王君文，尹啟蒙，李學(xué)艷，易金玉，黃瑩穎，吳文惠, 2, 3, 4，張朝燕, 2, 3, 4*

銀耳多糖為乳化劑制備槲皮素微乳研究

王君文1，尹啟蒙1，李學(xué)艷1，易金玉1，黃瑩穎1，吳文惠1, 2, 3, 4，張朝燕1, 2, 3, 4*

1. 上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306 2. 國(guó)家淡水水產(chǎn)品加工技術(shù)研發(fā)分中心，上海 201306 3. 上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海 201306 4. 農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，上海 201306

研究以銀耳多糖為乳化劑的槲皮素微乳處方和制備工藝。通過(guò)溶解度考察、配伍試驗(yàn)和偽三元相圖的繪制優(yōu)選微乳處方；采用銀耳多糖為天然乳化劑，以油相、混合乳化劑及助乳化劑比例為考察因素，粒徑、載藥量及多分散指數(shù)（PDI）為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化槲皮素微乳處方并對(duì)其性質(zhì)、溶出度及穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。槲皮素微乳處方中油相為三乙酸甘油酯（36%）、乳化劑為銀耳多糖（23%）和聚山梨酯80（23%），助乳化劑為PEG400（18%）；所得微乳外觀均一透明，乳化后平均粒徑為（25.04±0.94）nm，Zeta電位為（?13.20±0.68）mV，PDI為0.311±0.030，載藥量為（30.17±1.02）mg/g；溶出度實(shí)驗(yàn)表明，槲皮素60 min在人工腸液和人工胃液的累積溶出度為87.95%和70.47%；儲(chǔ)存穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)、高速離心和高溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微乳的質(zhì)量穩(wěn)定。槲皮素微乳制備工藝簡(jiǎn)單，可以增加槲皮素的溶解度和溶出度，為相關(guān)制劑的進(jìn)一步研究與開發(fā)提供參考。

槲皮素；銀耳多糖；微乳；偽三元相圖；星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法；溶出度；穩(wěn)定性

槲皮素是一種黃酮類化合物，具有抗病毒、抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、心血管系統(tǒng)保護(hù)等多種功能[1-2]，并且無(wú)致癌、致死等反應(yīng)[3]。但槲皮素的水溶性極差，僅為15.86 μg/mL[4-5]?？诜詹?、生物利用度低是槲皮素主要的缺點(diǎn)。而微乳是水、油、乳化劑和助乳化劑按適當(dāng)?shù)谋壤旌希园l(fā)形成的各向同性，透明，熱力學(xué)穩(wěn)定的分散體系[6]，可以提高難溶性物質(zhì)的溶解度，增加藥物與胃腸道的接觸面積，促進(jìn)藥物的吸收。

微乳體系中乳化劑的使用至關(guān)重要，乳化劑能夠改善乳液中各種構(gòu)成相之間的表面張力，使之形成均勻穩(wěn)定的分散體系。近年來(lái)，銀耳多糖作為一種天然的乳化劑，其乳化性被學(xué)者們廣泛研究。黃曉德等[7]研究了不同溫度、銀耳多糖濃度、pH、NaCl濃度條件下，銀耳多糖對(duì)桉葉油的乳化能力。結(jié)果表明，銀耳多糖對(duì)桉葉油有較好的乳化性。Zhang 等[8]在比較銀耳多糖、魔芋膠和阿拉伯膠的乳化性時(shí)，發(fā)現(xiàn)銀耳多糖具有更好的乳化穩(wěn)定性，可較長(zhǎng)時(shí)間保持乳化效果。張珊珊等[9]將銀耳多糖作為一種乳化劑和增稠劑添加到花生蛋白飲料中，所制備的花生蛋白飲料體系穩(wěn)定，稠度和黏度與市售相當(dāng)。但目前，尚未有報(bào)道將銀耳多糖作為乳化劑來(lái)制備微乳的方法。因此，本實(shí)驗(yàn)以槲皮素為原料藥，以銀耳多糖為天然乳化劑，和合成乳化劑聚山梨酯80（T80）混合使用，來(lái)制備槲皮素微乳。然后通過(guò)星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化處方，以期增大槲皮素的溶解度，為相關(guān)新劑型的研究奠定基礎(chǔ)，同時(shí)為銀耳多糖應(yīng)用于微乳乳化劑中提供參考。

