕩(也可用該吸管反復(fù)吹打協(xié)助),直至均勻懸浮。

        對于霉菌、酵母菌應(yīng)用無菌吸管,吸取0.3-0.5mL 無菌水,滴入內(nèi)管中,待干燥粉末溶解后,以無菌吸管吸取并滴入約含有5mL無菌水的小試管內(nèi),輕微震蕩均勻后,靜置30-60min。

        取0.1-0.2mL 菌體懸浮液滴于平板培養(yǎng)基上,劃線分離培養(yǎng)或做成一系列的稀釋,用無菌L 棒均勻涂布,檢驗菌種的純度及活化情況,剩余的菌液則全部移入相應(yīng)的液體培養(yǎng)基內(nèi),按指定的溫度進(jìn)行培養(yǎng)。

        某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,遲滯期可能較長,必須培養(yǎng)二倍時間后才可長出,且再經(jīng)過一、二次繼代培養(yǎng)后才能正常生長。若經(jīng)以上方法處理后仍培養(yǎng)失敗,則視為不能活化。

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