婁 永，許睿珠，張麗萍，謝治深，張振強，徐江雁，李 軍，王 潘

華山參中2個新酰胺類化合物

婁 永1, 2，許睿珠2，張麗萍2，謝治深1，張振強1，徐江雁1，李 軍1*，王 潘1*

1. 河南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥科學(xué)院，河南 鄭州 450046 2. 河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046

研究華山參（漏斗泡囊草干燥根）的化學(xué)成分。采用正相硅膠、Sephadex LH-20、HPLC等色譜手段，對華山參藥材進行分離純化，并利用質(zhì)譜、核磁共振等方法進行化合物結(jié)構(gòu)鑒定。從華山參正丁醇部位初步分離得到3個酰胺類化合物，分別鑒定為-甲?；?-阿魏?；?1,4-丁二胺（1）、-乙?；?-順式阿魏酰基-1,4-丁二胺（2）、-乙?；?-阿魏?；?1,4-丁二胺（3）?；衔?、2為新化合物，分別命名為華山參丁二胺A、華山參丁二胺B；化合物3為首次從泡囊草屬植物中分離得到。

華山參；泡囊草屬；酰胺類化合物；華山參丁二胺A；華山參丁二胺B；-乙酰基--阿魏?；?1,4-丁二胺

華山參為茄科植物漏斗泡囊草Kuang的干燥根，性甘、溫，微苦，有毒，歸肺、心經(jīng)，具有溫肺祛痰、平喘止咳、安神鎮(zhèn)驚的功效[1]，民間常用于治療咳喘、肺癆[2-3]。華山參始載于《本草綱目拾遺》[4]，國內(nèi)外報道其化學(xué)成分已有50余個，主要包括生物堿類、香豆素類、苷類、有機酸、揮發(fā)油以及其他類化合物[5-9]。近10年來，關(guān)于華山參的研究報道較少。本研究擬對華山參95%乙醇提取物的不同萃取部位進行分離鑒定，旨在豐富華山參的化學(xué)成分，為華山參的后續(xù)研究提供參考。初步對正丁醇萃取部位進行分離純化，經(jīng)過反復(fù)硅膠、凝膠柱色譜分離，分離得到3個酰胺類化合物，分別鑒定為-甲?；?-阿魏酰基-1,4-丁二胺（-formyl--feruloyl- putrescine，1）、-乙?；?-順式阿魏酰基-1,4-丁二胺（-acetyl--feruloyl-putrescine，2）、-乙酰基--阿魏?；?1,4-丁二胺（-acetyl-- feruloyl-putrescine，3），化合物1、2為新化合物，分別命名為華山參丁二胺A、華山參丁二胺B，結(jié)構(gòu)見圖1；化合物3為首次從泡囊草屬植物中分離得到。正丁醇萃取部位為酰胺類成分的富集部位，后續(xù)研究工作正在進行中。

1 儀器與材料

Bruker 500 MHz核磁共振儀（Bruker公司），TSQ Alits三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（美國賽默飛公司），Agilent1290超高效液相儀、Agilent1260系列分析及半制備液相（美國Agilent公司），分析柱（綠百草，250 mm×4.6 mm，5 μm），半制備柱（YMC，250 mm×10 mm，5 μm），反相柱色譜填料（YMC-GEL，50 m），Sephadex LH-20凝膠（GE），TLC薄層板和正相柱色譜硅膠均由煙臺黃務(wù)硅膠開發(fā)實驗廠提供，開放柱色譜所用溶劑為分析純，HPLC所用試劑為色譜純，均由國藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)。

本實驗樣品于2017年5月采自河南省確山縣，由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳隨清教授鑒定為茄科植物漏斗泡囊草Kuang，樣品標本（HSS1705）保存于河南中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)BN725實驗室。