1 材料

1.1 儀器

ZEN3600型納米粒度儀，英國(guó)Malvern公司；85-2型恒溫磁力攪拌器，上海司樂(lè)儀器有限公司；H1650離心機(jī)，湘儀離心機(jī)儀器有限公司；RCZ-8型藥物溶出度儀，上海黃海藥檢儀器有限公司；BSA224S型電子分析天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；XW-80A 型旋渦混合儀，海門市其林貝爾儀器有限公司；L-2130液相色譜儀，日立高新技術(shù)集團(tuán)；TECNAI F30透射電子顯微鏡（TEM），美國(guó)FEI公司。

1.2 試劑

槲皮素原料藥（批號(hào)117-39-5，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96%）、聚乙二醇800（PEG800）、普魯蘭多糖，九鼎化學(xué)科技有限公司；槲皮素對(duì)照品，批號(hào)117-39-5，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%，上海晶純生化科技股份有限公司；銀耳多糖，批號(hào)SQYE20190916，質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%，西安圣青生物科技有限公司；胃蛋白酶、胰蛋白酶，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷酸二氫鉀、氫氧化鈉，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；聚乙二醇400（PEG400），蘭拓生物科技有限公司；阿拉伯膠，阿拉丁生化科技股份有限公司；海藻多糖，索萊寶生物科技有限公司；00號(hào)透明膠囊殼，江蘇長(zhǎng)禾膠囊有限公司；油酸乙酯、三乙酸甘油酯、蓖麻油、大豆油、橄欖油、聚山梨酯20（T20）、T80、乙醇，均購(gòu)于麥克林試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 銀耳多糖的乳化性

銀耳多糖的乳化性測(cè)定參照文獻(xiàn)方法[10]，分別稱取5 mg銀耳多糖、阿拉伯膠、普魯蘭多糖、海藻多糖，加入100 mL的蒸餾水，不斷攪拌，配制成5 mg/mL的溶液，分別取50 mL溶液與等體積的三乙酸甘油酯混合，5000 r/min下均質(zhì)1 min，將液體轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中，60 ℃水浴加熱30 min后冷卻至室溫，于5000 r/min離心5 min，觀察離心管內(nèi)乳濁液的乳化情況。按照以下公式計(jì)算樣品的乳化性（ES）。結(jié)果如表1所示，銀耳多糖的ES值要大于阿拉伯膠、普魯蘭多糖、海藻多糖。表明，銀耳多糖的乳化性要優(yōu)于阿拉伯膠、普魯蘭多糖和海藻多糖。所以，將銀耳多糖作為微乳的乳化劑具有一定的可行性。

ES=/

為乳化層高度，為離心管內(nèi)液體總高度

2.2 槲皮素的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件[11]Waters C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（60∶40）；體積流量1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)374 nm；進(jìn)樣量10 μL；柱溫30 ℃；色譜圖見圖1。

2.2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取槲皮素15 mg于50 mL量瓶中，甲醇溶解稀釋，配制成質(zhì)量濃度為300 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 供試品溶液的配制 精密量取微乳適量，置于100 mL量瓶中，甲醇超聲破乳溶解并定容，搖勻，0.45 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別取對(duì)照品溶液，甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度分別為6、15、30、60、150、300 μg/mL的系列槲皮素對(duì)照品溶液。在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程＝23.546＋2.343 1，2＝0.999 1，線性范圍為6～300 μg/mL。

2.3 槲皮素在輔料中溶解度測(cè)定[12]

