呂慧源，李 漠，王志明，梁 偉，聶 偉，咼于明*

（1.北京生泰爾科技股份有限公司，北京 102206；2.北京市中獸藥工程技術(shù)研究中心，北京 102206；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

隨著我國(guó)畜禽養(yǎng)殖規(guī)?；约帮暳瞎I(yè)的發(fā)展，大量合成類藥物和飼料添加劑（如抗生素、激素、驅(qū)蟲(chóng)藥、合成類促生長(zhǎng)素、誘食劑等）得到廣泛應(yīng)用，然而有些物質(zhì)經(jīng)過(guò)生物富集現(xiàn)象會(huì)直接危害人類健康和污染環(huán)境。近年來(lái)，中國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部出臺(tái)了一系列管理政策來(lái)控制抗生素及化學(xué)合成類添加劑的使用，自2020 年1 月1 日起，退出除中藥外的所有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑品種。中草藥具有提高畜禽生產(chǎn)性能、增強(qiáng)畜禽免疫力、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)等功能性以及綠色、安全等特點(diǎn)，因此具有日益廣闊的應(yīng)用前景。

山銀花和黃芩提取物是將二者按照一定比例組合而成，主要活性單體為綠原酸和黃芩苷。綠原酸和黃芩苷具有抑菌、抗炎、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等功能[1-5]。周志娥等[6]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸的抗菌作用主要是其對(duì)菌體細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的破壞，從而使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)滲出，使細(xì)菌死亡；黃濤等[7]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸可使肉雞血清的IgG 含量提高，也可提高飼料轉(zhuǎn)化效率。因此，綠原酸、黃芩苷在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)具有較好的生物活性，并最終改善動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)旨在研究飼料中添加不同劑量的山銀花和黃芩提取物對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)和抗氧化機(jī)能方面的影響，以篩選出合適的添加量，從而科學(xué)指導(dǎo)生產(chǎn)應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 山銀花和黃芩提取物（以下簡(jiǎn)稱“植物提取物”）由北京生泰爾科技股份有限公司提供，其主要成分為綠原酸和黃芩苷。植物提取物生產(chǎn)工藝：將山銀花用純化水提取3 次，濾液經(jīng)負(fù)壓濃縮、噴粉，制得山銀花提取物；將黃芩用純化水提取3 次，經(jīng)負(fù)壓濃縮、酸沉、帶干，制得黃芩提取物。根據(jù)含量將山銀花提取物、黃芩提取物按一定比例混合，并加入葡萄糖（載體）混合均勻，即得山銀花和黃芩提取物（粒徑為100 目），其中綠原酸含量2.2 mg/g，黃芩苷含量22 mg/g。

1.2 試驗(yàn)方法 選取1 日齡愛(ài)拔益加（AA）肉仔雞320只，隨機(jī)分成4 個(gè)組，每組8 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞，試驗(yàn)期42 d。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中分別添加125、250、500 mg/kg 植物提取物。基礎(chǔ)日糧參照美國(guó)NRC（1994）營(yíng)養(yǎng)需要配制，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分表1。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)涿州試驗(yàn)基地開(kāi)展。試驗(yàn)開(kāi)始前對(duì)雞舍徹底清洗、消毒。按照每籠（200 cm×50 cm×35 cm）10 只進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)，試驗(yàn)飼料冷壓制粒。雞新城疫、傳染性支氣管炎（二聯(lián)活疫苗）免疫在試驗(yàn)第7 天通過(guò)滴鼻點(diǎn)眼進(jìn)行，新城疫疫苗免疫在試驗(yàn)第21 天通過(guò)飲水進(jìn)行。1～3、4～7、8～14、15～21 日齡溫度分別控制在35、33、30、25℃。1～2、3、4、5、6～36、37、38、39～42 日齡光照時(shí)間分別控制在24、23、22、21、20、21、22、23 h。每天對(duì)雞舍通風(fēng)。

1.4 樣品采集與分析

1.4.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 試驗(yàn)肉雞分別在試驗(yàn)第1、21、42 天稱重，并計(jì)算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和耗料增重比（F/G）。

1.4.2 免疫器官指數(shù)的測(cè)定 試驗(yàn)第21 天和第42 天，每重復(fù)按平均體重選取1 只雞頸動(dòng)脈放血屠宰，分離試驗(yàn)雞法氏囊、胸腺、脾臟，并稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重量（g）/活體重（g）×1000

