王虹虹，徐興勝，徐雅雯，黃浩，宋昱慶，李明飛，李德龍,2*

（1.西南大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，重慶榮昌402460；2.西南大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院免疫學(xué)研究中心）

鴨傳染性漿膜炎是由鴨疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer，R.anatipestifer）引起的、嚴重危害養(yǎng)鴨業(yè)的傳染性疾病之一[1]。鴨傳染性漿膜炎的臨床癥狀與菌株的毒力、感染途徑、雛鴨自身的抵抗力等因素密切相關(guān)。該病潛伏期1～3d，根據(jù)病程的長短分為最急性、急性、亞急性和慢性。最急性病例通常見于鴨群發(fā)病的早期階段，一般觀察不到明顯的異常癥狀，突然發(fā)生死亡。急性病例通常見于2～4周齡雛鴨，臨床癥狀表現(xiàn)為精神萎靡、縮頸、嗜睡、不愿運動或共濟失調(diào)、采食下降但飲水增加、離群獨居等癥狀。隨病程增加，病鴨出現(xiàn)轉(zhuǎn)圈、倒退、消瘦，有的出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癱瘓。亞急性和慢性病例主要見于4～7周齡雛鴨，病程在7d以上，臨床癥狀表現(xiàn)為精神沉郁、雙腿無力、不愿走動、食欲不佳、飲水量增加，個別會出現(xiàn)頭頸歪斜、轉(zhuǎn)圈或倒退等神經(jīng)癥狀，少數(shù)會出現(xiàn)呼吸困難，張口呼吸的現(xiàn)象，一般死亡率較低，但是會導(dǎo)致病鴨生長發(fā)育不良和停止生長，嚴重的會導(dǎo)致病鴨衰竭而亡[2～7]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料采集。2019年9月西南大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院動物醫(yī)院收到重慶市榮昌區(qū)某肉鴨養(yǎng)殖戶病鴨2只，取送檢病鴨的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及腦等組織，置于10%福爾馬林溶液中固定。

1.1.2 主要試劑。10%中性福爾馬林溶液、無水乙醇、二甲苯、蘇木精染液、伊紅染液、中性樹膠等。

1.2 方法

1.2.1 尸體剖檢。按常規(guī)方法進行剖檢，打開胸腔、腹腔，暴露內(nèi)腔器官，觀察各臟器病理變化，并剪取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦等組織中部分眼觀病變明顯的部位置于10%中性福爾馬林溶液中固定24 h。

1.2.2 病理組織學(xué)檢查。各組織固定后按常規(guī)方法制作石蠟切片，主要步驟有：取材-固定-脫水-透明-浸蠟-包埋-切片-HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化。

1.2.3 細菌16S rRNA基因鑒定。將R.anatipestifer進行分離后，無菌吸取2 mL分離菌，應(yīng)用試劑盒提取細菌總DNA。細菌16S rRNA基因通用引物F：5’-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3’；R：5’-TACGG TTACCTTGTTACGACTT-3’，引物由武漢金開瑞生物工程有限公司合成[8]，PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸45 s，共30個循環(huán)；72℃終延伸10 min。將PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳并使用膠回收試劑盒回收目的基因，送至武漢金開瑞生物工程有限公司測序，將測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫中參考菌株16S rRNA進行BLAST同源性比對。

2 診斷結(jié)果

2.1 臨床癥狀

病鴨站立不穩(wěn)，走路搖晃，顫抖，叫聲低沉不響亮。

2.2 剖檢變化

心臟：心外膜有黃白色纖維素性偽膜，不易剝離，形似盔甲（圖1A）；肝臟：體積腫大，顏色暗紅，表面有一層黃白色纖維素性偽膜，易剝離（圖1B）；氣囊：氣囊渾濁，有炒雞蛋樣黃白色物質(zhì)；脾臟：黃白色，表面有數(shù)個暗紅色瘀斑（圖1C）；肺臟：顏色暗紅，放入水中呈懸浮狀態(tài)（圖1D）；腎臟：顏色土黃色，體積腫大，腎表面間質(zhì)明顯（圖1E）；小腸：腸壁菲薄，管腔內(nèi)有黃色水樣稀便，胰腺腫大，顏色輕微黃白色（圖1F）；腦：腦膜充血。

圖1 各組織剖檢病變圖

2.3 病理組織學(xué)變化

2.3.1 心臟。心臟表面覆蓋有一層混有炎性細胞的纖維素性滲出物，炎性細胞主要是巨噬細胞和中性粒細胞，心肌纖維發(fā)生變性，部分出現(xiàn)壞死（圖2）。

圖2 心臟組織病理學(xué)檢查

2.3.2 肝臟。肝臟表面覆蓋有一層混有炎性細胞的纖維素性滲出物，炎性細胞主要是巨噬細胞和中性粒細胞，肝細胞發(fā)生脂肪變性（圖3）。

圖3 肝臟組織病理學(xué)檢查

2.3.3 脾臟。脾小結(jié)結(jié)構(gòu)松散，淋巴細胞減少，小結(jié)內(nèi)有多量紅細胞（圖4）。

圖4 脾臟組織病理學(xué)檢查

2.3.4 肺臟。肺毛細血管有大量紅細胞，部分區(qū)域有大量心力衰竭細胞（圖5）。

圖5 肺臟組織病理學(xué)檢查

2.3.5 腎臟。腎小管上皮細胞發(fā)生變性，間質(zhì)有大量紅細胞（圖6）。

圖6 腎臟組織病理學(xué)檢查

2.3.6 腦。腦血管內(nèi)有大量紅細胞及炎性細胞（圖7）。

圖7 腦組織病理學(xué)檢查

2.4 細菌16S rRNA基因擴增及序列分析

提取分離菌株總DNA為模板，使用細菌16S rRNA通用引物對目的基因進行PCR擴增，成功擴增出一條1 450 bp條帶，與預(yù)期條帶大小一致。將目的條帶送測序，與NCBI數(shù)據(jù)庫收錄的參考菌株16S rRNA基因序列進行同源性比對，結(jié)果顯示，分離菌株與R.anatipestifer參考菌株相應(yīng)序列的同源性最高。

3 討論

鴨傳染性漿膜炎主要是由于雛鴨抵抗力下降，鴨舍環(huán)境較差，管理人員管理不當?shù)仍蛟斐?。目前，鴨傳染性漿膜炎防治措施主要以疫苗及藥物預(yù)防為主，養(yǎng)殖場可采取以下幾點措施進行防治工作：加強飼養(yǎng)管理，為鴨群提供營養(yǎng)均衡的飼料進行喂養(yǎng)，杜絕飼喂發(fā)霉飼料、劣質(zhì)飼料；注重舍內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境，制定消毒計劃，保持欄舍清潔干燥，通風(fēng)情況良好，舍內(nèi)糞便及時清理，對養(yǎng)殖場所進行定期消毒，減少疾病傳播的可能；增強鴨群免疫力，減少意外驚嚇、天氣突然變化等因素帶來的應(yīng)激反應(yīng)，提高機體抵抗力，注意夏季通風(fēng)及冬季保暖，防止天氣突然變化造成鴨群抵抗力下降，發(fā)生疾病[9]。