采用振搖法測(cè)定槲皮素在油相（油酸乙酯、三乙酸甘油酯、蓖麻油、大豆油、橄欖油）、乳化劑（T80、銀耳多糖、T20）和助乳化劑（乙醇、丙三醇、PEG400、PEG800）中的飽和溶解度。精密稱取上述輔料各2 g于西林瓶中，加入過(guò)量的槲皮素，渦旋混合1 min后，37 ℃下連續(xù)振蕩24 h，于5000 r/min離心15 min，取上清液用甲醇稀釋，按照“2.2”項(xiàng)方法測(cè)定槲皮素的質(zhì)量濃度。

原則上采取對(duì)槲皮素有較高溶解度的油相、乳化劑、助乳化劑作為微乳的組成成分，以防止在儲(chǔ)存過(guò)程中藥物析出結(jié)晶[13]。槲皮素在各種油相、乳化劑和助乳化劑中的飽和溶解度如表2所示。在篩選的油相中，槲皮素在蓖麻油和三乙酸甘油酯中的溶解度最高，分別為2.31、2.08 mg/mL；在篩選的乳化劑中，在T20中的溶解度最高，為24.12 mg/mL；在篩選的助乳化劑中，在PEG400和PEG800中溶解度最高，分別為166.28、72.37 mg/mL?；诮Y(jié)果，最終選擇蓖麻油和三乙酸甘油酯作為油相，PEG400和PEG800作為助乳化劑進(jìn)一步用于處方的篩選。

2.4 配伍試驗(yàn)

2.4.1 油相與乳化劑的篩選 分別將油相（蓖麻油、三乙酸甘油酯）與乳化劑（T80、銀耳多糖、T20）按照質(zhì)量比為1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5渦旋混合5 min，室溫下靜置，取空白微乳1 g，滴入100 mL的蒸餾水，100 r/min磁力攪拌，觀察乳化情況，根據(jù)目測(cè)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行等級(jí)分類[13]。結(jié)果顯示，在考察的用量比例范圍之內(nèi)，三乙酸甘油酯與T80、銀耳多糖、T20配伍后相容性和乳化性能均較好，而蓖麻油與乳化劑配伍后相容性和乳化性能較差，形成白色凝膠物狀，因此選擇三乙酸甘油酯作為油相。因現(xiàn)有的合成乳化劑中不管用于何種給藥途徑，均不同程度地出現(xiàn)各種毒性[14-15]，聚山梨酯類中T20的毒性大于T80，因此選用T80和銀耳多糖作為乳化劑。

2.4.2 助乳化劑的篩選 分別將銀耳多糖和T80與PEG400和PEG800按質(zhì)量比1∶1混合，再將混合物與油相按質(zhì)量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5渦旋混合5 min，室溫下靜置，取空白微乳1 g，滴入100 mL的蒸餾水，100 r/min磁力攪拌，觀察助乳化劑乳化情況。結(jié)果顯示，PEG400和PEG800助乳化性能相似，因PEG400的載藥量較大，且具有與各種溶劑的廣泛相容性，是很好的溶劑和增溶劑，所以選擇PEG400作為助乳化劑。

2.5 偽三元相圖的繪制[16]

通過(guò)偽三元相圖確定銀耳多糖和T80比例，將銀耳多糖和T80以1∶1、2∶1、1∶2混勻，再與PEG400按1∶1混勻，然后按質(zhì)量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1，加入三乙酸甘油酯，磁力攪拌條件下，滴加蒸餾水至形成澄清透明的微乳，記錄臨界變化的加水量。通過(guò)Origin 9.1軟件將臨界點(diǎn)時(shí)三乙酸甘油酯、銀耳多糖、T80、水各自質(zhì)量分?jǐn)?shù)繪制成偽三元相圖，其3個(gè)頂點(diǎn)分別為油相、混合乳化劑、水。將能形成澄清或帶有藍(lán)色乳光的實(shí)驗(yàn)點(diǎn)定為偽三元相圖中可形成微乳的處方點(diǎn)，連接這些點(diǎn)與水相頂點(diǎn)形成的封閉區(qū)域，即為微乳區(qū)[16]，結(jié)果見圖2，微乳區(qū)域面積越大，可形成微乳的處方越佳，最終確定銀耳多糖和T80最佳比例為1∶1。