2 提取與分離

干燥的華山參藥材10 kg，粉碎，95%乙醇浸提3次（5 L/次，每次浸泡7 d），合并提取液，減壓濃縮得粗浸膏473 g，用1 L的蒸餾水混懸，醋酸乙酯萃取3次（3 L/次）后再用正丁醇萃取3次（3 L/次），減壓濃縮得正丁醇萃取物65 g。正丁醇部位經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），二氯甲烷-甲醇（20∶1～1∶1）梯度洗脫，分成5個部分（Fr. 1～5）。Fr. 2（4.5 g）經(jīng)過反相硅膠柱色譜，甲醇-水（10∶90～90∶10）梯度洗脫，分成4個部分（Fr. 2.1～2.4），F(xiàn)r. 2.2經(jīng)過Sephadex LH-20凝膠柱色譜 [二氯甲烷-甲醇（1∶1）]、RP-HPLC（流動相為30%甲醇，體積流量3 mL/min）進一步純化，分離得到化合物1（2.3 mg，R＝16.2 min）、2（4.3 mg，R＝25.1 min）、3（58.0 mg，R＝29.6 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末（甲醇）。HR-ESI-MS/: 293.149 6 [M＋H]+（計算值為293.148 5，C15H21O4N2），結(jié)合1H-NMR和13C-NMR譜，確定其分子式為C15H20O4N2，不飽和度為7。1H-NMR (500 MHz, CD3OD) 譜中顯示1個甲氧基信號H3.91 (3H, s)，1對反式雙鍵質(zhì)子信號H7.46 (1H, d,= 15.5 Hz), 6.44 (1H, d,= 15.5 Hz)，3個苯環(huán)質(zhì)子信號H7.14 (1H, d,= 1.4 Hz), 7.05 (1H, dd,= 8.0, 1.4 Hz), 6.82 (1H, d,= 8.0 Hz)，1個醛基質(zhì)子信號H8.06 (1H, s)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD) 中顯示15個碳原子信號，結(jié)合DEPT135譜確定該結(jié)構(gòu)具有4個季碳、6個次甲基碳、4個亞甲基碳、1個甲氧基碳。3位和4位的4個質(zhì)子信號重疊，無法準確歸屬。以上數(shù)據(jù)與已知化合物-acetyl--feruloyl-putrescine[10]極為相似，區(qū)別在于已知化合物的甲基（C23.0,H1.93）被化合物1的氫（H8.06）替代，HMBC譜顯示H8.06與C37.2相關(guān)說明該結(jié)構(gòu)末端為醛基，H3.91與C147.9有相關(guān)，說明甲氧基在6′位，H7.14與C148.5, 121.8有相關(guān)，H6.82與C148.5, 121.8有相關(guān)，H7.46與C110.1有相關(guān)，說明苯環(huán)為4′,6′,7′三取代。因此化合物1的結(jié)構(gòu)為-甲?；?-阿魏酰基-1,4-丁二胺，經(jīng)Scifinder檢索，并未發(fā)現(xiàn)該結(jié)構(gòu)相關(guān)文獻報道，命名為華山參丁二胺A，化合物數(shù)據(jù)歸屬見表1，主要HMBC相關(guān)信息見圖2。

化合物2：黃色粉末（甲醇）。HR-ESI-MS/: 307.165 2 [M＋H]+（計算值為307.164 4，C16H23O4N2），結(jié)合1H-NMR和13C-NMR譜，確定其分子式為C16H22O4N2，不飽和度為7。1H-NMR (500 MHz, CD3OD) 譜中顯示1個甲基信號H1.94 (3H, s)，1個甲氧基信號H3.86 (3H, s)，1對順式雙鍵信號H6.64 (1H, d,= 11.5 Hz), 5.85 (1H, d,= 11.5 Hz)，3個苯環(huán)質(zhì)子信號H7.34 (1H, d,= 1.4 Hz), 6.96 (1H, dd,= 8.0, 1.4 Hz), 6.76 (1H, d,= 8.0 Hz)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD) 中顯示16個碳原子信號，結(jié)合DEPT135譜確定該結(jié)構(gòu)具有5個季碳、5個次甲基碳、4個亞甲基碳、1個甲氧基碳、1個甲基碳，3位和4位上4個質(zhì)子信號重疊，無法準確歸屬。以上數(shù)據(jù)與已知化合物-acetyl--feruloyl-putrescine[10]十分相似，不同之處在于雙鍵構(gòu)型，已知化合物的雙鍵為反式H7.44 (1H, d,= 15.7 Hz), 6.42 (1H, d,= 15.7 Hz)，化合物2的雙鍵為順式H6.64 (1H, d,= 11.5 Hz), 5.85 (1H, d,= 11.5 Hz)，同時化合物2的NOESY顯示H6.64與5.85相關(guān)，因此化合物2的結(jié)構(gòu)為-乙?；?-順式阿魏?；?1,4-丁二胺，經(jīng)Scifinder檢索，并未發(fā)現(xiàn)該結(jié)構(gòu)相關(guān)文獻報道，命名為華山參丁二胺B，化合物數(shù)據(jù)歸屬見表1，主要HMBC相關(guān)信息見圖2。