1.4.3 血清抗氧化指標(biāo) 21 和42 日齡，每個(gè)重復(fù)內(nèi)選取1 只肉雞，翅靜脈采血，室溫靜置4 h，3 000 r/min離心制備血清。比色法測(cè)定谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性和總抗氧化力（T-AOC），羥胺法測(cè)定總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性，TBA 法測(cè)定丙二醛（MDA）含量，鉬酸銨顯色法測(cè)定過(guò)氧化氫酶（CAT）含量，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，Ducan's 對(duì)各重復(fù)指標(biāo)進(jìn)行多重比較，并進(jìn)行線性和二次曲線回歸分析，0.05＜P＜0.1 表示回歸關(guān)系趨于顯著，P＜0.05 表示回歸關(guān)系顯著。

2 結(jié)果

2.1 植物提取物對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，1～21 日齡，各植物提取物組21 d 體重、ADG、ADFI、F/G 與對(duì)照組無(wú)顯著性差異；各植物提取物組F/G 與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

21～42 日 齡，250、500 mg/kg 植物提 取物組 的ADG 較對(duì)照組分別提高7.01%、7.84%（P＜0.05），且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）；各試驗(yàn)組42 d 體重、21～42 d 的ADFI、F/G 與對(duì)照組均無(wú)顯著差異，但各試驗(yàn)組的F/G 均低于對(duì)照組，且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

1～42 日 齡，250、500 mg/kg 植物提 取物組 的ADG 較對(duì)照組分別提高5.02%、5.88%（P＜0.05），且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）。各植物提取物組的F/G 均顯著低于對(duì)照組，且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

2.2 植物提取物對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 由表3 可知，21 日齡，各植物提取物組的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)均較對(duì)照組略有提高（P＞0.05），其中500 mg/kg植物提取物組最高。

42 日齡，250、500 mg/kg 植物提取物組的胸腺指數(shù)顯著高于對(duì)照組，且呈線性相關(guān)（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P=0.010）。各植物提取物組的法氏囊指數(shù)均顯著高于對(duì)照組，且呈線性關(guān)系（P＜0.01）或二次相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）。各植物提取物組脾臟指數(shù)均高于對(duì)照組（P＞0.05），呈線性相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

2.3 植物提取物對(duì)肉仔雞血清抗氧化能力的影響 由表4 可知，在21 日齡，500 mg/kg 植物提取物組的CAT 活性顯著高于對(duì)照組，125、250 mg/kg 植物提取物組與對(duì)照組差異不顯著，CAT 活性隨植物提取物劑量呈線性增加（P＜0.01）或二次曲線增加（P＜0.05）。500 mg/kg植物提取物組MDA 含量顯著低于對(duì)照組，MDA 含量隨植物提取物劑量呈線性降低（P＜0.01）或二次曲線降低（P＜0.01）。各植物提取物組T-AOC、T-SOD、GSH-Px 均高于對(duì)照組（P＞0.05），其中500 mg/kg 植物提取物組各指標(biāo)含量均最高。

在42 日齡，500 mg/kg 植物提取物組的CAT、GSH-Px 含量均顯著高于對(duì)照組，與125、250 mg/kg植物提取物組差異不顯著，CAT、GSH-Px 活性隨植物提取物劑量呈線性增加（P＜0.01）或二次曲線增加（P＜0.05）。500 mg/kg 植物提取物組MDA 含量顯著低于對(duì)照組，125、250 mg/kg 植物提取物組較對(duì)照組均有降低（P＞0.05），MDA 含量隨植物提取物劑量呈線性降低（P＜0.01）或二次曲線降低（P=0.01）。各植物提取物組的T-AOC、T-SOD 均高于對(duì)照組（P＞0.05），其中500 mg/kg 植物提取物組最高。