2.6 星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化處方

2.6.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 星點(diǎn)設(shè)計(jì)是效應(yīng)曲面中常用的設(shè)計(jì)方法，具有試驗(yàn)次數(shù)少、精度高等特點(diǎn)，其應(yīng)用較為成熟[17-18]。本研究選擇對(duì)微乳形成有顯著影響的2個(gè)因素作為考察指標(biāo)，即油相質(zhì)量分?jǐn)?shù)（1）、混合乳化劑與助乳化劑的比例m（2），油相質(zhì)量比范圍為10%～40%，m值為0.5～3.0，兩因素的對(duì)應(yīng)水平見表3。以微乳的載藥量、粒徑以及粒徑的PDI為指標(biāo)，確定最優(yōu)處方。按照表4中處方比例精密稱取油相、混合乳化劑、助乳化劑，渦旋混勻1 min，得空白微乳。精密稱取空白微乳2 g，加入過(guò)量的槲皮素，渦旋混勻1 min，37 ℃下連續(xù)振蕩24 h，得槲皮素微乳。精密稱取槲皮素微乳1 g，加37 ℃水10 mL，100 r/min磁力攪拌至乳化完全，納米粒度儀測(cè)定粒徑和PDI。精密稱取槲皮素微乳0.5 g，5000 r/min離心15 min，取上清液用甲醇稀釋至適宜質(zhì)量濃度，按照“2.2”項(xiàng)的方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算載藥量。

2.6.2 模型擬合和方差分析 使用Design-Expert 8.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸線性擬合，得到2次多項(xiàng)式方程＝0＋11＋22＋312＋412＋522；而以載藥量、粒徑和PDI對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合得到的回歸方程分別為1＝29.99－29.141－25.772＋36.2312＋13.8612＋8.5222，2＝0.998 9，2adj＝0.997 4，＜0.000 1；2＝21.09＋11.901－19.702－7.1312＋5.2212＋14.8022，2＝ 0.980 3，2adj＝0.960 7，＜0.01；3＝0.45＋0.161－0.122－0.05412＋8.6612－0.07622，2＝0.958 7，2adj＝0.950 3，＜0.01。再進(jìn)行方差分析，可知各模型＜0.01，模型水平顯著；失擬項(xiàng)＞0.05，相對(duì)于純水平誤差不顯著；2、2adj均＞0.95。表明2次多項(xiàng)式擬合結(jié)果較好，具有代表性，能客觀準(zhǔn)確地根據(jù)自變量的變化進(jìn)行預(yù)測(cè)[12]。

2.6.3 效應(yīng)面分析 由圖3-a可知，隨著油相比例的增加，微乳的載藥量顯著降低；當(dāng)油相比例一定時(shí)，微乳的載藥量隨著m（混合乳化劑/助乳化劑）值的增加而減小，原因可能是m值越小，PEG400的含量越高，載藥量越大。由圖3-b可知，乳化后的粒徑隨著油相比例的增加而增大，適當(dāng)?shù)販p少油相的比例，增加乳化劑的含量可使微乳的粒徑減小。由圖3-c可知，m值越大，乳化劑含量越高，PDI值越小，微乳體系越穩(wěn)定。根據(jù)擬合方程，Design-Expert 8.0軟件三維效應(yīng)面圖綜合分析結(jié)果，在實(shí)驗(yàn)室范圍內(nèi)以載藥量大小、粒徑和PDI為原則，確定最優(yōu)處方油相（三乙酸甘油酯）、乳化劑（銀耳多糖-T80 1∶1）、助乳化劑（PEG400）質(zhì)量比為36∶46∶18，即1＝35.61，2＝2.63。