化合物3：黃色粉末（甲醇）。HR-ESI-MS/: 307.165 2 [M＋H]+（計算值為307.164 4，C16H23O4N2），分子式為C16H22O4N2。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.46 (1H, d,= 15.5 Hz, H-3′), 7.14 (1H, d,= 1.6 Hz, H-5′), 7.05 (1H, dd,= 8.2, 1.6 Hz, H-9′), 6.82 (1H, d,= 8.2 Hz, H-8′), 6.44 (1H, d,= 15.5 Hz, H-2′), 3.90 (3H, s, 6′-OMe), 3.31 (2H, m, H-2), 3.21 (2H, m, H-5), 1.95 (3H, s, H-2′′), 1.59 (4H, m, H-3, 4)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 171.9 (C-1′′), 167.8 (C-1′), 148.5 (C-7′), 147.9 (C-6′), 140.6 (C-3′), 126.8 (C-4′), 121.8 (C-9′), 117.3 (C-2′), 115.0 (C-8′), 110.2 (C-5′), 55.0 (6′-OMe), 38.7 (C-2, 5), 26.4 (C-3, 4), 21.1 (C-2′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[10]，故鑒定化合物3為-乙?；?-阿魏?；?1,4-丁二胺。

4 討論

華山參具有止咳平喘、安神鎮(zhèn)驚的功效，常用于寒痰喘咳、心悸失眠易驚、勞損體弱、自汗盜汗，為民間治療咳喘、肺癆的特效藥。本研究對華山參醇提物正丁醇部位化學(xué)成分進行研究，初步分離鑒定了3個酰胺類化合物。其中化合物1、2為新化合物，化合物3為首次從泡囊草屬植物中分離得到，為華山參化學(xué)成分研究提供基礎(chǔ)，亦為其今后開發(fā)利用提供了依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典[S]. 四部. 2020: 146-147.

[2] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編輯委員會. 中華本草[M]. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1999: 294.

[3] 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所. 中藥志 (第1冊) [M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1982: 231-234.

[4] 清?趙學(xué)敏著, 閆志安, 肖培新校注. 本草綱目拾遺[M]. 第2版. 北京: 中國中醫(yī)藥出版社, 2007: 63.

[5] 趙森淼, 侴桂新, 王崢濤. 華山參化學(xué)成分研究 [J]. 中草藥, 2013, 44(8): 938-941.

[6] 李松武, 慶偉霞, 王文領(lǐng), 等. 華山參揮發(fā)油化學(xué)成分分析 [J]. 河南大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2005, 35(3): 34-36.

[7] 陳澤乃, 暢行若, 秦國偉, 等. 華山參化學(xué)成分的研究[J]. 中草藥, 1981, 12(7): 1-6.

[8] 王勇, 慶偉霞, 李松武, 等. 薄層掃描法測定華山參中總東莨菪內(nèi)酯的含量 [J]. 中南藥學(xué), 2005, 3(5): 274-276.

[9] Zhou M G, Ma X Y, Sun J X,. Active fragments-guided drug discovery and design of selective tropane alkaloids using ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry coupled with virtual calculation and biological evaluation [J]., 2017, 409(4): 1145-1157.

[10] Lopatriello A, Previtera R, Pace S,. NMR-based identification of the major bioactive molecules from an Italian cultivar of[J]., 2017, 144: 52-57.

Two new amides from

LOU Yong1, 2, XU Rui-zhu2, ZHANG Li-ping2, XIE Zhi-shen1, ZHANG Zhen-qiang1, XU Jiang-yan1, LI Jun1, WANG Pan1

1. Academy of Chinese Medical Sciences, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China 2. College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

To study the chemical constituents of.The chemical constituents were isolated by chromatography with silica gel, HPLC, Sephadex LH-20. The structures were identified by MS and NMR analyses.Three amides were separated fromand elucidated as-formyl--feruloyl-putrescine (1),-acetyl--feruloyl-putrescine (2) and-acetyl--feruloyl-putrescine (3).Compounds 1 and 2 are new compounds, and compound 3 is separated from the genusfor the first time.

Kuang;; amides;-formyl--feruloyl-putrescine;-acetyl--feruloyl- putrescine;-acetyl--feruloyl-putrescine

R284.1

A

0253 - 2670(2021)02 - 0331 - 04

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.02.004

2020-07-17

國家重點研發(fā)計劃-戰(zhàn)略性國際科技創(chuàng)新合作專項（2020YFE0201800）；河南省科技攻關(guān)項目（202102310183，202102310173）；河南省中醫(yī)藥科學(xué)研究專項課題-重大項目（2018ZYZD12）

婁 永（1993—），男，中藥學(xué)專業(yè)碩士研究生。Tel: 15515883967 E-mail: 2947848344@qq.com

李 軍 Tel: (0371)86253090 E-mail: lijun8828@126.com

王 潘 Tel: 13523501212 E-mail: w.p1008@hotmail.com

[責任編輯 王文倩]