3 討 論

3.1 飼糧中添加植物提取物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 植物提取物中的有機(jī)酸和黃酮類物質(zhì)均有調(diào)節(jié)腸道菌群、抗氧化、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收等功能。綠原酸是一種多酚類化合物，能提供活潑性很強(qiáng)的氫離子與自由基反應(yīng)，以消除羥基自由基和超氧陰離子等活性，抵抗氧化損傷。綠原酸及黃芩苷可以促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體相應(yīng)抗氧化酶的生物活性，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，從而在一定程度上緩解畜禽應(yīng)激反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)[8]。本研究中，在試驗(yàn)21～42 日齡及全期，250 mg/kg 和500 mg/kg 植物提取物組的ADG 均顯著高于對(duì)照組，F(xiàn)/G 均低于對(duì)照組，與在肉雞[9]、小鼠[10]飼糧中添加黃芩黃酮、綠原酸的結(jié)果一致。這可能是由于黃芩黃酮、綠原酸能夠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，促進(jìn)胃腸道蠕動(dòng)，提高飼料轉(zhuǎn)化率，進(jìn)而提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能。

表2 植物提取物對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

表3 植物提取物對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 ‰

表4 植物提取物對(duì)肉雞血清抗氧化性能的影響

3.2 飼糧中添加植物提取物對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響機(jī)體免疫機(jī)能與其免疫器官發(fā)育密切相關(guān)，胸腺、法氏囊和脾臟的發(fā)育程度對(duì)機(jī)體的免疫功能產(chǎn)生直接影響[11-12]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在肉雞生長(zhǎng)前期各試驗(yàn)組的免疫器官指數(shù)均比對(duì)照組有一定程度提高，在試驗(yàn)后期，250 mg/kg組和500 mg/kg 組的胸腺及法氏囊指數(shù)均有顯著提高，綜合各階段，飼糧中添加不同水平植物提取物后各項(xiàng)免疫器官指數(shù)均較高，這與在小鼠[13]、雞[14-15]上的研究結(jié)果一致?？赡苁且?yàn)榫G原酸、黃芩苷具有抗炎抑菌作用，有利于機(jī)體抵御病原微生物的侵害，使機(jī)體的免疫能力增強(qiáng)。

3.3 飼糧中添加植物提取物對(duì)肉雞血清抗氧化機(jī)能的影響 機(jī)體不正常的代謝會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基，過(guò)量的自由基會(huì)對(duì)動(dòng)物造成氧化應(yīng)激，機(jī)體不僅會(huì)產(chǎn)生各種代謝疾病，還會(huì)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，使細(xì)胞中的脂質(zhì)受到損傷，導(dǎo)致細(xì)胞的功能和完整性受損，若不能及時(shí)修復(fù)，則會(huì)誘發(fā)疾病或引起死亡，最終使得畜禽的免疫力、生產(chǎn)力、產(chǎn)品質(zhì)量降低等[16]。

賴星[17]研究表明，綠原酸能夠提高斷奶仔豬血漿T-AOC、T-SOD 活性、GSH-Px 活性，從而在一定程度上緩解斷奶應(yīng)激，促進(jìn)斷奶仔豬健康生長(zhǎng)；劉英等[18]研究表明，綠原酸主要通過(guò)抗氧化促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，體內(nèi)體外試驗(yàn)均證明綠原酸具有較強(qiáng)的清除自由基的能力，從而保護(hù)了細(xì)胞膜的完整性，促進(jìn)養(yǎng)分的吸收和利用，有利于促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體健康生長(zhǎng)。

本試驗(yàn)中，日糧中添加不同水平的植物提取物均可有效提高肉雞血清中CAT、T-AOC、T-SOD 和GSH-Px水平，且添加量為500 mg/kg 組的效果最好，各項(xiàng)抗氧化指標(biāo)的結(jié)果均達(dá)最大值，并能顯著降低MDA 含量，從而提高機(jī)體抗氧化的能力，這與在中華鱉[19]、凡納濱對(duì)蝦[20]、小鼠[21]上的研究結(jié)果一致。因?yàn)樯姐y花和黃芩提取物中有效成分綠原酸、黃芩苷可以通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體抗氧化物酶活性、抑制機(jī)體氧化酶活性這兩個(gè)途徑來(lái)緩解氧化應(yīng)激，以使動(dòng)物機(jī)體的抗氧化能力得到提升。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，肉雞飼糧中添加山銀花和黃芩提取物可以提高生長(zhǎng)性能、促進(jìn)免疫器官發(fā)育以及提高血清抗氧化性能，其中添加量為500 mg/kg 時(shí)效果最佳。