2.6.4 最佳處方驗(yàn)證 最佳處方油相（三乙酸甘油酯）、乳化劑（銀耳多糖-T80 1∶1）和助乳化劑（PEG400）的比例為36∶46∶18。測(cè)得的平均粒徑為（25.04±0.94）nm，PDI值為0.311±0.030，最大載藥量為（30.17±1.02）mg/g。結(jié)果見表5，可知實(shí)際值與預(yù)測(cè)值相當(dāng)，所建模型預(yù)測(cè)性良好。

2.7 處方質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.7.1 外觀和形態(tài) 在室溫（20 ℃）下，槲皮素微乳呈現(xiàn)黃色。將微乳濃縮液用蒸餾水稀釋100倍后，可得澄清透明的黃色溶液。取槲皮素微乳適量，37 ℃水稀釋100倍，取適量微乳滴在銅網(wǎng)上，10 min后，用濾紙吸去多余液體，2%磷鎢酸溶液負(fù)染色2 min，晾干后，于透射電鏡下觀察[13]，結(jié)果顯示，微乳液滴較小，呈球形（圖4）。

圖3 因素X1、X2對(duì)槲皮素微乳處方載藥量(a)、粒徑(b)和PDI (c)影響的效應(yīng)面

2.7.2 粒徑、PDI和Zeta電位 取槲皮素微乳0.1 g加入10 mL水中，攪拌均勻，取1 mL加入樣品池，輕輕震搖，放入ZEN3600型納米粒度儀中，測(cè)定粒徑分布及Zeta電位。每份樣品測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果顯示，槲皮素微乳的平均粒徑為（25.04±0.94）nm，PDI值為0.311±0.030，Zeta電位值為（?13.20±0.68）mV。表明所制備的微乳粒徑較小，分布較窄，體系較穩(wěn)定。

圖4 槲皮素微乳TEM圖(100 nm)

2.8 溶出度評(píng)價(jià)

溶出度的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)報(bào)道[11]，分別以人工胃液（simulated gastric fluid，SGF）、人工腸液（simulated intestinal fluid，SIF）、水作為溶出介質(zhì)，體積均為500 mL，溫度為（37.0±0.5）℃，攪拌槳轉(zhuǎn)速為（50±1）r/min。將1 g槲皮素微乳（30 mg槲皮素原料藥）放入00號(hào)透明膠囊殼中，開啟儀器，分別在5、10、20、30、45、60 min取出溶出介質(zhì)5 mL，同時(shí)補(bǔ)足等溫等體積溶出介質(zhì)，按照“2.2”項(xiàng)的方法，測(cè)定槲皮素的含量。同法，將30 mg原料藥加入透明膠囊殼中，按照上述操作測(cè)槲皮素原料藥累積溶出率，繪制溶出曲線，結(jié)果見圖5。由圖可知，SIF和SGF可以顯著提高藥物的溶出速率，10 min時(shí)藥物已基本溶出。60 min時(shí)，槲皮素微乳在SIF、SGF、水中溶出速率已達(dá)到87.95%、70.47%、29.62%，而槲皮素原料藥在SIF、SGF、水中的溶出速率僅為20.09%、13.91%、9.13%。在SIF、SGF、水中，以微乳的形式，槲皮素的溶出速率分別提高了67.86%、56.56%、20.49%，溶出度實(shí)驗(yàn)表明微乳可有效提高槲皮素的溶出速率。

2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局于2006年頒布的《中藥、天然藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》。

2.9.1 儲(chǔ)存穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 將微乳常溫放置60 d，分別于第0、1、3、7、15、30、60 d測(cè)定微乳的粒徑、電位、PDI、載藥量，結(jié)果見表6。30 d時(shí)，微乳的粒徑、電位、PDI、載藥量變化趨于穩(wěn)定，且微乳外觀澄清透明，無(wú)分層現(xiàn)象。儲(chǔ)存穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，所制備的微乳體系較穩(wěn)定。

2.9.2 高速離心實(shí)驗(yàn) 取微乳1 g于10 000 r/min離心15 min，離心后微乳外觀澄清透明，無(wú)沉淀，無(wú)分層現(xiàn)象。

2.9.3 溫度對(duì)微乳穩(wěn)定性的影響 將4份等量微乳分裝玻璃瓶中，擰緊瓶蓋。分別于70、80、90、100 ℃下水浴加熱30 min后，冷卻至室溫。24 h后觀察微乳的外觀、測(cè)定微乳的粒徑及粒徑分布、Zeta電位及藥物含量有無(wú)變化[19]。結(jié)果顯示，外觀上微乳未出現(xiàn)分層、沉淀等現(xiàn)象；70～100 ℃處理后微乳的粒徑由25.04 nm增大到35.78 nm，粒徑分布圖上微乳仍然呈現(xiàn)單峰，但微乳的體積分?jǐn)?shù)減小，微乳的數(shù)量分布略有縮小（圖6），可能熱處理使粒子對(duì)乳化劑的吸附作用減弱，乳膠粒周圍的雙電層減薄，粒子聚并增多。

不同加熱處理后微乳Zeta電位和槲皮素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化如圖7所示，電位由?13.2 mV上升到?9.11 mV；而微乳中槲皮素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)由76.5%降到74.37%，降低2.13%。結(jié)果表明乳液經(jīng)過(guò)熱處理后仍然維持較好的貯藏穩(wěn)定性，所制備的微乳體系較為穩(wěn)定。

3 討論

微乳處方的篩選關(guān)鍵在于合適的油相、乳化劑和助乳化劑。其中，油相的種類影響微乳的乳化效果，而本實(shí)驗(yàn)選擇的三乙酸甘油酯與乳化劑和助乳化劑的配伍效果較好。乳化劑的種類和用量將影響乳滴的粒徑，進(jìn)而影響微乳的穩(wěn)定性。高HLB的乳化劑可以促進(jìn)水包油型微乳的形成及促進(jìn)其在水中的擴(kuò)散。本實(shí)驗(yàn)選擇的T80具有較高的HLB值（15.0），可以抑制P-糖蛋白對(duì)藥物的外排作用[20]，促進(jìn)藥物的吸收。而天然乳化劑銀耳多糖具有一定的分子極性，可以與油滴微表面以范德華力的形式相互結(jié)合，防止液滴之間的聚合[21]，且多糖具有一定的黏度，可以削弱油滴分子之間因布朗運(yùn)動(dòng)而造成的自動(dòng)聚合[22]，有效提高乳液的穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)篩選的助乳化劑PEG400已廣泛應(yīng)用于食品、藥品領(lǐng)域，具有安全性高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，且槲皮素在其中的溶解度最高，選擇其作為助乳化劑對(duì)提高微乳的載藥量及穩(wěn)定性具有重要意義。

圖6 不同溫度處理后微乳的粒徑分布圖

圖7 不同溫度處理后微乳的Zeta電位和槲皮素質(zhì)量分?jǐn)?shù)

傳統(tǒng)微乳中乳化劑濃度過(guò)高引起的毒性是限制其應(yīng)用的主要因素之一。所以，有研究學(xué)者使用天然乳化劑阿拉伯膠來(lái)制備微乳。陳莉等[23]研究阿拉伯膠對(duì)綠原酸自微乳體內(nèi)外性能的影響。結(jié)果表明，含阿拉伯膠的新型綠原酸自微乳在十二指腸、空腸、回腸的吸收量增加，新型綠原酸自微乳可以促進(jìn)綠原酸在小腸的吸收。黃嗣航等[24]在對(duì)比含有阿拉伯膠的新型葛根素自微乳和傳統(tǒng)自微乳性能中發(fā)現(xiàn)，新型葛根素自微乳和傳統(tǒng)自微乳性的自乳化速率基本一致，含阿拉伯膠的自微乳對(duì)葛根素的促進(jìn)吸收效果優(yōu)于傳統(tǒng)自微乳。而阿拉伯膠和銀耳多糖屬于天然乳化劑，且都具有葡萄糖醛酸等結(jié)構(gòu)。所以，含銀耳多糖的槲皮素微乳可能比傳統(tǒng)的槲皮素微乳吸收效果更好，在體內(nèi)應(yīng)用方面具有一定的發(fā)展前景。

溶出度實(shí)驗(yàn)是模擬藥物在體內(nèi)溶出的關(guān)鍵步驟。在溶出度實(shí)驗(yàn)中，在SIF、SGF 60 min時(shí)槲皮素的累積釋放率可達(dá)到87.95%、70.47%，相較于槲皮素原料藥，槲皮素微乳呈現(xiàn)釋放率高的特點(diǎn)。因此，本研究成功制備了含天然乳化劑銀耳多糖的槲皮素微乳，降低了T80的一半用量，提高了槲皮素的溶出度，具有一定的實(shí)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，為天然藥物的研究應(yīng)用提供了新的思路，后續(xù)將從其藥效、臨床應(yīng)用等方面開展研究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Preparation of quercetin microemulsion withpolysaccharide as emulsifier

WANG Jun-wen1, YI Qi-meng1, LI Xue-yan1, YI Jin-yu1, HUANG Ying-ying1, WU Wen-hui1, 2, 3, 4, ZHANG Chao-yan1, 2, 3, 4

1. Food Science School, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China 2. National Freshwater Aquatic Products Processing Technology R&D Center, Shanghai 201306, China 3. Shanghai Seawater Product Processing and Storage Engineering Technology Research Center, Shanghai 201306, China 4. Ministry of Agriculture Aquatic Product Storage Quality and Safety Risk Assessment Laboratory, Shanghai 201306, China

To study the prescription and preparation process of quercetin microemulsion containingpolysaccharide as emulsifier.The prescription was optimized through solubility investigation, compatibility test and ternary phase diagram method.polysaccharide was used as natural emulsifier, the ratio of oil phase, mixed emulsifier and co-emulsifier were used as the examination factors, and particle size, drug loading capacity and polydispersity index (PDI) were used as evaluation indicators. The central composite design-response surface method was used to optimize the formulation of quercetin microemulsion and evaluate its properties, dissolution and stability.The oil phase of the quercetin microemulsion prescription was glycerol triacetate (36%), the emulsifier waspolysaccharide (23%) and T80 (23%), and the co-emulsifier was PEG400 (18%); The resulting microemulsion had uniform and transparent appearance; The average particle size was (25.04 ± 0.94) nm, the potential was (?13.20 ± 0.68) mV, the PDI was 0.311 ± 0.030, and the drug loading was (30.17 ± 1.02) mg/g. The dissolution test showed that the cumulative dissolution rate of quercetin in simulated intestinal fluid and simulated gastric fluid at 60 min was 87.95% and 70.47%. Preliminary stability test, high-speed centrifugation and high-temperature test results showed that the quality of microemulsion was stable.The preparation process of quercetin microemulsion is simple, which can increase the solubility and dissolution of quercetin, and provide reference for further research and development of related preparations.

quercetin;polysaccharide; microemulsion; pseudo-ternary phase diagram; central composite design-response surface method; dissolution; stability

R283.6

A

0253 - 2670(2021)02 - 0378 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.02.010

2020-09-01

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81750110548）

王君文（1996—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿⑿聞┬?、新技術(shù)。Tel: 16621525121 E-mail: wendywww1996@163.com

張朝燕，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿?、新劑型、新技術(shù)。Tel: 15692165855 E-mail: chyzhang@shou.edu.cn

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]